杜麗萍， 康 永， 郝旭亮， 劉 聰， 岳永花

（山西省中醫(yī)藥研究院，山西太原030012）

［科研報(bào)道］

菊杞保肝膠囊對(duì)大鼠亞急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)理

杜麗萍， 康 永， 郝旭亮， 劉 聰， 岳永花*

（山西省中醫(yī)藥研究院，山西太原030012）

目的觀察菊杞保肝膠囊對(duì)大鼠亞急性酒精性肝損傷的防治作用及作用機(jī)理。方法取SPF清潔級(jí)SD大鼠60只，隨機(jī)分為6組，分別為空白組、模型組、對(duì)照藥 （葵花護(hù)肝片）組、菊杞保肝膠囊低、中、高劑量 （0.23、0.46、0.92 kg/g）組，建立大鼠亞急性酒精性肝損傷模型，菊杞保肝膠囊各組及對(duì)照藥水溶液灌胃，給藥30 d后，檢測(cè)大鼠血清中膽固醇 （CHO）、甘油三酯 （TG）、低密度脂蛋白膽固醇 （LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇 （HDL-C）、膽紅素 （TBIL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （AST）及超氧化物歧化酶 （SOD）活性和丙二醛（MDA）水平；ELISA檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子（TNF-α）、前列腺素E2（PGE2）、白介素-6（IL-6）的水平；RTPCR檢測(cè)COX-2 mRNA的表達(dá)及肝組織病理觀察。結(jié)果與模型組比較，菊杞保肝膠囊各劑量組大鼠血清中CHO、TG、LDL-C、ALT、AST、PGE2、TNF-α、IL-6水平降低，COX-2表達(dá)下調(diào)，HDL-C水平升高（P＜0.05或P＜0.01），并可顯著升高中、高劑量組大鼠血清中SOD活性，降低MDA水平 （P＜0.05或P＜0.01）。病理結(jié)果顯示菊杞保肝膠囊各劑量能改善模型大鼠的肝臟組織病理損傷。結(jié)論菊杞保肝膠囊對(duì)大鼠亞急性酒精性肝損傷具有保護(hù)作用，其作用機(jī)理可能與降低血清中PGE2，TNF-α及IL-6量及下調(diào)肝組織COX-2的表達(dá)及抗氧化應(yīng)激有關(guān)。

菊杞保肝膠囊；亞急性酒精性肝損傷；大鼠；血脂；肝功

目前我國由大量酗酒所致的肝損傷呈逐年上升趨勢(shì)，為僅次于病毒性肝炎的第二大肝?。?］。酒精性肝損傷是以肝臟脂肪變性、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，甚至纖維化為特征的一種長(zhǎng)期慢性中毒性肝臟疾?。?］，其主要臨床特征是惡心嘔吐、黃疸、肝臟腫大和壓痛，進(jìn)一步可并發(fā)肝功能衰竭和上消化道出血等［3］。菊杞保肝膠囊為我院的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由澤瀉、葛根、菊花、枸杞子等藥材組成，在治療酒精性肝病效果顯著，毒副作用少，且低成本、高效率、具有開發(fā)價(jià)值。本實(shí)驗(yàn)就菊杞保肝膠囊對(duì)亞急性酒精性肝損傷大鼠的保肝作用進(jìn)行研究探討。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 60只健康SD大鼠，雌性未孕，體質(zhì)量（220±20）g，購于北京華阜康生物科技股份有限公司，許可證號(hào)SCXK（京）2009-0004。清潔恒溫環(huán)境，飼料由醫(yī)科院動(dòng)物研究所提供，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周開始實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 科大創(chuàng)新股份有限公司KDC-2046低速冷凍離心機(jī)；北京普析通用儀器有限責(zé)任公司TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)；日本三洋公司醫(yī)用冷凍冰箱；美國BioTeK公司全自動(dòng)酶標(biāo)儀，多功能微孔讀板儀；LEICA RM2125石蠟切片機(jī)；日本Olympus PM.10AD光學(xué)顯微鏡；日本株式會(huì)社尼康Nikon尼康光鏡顯微照相機(jī)；美國Agilent StratagenePCR儀；全自動(dòng)生化分析儀OLYMPUS-AU640。

