林 杰， 盧金清， 江漢美， 屠 寒， 許俊潔， 萬麗娟， 郭勝男

（湖北中醫(yī)藥大學(xué)/湖北省藥用植物研發(fā)中心，湖北武漢430065）

天麻鉤藤飲不同劑型對揮發(fā)性成分的影響

林 杰， 盧金清*， 江漢美， 屠 寒， 許俊潔， 萬麗娟， 郭勝男

（湖北中醫(yī)藥大學(xué)/湖北省藥用植物研發(fā)中心，湖北武漢430065）

目的研究天麻鉤藤飲中的揮發(fā)性成分與劑型之間的關(guān)系。方法采用頂空固相微萃取和HS-SPME-GC-MS法對天麻鉤藤飲的粉劑，顆粒劑和分煎顆粒劑的揮發(fā)性成分進(jìn)行對比分析。結(jié)果從粉劑中檢測出揮發(fā)性成分98種，鑒定出52種，占揮發(fā)性成分總量的70.88%，含有量最高的為萜品烯，較高的成分有p-傘花烴、芳樟醇、α-蒎烯和1-石竹烯；從市售顆粒劑中檢測出揮發(fā)性成分35種，鑒定了22種，占揮發(fā)性成分總量的90.82%，含有量較高的成分有棕櫚酸、獼猴桃內(nèi)酯、二十六烷和二十八烷；從分煎顆粒劑中檢測出揮發(fā)性成分24種，鑒定了17種，占揮發(fā)性成分總量的84.85%，含有量較高的成分有鄰苯二甲酸、苯乙酮、芐叉丙酮和避蚊酯。結(jié)論與粉劑相比，天麻鉤藤飲顆粒劑和分煎顆粒劑的揮發(fā)性成分有損失，是否影響治療自閉癥的療效須進(jìn)一步研究。

天麻鉤藤飲；不同劑型；揮發(fā)性成分；自閉癥；頂空固相微萃取

天麻鉤藤飲出自 《中醫(yī)內(nèi)科雜病證治新義》 由天麻、鉤藤、石決明、山梔、黃芩、川牛膝、杜仲、益母草、桑寄生、首烏藤、茯神等11味中藥組成，包括湯劑和顆粒劑。《中國藥典》2010年版一部收載有天麻鉤藤顆粒 （天麻、鉤藤、石決明、梔子、黃芩、牛膝、鹽杜仲、益母草、桑寄生、首烏藤、茯苓），具有平肝熄風(fēng)、清熱安神的功效，用于肝陽上亢引起的失眠、頭痛等［1］。自閉癥又稱孤獨癥，患兒常表現(xiàn)為言語發(fā)育障礙、社會交往困難、興趣范圍狹窄和行為重復(fù)刻板的典型癥狀，常伴有睡眠障礙、胃腸道疾病及癲癇等［2-4］。蘭生榮［5］用天麻鉤藤飲結(jié)合足底按摩治療自閉癥合并睡眠障礙，治療一周后患兒癥狀得到很好的改善。該復(fù)方中的山梔、鉤藤、黃芩、牛膝、益母草、桑寄生都含有揮發(fā)性成分，且其中有很多對自閉癥及相關(guān)癥狀都有較好的療效。鉤藤［6］中含有的石竹烯具有抗焦慮、抗抑郁、抗炎及祛痰的作用。山梔中的芳樟醇對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有重要作用，具有提高睡眠質(zhì)量、抗驚厥、抗抑郁、提高記憶功能等多種作用［7］。此外，山梔子還可保肝利膽、治療黃疸型肝炎［8］。但是無論是湯劑還是顆粒劑都不能將復(fù)方中的揮發(fā)性成分很好的加以利用。因此，研究天麻鉤藤飲中的揮發(fā)性成分對充分利用這一復(fù)方制劑以及選擇合理的劑型提供了實驗依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Agilent6890/5973型氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Hewlett-Packard公司）；手動頂空固相微萃取裝置（德國IKA公司）；65μMPDMS/DVB萃取纖維頭 （美國 Supelco公司）；頂空瓶（5 mL）；電子天平 （北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；電子調(diào)溫電熱套 （天津市泰斯特儀器有限公司）；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 材料 天麻、鉤藤、石決明、山梔子、黃芩、川牛膝、杜仲、益母草、桑寄生、首烏藤、茯神（藥材均來源于武漢金藥堂大藥房），以上藥材均經(jīng)過湖北中醫(yī)藥大學(xué)生藥教研室張秀橋教授鑒定，符合 《中國藥典》2010年版項下標(biāo)準(zhǔn)。另購買按《中國藥典》方法制得的天麻鉤藤顆粒 （以下簡稱顆粒劑1），及按分煎制得的天麻鉤藤顆粒 （以下簡稱顆粒劑2）。

