彭惠芳，韋忠毅，王延英

(1湖南省藥品審評認證與不良反應監(jiān)測中心，湖南長沙410013; 2湖南圣湘生物科技有限公司，湖南長沙410000)

一種生化校準物溯源驗證方法

彭惠芳1，韋忠毅2，王延英2

(1湖南省藥品審評認證與不良反應監(jiān)測中心，湖南長沙410013; 2湖南圣湘生物科技有限公司，湖南長沙410000)

隨著國內診斷試劑管理逐漸規(guī)范，近幾年國內生產(chǎn)商開始向國際有證參考物質進行溯源，但此過程需要有資質的實驗室且費用昂貴，還有無國際參考標準物的情況。鑒于此，本文建立一種溯源驗證方法，以5’-核糖核苷酸水解酶為例，通過購買知名廠家的參考物質純品，采用稱量法對其進行賦值，然后與同類產(chǎn)品進行臨床比對，偏差均＜5%，即表明該校準物賦值準確，將其溯源至參考物質，此法簡單方便，并能滿足臨床生化檢驗。

生化校準物;溯源;驗證

國際標準化組織 (ISO)早在1999年就頒布了與體外診斷試劑制造商關系密切的ISO 17511《體外診斷醫(yī)療器械生物源性樣品中量的測量校準品和質控物質賦值的計量學溯源性》和ISO 18153《體外診斷醫(yī)療器械生物源性樣品中量的測量校準品和控制物質中酶催化濃度賦值的計量學溯源性》［1］，我國國家食品藥品監(jiān)督管理局也于2007年10月發(fā)布《體外診斷試劑校準品 (物)、質控品 (物)研究技術指導原則 (征求意見稿)》，其中明確校準品應有計量學的溯源要求［2］。溯源性是校準物的一大特性，溯源終點是SI單位，但實際上還存在一大批既無國際參考測量程序，也無國際參考物質的項目，比如5’-核糖核苷酸水解酶(5’-NT)等，需要生產(chǎn)商對其建立“內部”測量程序和校準物為其產(chǎn)品校準品定值。鑒于這些測定試劑盒在臨床生化檢測上應用普遍，需求量也非常大，為了制備有溯源性的校準品，我們將以5’-NT校準品為例進行溯源驗證，報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

東芝TBA-120FR全自動生化分析儀，METTLER TOLEDO萬分之一分析天平 (型號 ME 204)，北京利德曼生化股份有限公司生產(chǎn)的5’-NT測定試劑盒，湖南圣湘生物科技有限公司生產(chǎn)的5’-NT測定試劑盒 (前者使用自身配套的校準品，后者使用自制的校準品)，5’-NT純品購自sigma公司 (CAS 9025-64-3規(guī)格200U/mg)，40份新鮮人血清樣本取自湖南省腫瘤醫(yī)院。

1.2 方法

1.2.1 5’-NT校準品的制備

稱取0．0010g的5＇-NT純品放入1 L燒杯中，并用600～800 mL去離子水溶解，然后轉入1 L容量瓶中，反復沖洗燒杯3次，并將液體一并轉移入容量瓶中。用去離子水定容至1 L，上下反復顛倒5～10次，混勻后裝入聚乙烯瓶中，放置2～8℃存放，備用。取上述溶液按照1:7稀釋混勻，即得標準品，理論濃度為25 U/L。

1.2.2 測試參數(shù)設定

圣湘試劑為:

分析方法:2點線性 反應條件:37℃ 10 min，1cm光徑

波長:546 nm(主)/--(副)分析點:21點～27點

樣品:6 μL R1:200 μL R2:100 μL

利德曼試劑為說明書提供的測試參數(shù)。

2 實驗步驟

2.1 利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)測試自制5’-NT校準品

用利德曼5’-NT測定試劑盒及標準液、東芝TBA-120FR全自動生化分析儀及測試參數(shù)，定標后測定自制5’-NT標準液。每天測定二批，每批重復測四次，連續(xù)測定3 d。測量值與理論值的偏差≤5%時，即符合要求。