1.3 試劑和材料 菊杞保肝膠囊為自制，批號(hào)130705。由菊花、枸杞子、丹參、山楂、黃精、葛根等十味藥材組成。加水煎煮2次，每次1 h，合并濾液，濃縮，干燥，得到干膏，出膏率31.56%，干膏為棕褐色，氣微辛、味苦。大鼠每日給藥量5.1 g/kg（相當(dāng)于生藥量15 g）。52%二鍋頭（北京二鍋頭酒業(yè)股份有限公司，批號(hào)043005）?？ㄗo(hù)肝片 （黑龍江葵花藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)201309004）。CHO、TG、HDL-C、LDL-C試劑盒均購自北京北化康泰臨床試劑有限公司，批號(hào)分別為：20130115、20130112、20130717、20130401?？偰懠t素測(cè)試盒、MDA測(cè)試盒、SOD測(cè)試盒，均購自南京建成生物工程研究所，批號(hào)分別為20130816、20130911、20130916。PGE2、TNF-α、IL-6試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司，批號(hào)分別為1310283、1310318、130325。RT-PCR試劑盒購自上海生工公司；引物由上海生工生物工程有限公司合成。

2 方法

2.1 動(dòng)物模型建立 50只SD大鼠，每天灌胃給予52%二鍋頭10mL/kg，每天1次，連續(xù)4周，復(fù)制亞急性酒精性肝損傷大鼠模型［4］。

2.2 動(dòng)物分組與給藥 （受試藥物灌胃后間隔2 h以上再給予52%二鍋頭） 將50只SD大鼠隨機(jī)分為5組即模型組、陽性對(duì)照組 （葵花護(hù)肝片，0.525 g/kg），菊杞保肝膠囊低劑量組（0.23 g/kg）、中劑量組（0.46 g/kg）、高劑量組 （0.92 g/kg），每組10只。另取10只大鼠為空白組。各組大鼠分別灌胃給予上述劑量的受試藥物；空白組和模型組給予相同劑量的蒸餾水。給藥體積為1 mL/100 g，連續(xù)30 d，每周稱定體質(zhì)量一次，調(diào)整給藥劑量。

2.3 指標(biāo)檢測(cè)及方法

2.3.1 一般情況觀察 觀察實(shí)驗(yàn)過程中各組動(dòng)物的一般情況，包括精神、活動(dòng)狀況、飲食、排便、皮毛等，每周測(cè)1次體質(zhì)量，觀察大鼠的體質(zhì)量變化情況。末次給藥后8 h，稱體質(zhì)量，10%水合氯醛 （0.3 mL/100 g）麻醉，腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min離心，15 min，取上清液制備血清，-20℃保存待檢；分離肝臟組織，稱定，左葉置于10%福爾馬林中固定，右葉迅速放置于液氮中冷凍保存。

2.3.2 肝臟指數(shù) 肝臟指數(shù)（%）=肝臟質(zhì)量 （g）/體質(zhì)量 （g）×100%。

2.3.3 指標(biāo)檢測(cè)方法 檢測(cè)大鼠血脂、肝功及血清中SOD、MDA的水平，總膽紅素 （TBIL）、血清膽固醇（CHO）、血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、甘油三酯 （TG）檢測(cè)均按試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)；采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 （ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）；化學(xué)比色法檢測(cè)大鼠血清中丙二醛 （MDA）、超氧化物歧化酶 （SOD）的水平。

2.3.4 血清PGE2，TNF-α及IL-6的測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) （ELISA）法測(cè)定，按試劑盒說明書進(jìn)行。

2.3.5 COX-2 mRNA的表達(dá) 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)環(huán)氧-2（COX-2）mRNA的表達(dá)，用TRIZOL法提取總RNA，在紫外分光光度計(jì)中測(cè)OD260、OD280值，計(jì)算RNA濃度和含量，OD260/OD280在1.8～2.0，RNA的純度符合實(shí)驗(yàn)要求；檢測(cè)RNA的完整性后采用逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)試劑盒將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；特異性引物分別擴(kuò)增COX-2、β-actin。引物序列（5cy3c）：COX-2正向引物為CTG TAT CCC GCC CTG CTG GT；反向引物為GAG GCA CTTGCG TTG ATG GT［5］。產(chǎn)物210 bp。β-actin（內(nèi)參照）正向引物為GATGGTGGG TATGGG TCA GAA；反向引物為CTA GGA GCC AGG GCA GTA ATC，產(chǎn)物332 bp（均由上海生工公司合成）。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性3 min，然后按94℃，30 s，50℃，30 s，72℃，1 min進(jìn)行28個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠上電泳，溴化乙錠（EB）染色，凝膠成像儀照相記錄。用Quantity One 4.0圖像分析軟件分析。