2 方法與結(jié)果

2.1 頂空固相微萃取條件

2.1.1 復(fù)方原藥材粉末 按照復(fù)方比例稱取處方量中藥，經(jīng)粉碎后混合均勻。經(jīng)過對取樣量、萃取溫度、平衡時間、萃取時間、解吸附時間等因素進(jìn)行考察，得出了最佳的固相微萃取條件：即取0.3 g復(fù)方粉末置于5 ML頂空瓶中，插入裝有65μMPDMS/DVB纖維頭的手動進(jìn)樣器，90℃下預(yù)平衡15 min，萃取15 min，取出，立即插入氣相色譜儀進(jìn)樣口中，解吸5 min，進(jìn)行GC-MS分析。2.1.2 顆粒劑 分別稱取顆粒劑1及顆粒劑2各0.3 g，按“2.1.1”項下的HS-SPME條件進(jìn)行萃取，隨后進(jìn)行GC-MS分析。

2.2 GC-MS條件

2.2.1 GC條件 HP-5MS色譜柱（30 m×0.25 mm×0.25μm）彈性石英毛細(xì)管柱，進(jìn)樣口溫度為250℃，載氣為高純氦氣 （99.999%），體積流量1.0 mL/min，不分流進(jìn)樣。經(jīng)過反復(fù)摸索最終確定原藥材粉末的程序升溫為：初始溫度為65℃，保留10 min，以5℃/min升溫至175℃；顆粒劑的程序升溫為：初始溫度為65℃，以5℃/min升溫至180℃，溶劑延遲3 min。

2.2.2 MS條件 離子源為EI源；離子源溫度230℃；四級桿溫度150℃；電子能量70 eV；倍增管電壓1.2 kV；接口溫度280℃；質(zhì)量范圍35～550 m/z。

2.3 結(jié)果 采用GC-MS計算機聯(lián)用儀分析復(fù)方中揮發(fā)性化學(xué)成分，經(jīng)化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)及用面積歸一化法從其總離子流圖中計算了各組分的相對百分含有量，按各峰的質(zhì)譜圖，并結(jié)合NIST05譜庫對化學(xué)成分進(jìn)行檢索鑒定。

采用HS-SPME法從復(fù)方原藥材粉末中檢測出揮發(fā)性成分98種，鑒定出52種，占揮發(fā)性成分總量的70.88%，主要包括烯烴類、醇類、醛類、酮類等。其中含有量最高的為萜品烯 （15.54%），含有量較高的成分還有p-傘花烴 （9.86%）、芳樟醇 （4.20%）、蒎 烯 （4.15%）、1-石 竹 烯（4.13%）等。從顆粒劑1中檢測出揮發(fā)性成分35種，鑒定出22種，占揮發(fā)性成分總量的90.82%，其中含有量較高的成分有棕櫚酸 （28.41%）、獼猴桃內(nèi)酯 （9.60%）、三十六烷 （8.77%）、三十八烷 （7.63%）等。顆粒劑2中檢測出揮發(fā)性成分24種，鑒定出17種，占揮發(fā)性成分總量的84.85%，其中含有量較高的成分有鄰苯二甲酸（14.56%）、苯乙酮 （11.84%）、芐叉丙酮（9.57%）、避蚊酯 （8.88%）等。經(jīng)對比發(fā)現(xiàn)，不同劑型的揮發(fā)性成分有很大差異。具體結(jié)果見圖1、圖2、圖3及表1、表2。

圖1 HS-SPME-GC-MS分析復(fù)方原藥材粉末揮發(fā)性成分TIC圖Fig.1 HS-SPME-GC-MS analysis of volatile coMponents in compound raw material powder

圖2 HS-SPME-GC-MS分析顆粒劑1揮發(fā)性成分TIC圖Fig.2 HS-SPME-GC-MS analysis of volatilecoMponents in granule 1

圖3 HS-SPME-GC-MS分析顆粒劑2揮發(fā)性成分TIC圖Fig.3 HS-SPME-GC-MS analysis of volatilecomponents in granule2