2.2 利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)與圣湘5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)比對實驗

選用利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)與圣湘5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)，前者使用自身配套的校準品，后者使用自制的校準品，定標后測定40份新鮮人血清樣本中5’-NT的值。每天一批，每批重復測定二次，共測2 d。要求40份血清樣本測定結果的平均偏差≤5%。

3 實驗結果

3.1 利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)測試自制5’-NT校準品

使用利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)測試自制5’-NT校準品，理論濃度為25 U/L，實測濃度為 24．64，偏差為 -1．44%，變異系數(shù)為1．85%，均小于5%，符合要求。初步驗證該自制5’-NT校準品能夠用于5’-NT測定試劑的校準。結果如表1所示。

表1 自配5’-NT標準品測試結果 (U/L)

3.2 利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)與圣湘5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)比對實驗

選用利德曼5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)與圣湘5’-NT測定試劑盒系統(tǒng)，前者使用自身配套的校準品，后者使用自制的校準品 (賦值25U/L)，同時測試40份新鮮人血清樣本，測定結果的相對偏差均＜5%，符合要求 (結果見表2、表3)。進一步驗證該自制5’-NT校準品能夠用于5’-NT測定試劑的校準，滿足臨床生化檢驗需要。

表2 40份人血清樣本測試結果 (U/L)

續(xù)表

續(xù)表

表3 兩系統(tǒng)樣本測值偏差

續(xù)表

4 分析與討論

目前臨床檢驗量值的溯源性要求主要體現(xiàn)在兩個環(huán)節(jié)［3］，一是產(chǎn)品的校準物定值，二是臨床檢驗結果，對象分別是產(chǎn)品的生產(chǎn)企業(yè)和臨床實驗室。目前絕大多數(shù)臨床實驗室使用商品化的試劑盒，因此企業(yè)生產(chǎn)的校準物的溯源性顯得更為重要。歐盟有關體外診斷用品導則提出的溯源性要求和ISO17511及ISO18153都是針對生產(chǎn)企業(yè)而言，導則要求“校準物和/或質控物的定值，必須通過現(xiàn)有的較高級別的參考測量程序和/或參考物質以保證其溯源性。

ISO對溯源性的定義為測量結果或標準的值通過連續(xù)的比較鏈與一定的參考標準相聯(lián)系的屬性，參考標準通常是國家或國際標準，比較鏈中的每一步比較都有給定的不確定度”［4，5］。作為生產(chǎn)企業(yè)的我們也一直在尋找可溯源的國際標準，為接通聯(lián)系渠道，決定著手校準品賦值工作。校準品賦值工作必須有二個基本條件，首先要有合格的試劑和儀器分析系統(tǒng)，其次要與實際臨床值進行比較，無明顯差異，我們采用與上市同類產(chǎn)品隨機測試40例臨床樣本進行比較。經(jīng)過兩個步驟的實驗研究和對每一個步驟的評估，各項指標均符合要求。5’-NT參考物質標準品是可溯源到sigma公司5’ -NT純品，與國內同類產(chǎn)品無顯著差異，這是可溯源的一條理想途徑之一。

［1］薛玲，林華，于泳．體外診斷試劑產(chǎn)品的量值溯源探討——體外診斷試劑產(chǎn)品的系列研究 (二)［J］．首都醫(yī)藥，2008，(12):7．

［2］高尚先，黃杰．體外診斷試劑標準物質國內外現(xiàn)狀［A］．中國藥學會．2007年全國生化與生物技術藥物學術年會論文集［C］．中國藥學會，2007:7．

［3］王振豐，李宗利，金國紅．實驗室認可量值溯源的理解及應用 ［J］．現(xiàn)代測量與實驗室管理，2006，(06):40-42．

［4］李潔，張穗忠，徐汾蘭．淺談標準物質量值的溯源性［J］．鋼鐵研究，2004，(06):53-55．

［5］倪曉麗．標準物質量值溯源性初探［J］．計量技術，2002，(11):45-61．

R446．1

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1002-2376(2015)05-0006-03

2015-01-09