2.3.6 肝臟組織病理學(xué)檢查 用10%福爾馬林液中固定肝組織標(biāo)本，48 h后常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、HE染色、脫水、透明、封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差 （x±s）表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，組間比較采用方差分析及LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 一般情況 實(shí)驗(yàn)期間，模型組有2只大鼠、葵花護(hù)肝片組1只大鼠、菊杞保肝膠囊中劑量組1只大鼠酒精灌胃誤入氣管死亡，其余全部存活。模型組與空白組比較其皮毛無光澤，有脫毛現(xiàn)象，體質(zhì)量減輕，嗜睡，且反應(yīng)遲鈍，個(gè)別大鼠有被咬傷。中低劑量組相對(duì)模型組大鼠，偶有脫毛，進(jìn)食增多，活動(dòng)相對(duì)較多，食欲和整體狀態(tài)較好。高劑量組與空白組對(duì)比狀態(tài)相近，無死傷。

3.2 菊杞保肝膠囊對(duì)各組大鼠體質(zhì)量和肝臟指數(shù)的影響

與空白組相比，模型組大鼠體質(zhì)量無明顯變化 （P＞0.05），但肝臟指數(shù)增加 （P＜0.05），與模型組相比，菊杞保肝膠囊各劑量組和葵花護(hù)肝片組大鼠體質(zhì)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），而高劑量組和葵花護(hù)肝片組大鼠肝臟指數(shù)減小，與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），見表1。

表1 各組大鼠體質(zhì)量和肝臟指數(shù)的變化 （x±s）

3.3 菊杞保肝膠囊對(duì)各組大鼠血脂的影響 與空白組比較，模型組大鼠血清中CHO、TG、LDL-C水平均顯著升高，HDL-C水平降低（P＜0.01），表明模型復(fù)制成功。與模型組相比，菊杞保肝膠囊各劑量組大鼠血清中CHO、TG、LDL-C水平降低（P＜0.01或P＜0.05）；HDL-C均升高 （P＜0.01），見表2。

表2 各組大鼠血清TBIL、CHO、TG、HDL-C、LDL-C、ALT、AST水平（x±s）

3.4 菊杞保肝膠囊對(duì)各組大鼠肝功能的影響 血清ALT，AST模型組與正常組比較均升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜ 0.01）；菊杞保肝膠囊各組與模型組比較血清ALT，AST有下降，與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01或P＜0.05），見表3。

表3 各組大鼠血清中ALT、AST水平（x±s）

3.5 菊杞保肝膠囊對(duì)各組大鼠血清中SOD、MDA的影響

模型組大鼠血清中SOD水平降低、MDA水平升高，與正常組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）；菊杞保肝膠囊中、高劑量組SOD水平均升高，與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；中、高劑量組MDA水平降低，與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01或P＜0.05）；陽性組 （葵花護(hù)肝片組）SOD水平較升高，與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），而MDA水平有所降低，與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05），見表4。#P＜0.05，##P＜0.01

表4 各組大鼠血清中SOD、MDA水平（x±s）

3.6 菊杞保肝膠囊對(duì)各組大鼠血清PGE2、TNF-α及IL-6的影響 由表5所見模型組血清PGE2，TNF-α及IL-6均升高，與正常組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）；菊杞保肝膠囊各組血清PGE2，TNF-α及IL-6均下降，與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05）。結(jié)果表明菊杞保肝膠囊具有減少炎癥介質(zhì)PGE2，TNF-α及IL-6作用，見表5。

表5 各組大鼠血清PGE2，TNF-α及IL-6水平（x±s）

3.7 菊杞保肝膠囊對(duì)各組大鼠肝組織COX-2mRNA表達(dá)

正常對(duì)照組表達(dá)弱，模型組呈高表達(dá)，與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），見圖1。菊杞保肝膠囊高劑量組COX-2 mRNA表達(dá)下調(diào)，與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），F(xiàn)=27.94。經(jīng)計(jì)算機(jī)Bandscan軟件分析其灰度值，COX-2mRNA灰度值與β-actin灰度值比值為：對(duì)照組 （n=7）為0.196±0.079，模型組 （n=7）為0.421± 0.033，菊杞保肝膠囊高劑量組 （n=6）為0.281±0.046。

圖1 各組COX-2 mRNA在肝組織中的表達(dá)