3 討論

天麻鉤藤飲具有平肝潛陽、補益肝腎、清熱活血功效，臨床應(yīng)用廣泛。近年來，不少醫(yī)家從辨證論治出發(fā)，運用天麻鉤藤飲治療高血壓病、癲癇、腦血管意外、頸椎病、美尼爾氏綜合征等眾多疾病，取得一定療效［9］。隨著人們對兒童自閉癥的高度關(guān)注，天麻鉤藤飲對自閉癥及其相關(guān)癥狀的治療進(jìn)入人們的視野。西醫(yī)對自閉癥的關(guān)注主要集中在免疫功能低下、炎癥、神經(jīng)遞質(zhì)功能紊亂、氧化應(yīng)激、有毒暴露和受損的排毒、慢性感染、過敏、全身代謝紊亂、營養(yǎng)障礙、感覺異常、植物神經(jīng)功能紊亂、線粒體功能障礙等。但目前西醫(yī)尚無有效治療自閉癥的相關(guān)藥物，主要是一些抗精神病藥、抗癲癇藥等，且都伴隨著一定的不良反應(yīng)，部分藥物還具有依賴性。天麻鉤藤飲中含有的揮發(fā)性物質(zhì)大都具有鎮(zhèn)靜安神、抗驚厥等作用，為其治療自閉癥及其相關(guān)癥狀奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。

表1 復(fù)方原藥材粉末揮發(fā)性成分Tab.1 Volatile components in coMpound raw material powder

天麻鉤藤飲中的山梔、鉤藤、益母草、桑寄生等含有較多的揮發(fā)性成分。研究表明［10］，芳樟醇具有明顯的鎮(zhèn)靜作用，其對中樞神經(jīng)系統(tǒng)，包括睡眠、抗驚厥、降體溫等，有隨著劑量而增強的現(xiàn)象。萜品烯［11］具有抗菌、平喘、止咳、祛痰等作用。p-傘花烴［12］具有利膽、抗菌等作用。蒎烯［13］有較強的抗炎和祛痰作用。石竹烯［14］具有很強的鎮(zhèn)定、強化免疫調(diào)節(jié)等功效，還具有平喘、鎮(zhèn)咳、消炎作用。

由實驗結(jié)果可知，按 《中國藥典》法生產(chǎn)的顆粒劑1中的有效揮發(fā)性成分僅剩棕櫚酸和亞油酸，而按分煎法制得的顆粒劑2中的有效揮發(fā)性成分全部丟失。由此可知 《中國藥典》收載的顆粒劑的制法是有一定的科學(xué)依據(jù)的，但仍有不足之處。雖然兩種顆粒劑相比復(fù)方原藥材粉末產(chǎn)生了較多其他新的物質(zhì)，但這些新的物質(zhì)大多沒有藥理活性。根據(jù) 《中國藥典》中天麻鉤藤顆粒的制備方法可知，除天麻未經(jīng)煎煮外，其余揮發(fā)性物質(zhì)均在制備過程中損失，沒有得到利用。故在選擇劑型時可改變需煎煮過程的湯劑和顆粒劑等劑型。將其制成散劑、丸劑等則能夠充分利用其中有效的揮發(fā)性化學(xué)成分，不僅能夠增加藥物療效，還能簡化制備工藝，節(jié)約成本。

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Preparations of Tianma Gouteng Prescription affect the contents of volatile constituents

LIN Jie， LU Jin-qing*， JIANG Han-mei， TU Han， XU Jun-jie， WAN Li-juan， GUO Sheng-nan
（Hubei University of Chinese Medicine/Research and Development Center of Medicinal Plant in Hubei Province，Wuhan 430065，China）

AIMTo study the connection between volatile components and preparations in Tianma Gouteng Prescription（TGP）.METHODSHeadspace solid phaseMicro-extraction（HS-SPME）combined with gas chromatography and mass spectrometry（GC-MS）were used to the analysis of volatile components in different preparations.RESULTSNinety constituents were detected in TGP powder by HS-SPME-GC-MS，fifty-two constituents of which were identified and accounted for 70.88%of the total volatile constituents.Among the contents of all constituents，carene occupied first place，p-cymol，linalool，α-pinene，and caryophyllene came the second.Thirty components were detected in commercial TGP granulesmade according to pharmacopoeiamethod，thirty-five constituents of which were identified and accounted for 90.82%of the total volatile components.Among all of the constituents containing higher contents were palmitic acid，dihydroactinolide，hexacosane，and octacosane.Twenty-four components were detected in separated-decocted granules，seventeen ofwhich were identified and accounted for 84.85%of the total volatile components.Among all of the constituents，containing higher contents were o-pathalic acid，acetophenone，trans-benzalacetone，and dimethyl phthalate.CONCLUSIONIn comparison with powder，TGP granules and separated-decocted granules lose the volatile components in part，further study is needed whether itwould affect the treatment for autism.

Tianma Gouteng Prescription（TGP）；preparations；volatile components；autism；HS-SPME

R927.2

：A

：1001-1528（2015）05-1005-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.05.017

2014-07-03

林 杰，女，碩士.主要從事中藥及其天然藥物活性成分的研究。Tel：18771102776，E-mail：linjiesl@163.com

*通信作者：盧金清，男，教授，主要從事中藥及其天然藥物活性成分的研究。Tel：（027）68890101，E-mail：ljq59169@sohu.com