3.8 菊杞保肝膠囊對(duì)各組大鼠肝臟形態(tài)學(xué)變化及病理學(xué)檢查 肉眼觀察空白大鼠肝臟被膜光滑，明亮有光澤，呈紅褐色。模型組較空白組大鼠肝臟體積明顯增大，包膜緊張，邊緣圓鈍，部分肝臟呈奶黃色，切面油膩，無光澤，與周圍組織有黏連。與模型組比較，菊杞保肝膠囊各組大鼠介于正常組與模型之間，肝臟顏色紅潤(rùn)，被膜較光滑，切面無明顯油膩感，無局灶黃白色變性灶，質(zhì)地接近正常肝組織。肝組織病理學(xué)觀察，光鏡下由圖可見，空白組大鼠肝臟中央靜脈周圍肝細(xì)胞體積未見增大，胞漿致密，肝竇未見異常；與空白組相比，模型組中央靜脈肝細(xì)胞體積明顯增大，胞漿疏松肝竇受壓變窄，并可見大量的紅染物質(zhì)，匯管區(qū)可見大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；菊杞保肝膠囊高、中、低組肝細(xì)胞體積、胞漿疏松程度顯著減小，肝竇受壓程度降低，部分肝細(xì)胞存在脂肪變及核固縮。見圖2。

4 討論

亞急性酒精性肝損傷是人類常見的肝病之一，在我國日益增多，早期癥狀通常表現(xiàn)為脂肪肝，進(jìn)而發(fā)展為酒精性肝炎，后期酒精性肝纖維化和肝硬化，因此肝損傷早期的預(yù)防及治療尤為重要。菊杞保肝膠囊源于我院臨床經(jīng)驗(yàn)方，由枸杞、菊花、葛根等十余種藥味組成，臨床表明其具有解毒保肝的功效，但其作用機(jī)理尚未明確。

ALT、AST作為肝細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶，在氨基酸的合成與分解代謝中起重要作用。在正常情況下活性低，只有極少量釋放入血液中。當(dāng)肝組織受到急性損傷或細(xì)胞膜通透性增加時(shí)，這兩種酶活性顯著增高。當(dāng)肝功能受損時(shí)脂類代謝發(fā)生紊亂，從而導(dǎo)致血脂濃度發(fā)生改變，肝病患者肝細(xì)胞腫脹、變性、壞死，使體內(nèi)激素代謝發(fā)生變化，影響脂類代謝，是反映肝實(shí)質(zhì)性損傷的一個(gè)重要指標(biāo)［6］?，F(xiàn)代研究指出，LDL-C、HDL-C測(cè)定可作為肝功能的輔助參考指標(biāo)［7］。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M與空白組比較，血清中ALT和AST均明顯升高，CHO、TG、LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低，表明大鼠攝入52%北京二鍋頭可成功建立亞急性酒精性肝損傷大鼠模型。經(jīng)杞菊保肝膠囊給藥30 d后，與模型組比較，各給藥組大鼠血清中ALT、AST、CHO、TG、LDL-C水平均顯著降低，HDL-C水平顯著升高，表明杞菊保肝膠囊可改善酒精對(duì)肝組織的損傷作用。

圖2 各組大鼠酒精肝模型肝組織病理學(xué)觀察 （×200）

SOD活性反映了機(jī)體清除氧自由基的能力，MDA的高低反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度。機(jī)體自身有一套抗氧化防御系統(tǒng)，不斷清除新產(chǎn)生的自由基，當(dāng)機(jī)體SOD活性下降、MDA水平增高時(shí)，該防御系統(tǒng)作用減弱或受損，就會(huì)誘發(fā)或加重疾?。?］。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明菊杞保肝膠囊中、高劑量均能降低大鼠血清MDA水平，升高SOD活性，菊杞保肝膠囊高劑量組對(duì)血清MDA水平影響要優(yōu)于各組。

酒精性肝炎發(fā)病中有免疫因素參與，如分離的酒精透明小體和自身肝抗原，可刺激體內(nèi)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和游走移動(dòng)抑制免疫因子活力。有些細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素 （IL）、腫瘤壞死因子（TNF）、前列腺素E2（PGE2）等與酒精性肝炎的發(fā)生有關(guān)。菊杞保肝膠囊各組與模型組比較，血清PGE2、TNF-α及IL-6明顯下降，差別均有顯著性意義，菊杞保肝膠囊具有減少炎癥介質(zhì)PGE2、TNF-α及IL-6作用。

環(huán)氧合酶-2（COX-2）又稱前列腺素合成酶，是前列腺素合成過程中的限速酶，正常情況下在大部分組織中不表達(dá)或極低表達(dá)，而主要表達(dá)在單核細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等與炎癥有密切關(guān)系的細(xì)胞或組織中；在炎癥因子或細(xì)胞因子受到各種刺激的情況下可誘導(dǎo)表達(dá)，參與和加重炎癥反應(yīng)，在炎癥及組織損傷、腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中表達(dá)增高［9-11］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示正常大鼠肝組織中COX-2呈極低表達(dá)，模型組中COX-2表達(dá)明顯增高，使用菊杞保肝膠囊后各組COX-2表達(dá)與模型組相比有明顯降低。提示菊杞保肝膠囊各組在急性肝損傷中起著一定的保護(hù)作用，由于COX-2及其產(chǎn)物PGs體系本身的復(fù)雜性，現(xiàn)有的結(jié)果對(duì)于其在肝損傷方面的作用機(jī)制解釋尚不夠完善，有關(guān)亞急性酒精性肝損傷發(fā)生發(fā)展中炎癥通路的作用及確切機(jī)制仍有待進(jìn)一步探討。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在酒精性肝損傷過程中，逐漸出現(xiàn)脂代謝紊亂和肝功異常，菊杞保肝膠囊可改善脂質(zhì)代謝紊亂，抑制肝組織損傷；長(zhǎng)期大量酒精可刺激肝組織化學(xué)性炎癥介質(zhì)PGE2、TNF-α及IL-6的釋放，促進(jìn)肝組織COX-2的表達(dá)，而菊杞保肝膠囊可以拮抗上述變化，從而減輕酒精導(dǎo)致的肝組織損傷。

［1］王安蓮，石 年.酒精性肝病研究進(jìn)展［J］.安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009，15（6）：454-458.

［2］鄭麗紅，陳冠敏，鄭顯著，等.山楂提取物對(duì)亞急性酒精性肝損傷輔助保護(hù)作用的研究［J］.海峽藥學(xué)，2011，23（12）：34-38.

［3］王寶恩，尹珊珊.酒精性肝病的流行病學(xué)［J］.中華肝臟病雜志，2001，9（5）：312.

［4］陳春曉，朱肖鴻.酒精性肝炎大鼠模型建立及枳棋子的干預(yù)作用［J］.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，17（5）：285-287.

［5］嚴(yán)文偉，周總光，陳友琴，等.急性水腫性胰腺炎大鼠胰腺微血流變化和環(huán)氧合酶-2的表達(dá) ［J］中華肝膽外科雜志，2004，10（4）：252-255.

［6］雷 勇，左 成，王 秦.肝病患者血脂檢測(cè)對(duì)肝功能的評(píng)價(jià)［J］.中外醫(yī)療，2008，27（15）：140-141.

［7］吳愛成，黃國清，唐恒鋒.血脂檢測(cè)對(duì)肝臟疾病診斷的意義［J］.中外醫(yī)療，2010，29（20）：4-6.

［8］冷興文，劉志華，羅書練，等.血清丙二醛和超氧化物歧化酶水平與病情轉(zhuǎn)歸的關(guān)系［J］.中國危重病急救醫(yī)學(xué)，1996，8（10）：598-600.

［9］Samaka R M，Abdou A G，Abd El-Wahed M M，et al.Cyclooxygenase-2 expression in chronic gastritis and gastric carcinoma，correlation with prognostic parameters［J］.JEgypt Natl Canc Inst，2006，18（4）：363-374.

［10］Harada N，Okajima K，Uchiba M，et al.Antithrombin reduces ischemia/reperfusion-induced liver injury in rats by activation of cyclooxygenase-1［J］.Thromb Haemost，2004，92（3）：550-558.

［11］Warford-Woolgar L，Peng C Y，Shuhyta J，et al.Selectivity of cyclooxygenase isoform activity and prostanoid production in normaland diseased Han：SPRD-cy ratkidneys［J］.Am JPhysiol Renal Physiol，2006，290（4）：897-904.

R285.5

：B

：1001-1528（2015）06-1325-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.06.037

2014-07-15

杜麗萍，女，碩士生，研究方向?yàn)橹兴幩幚?。Tel：（0351）2486811，E-mail：297957178@qq.com