謝 凡， 宋 英* ， 袁 燕， 吳 萍

(1. 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都610072;2. 成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都610075)

茵陳(Artemisiae scopariae Herba)為治療黃疸之要藥，以清熱利濕，利膽退黃為主要功效，主要用于治療黃疸以及傳染性黃疸型肝炎，濕溫暑濕、濕瘡瘙癢［1］。茵陳密度較小，質(zhì)地疏松，普通飲片不利于定量小包裝和藥房調(diào)劑［2-4］。壓制飲片對(duì)于小包裝的技術(shù)改進(jìn)是一個(gè)良好的開(kāi)端［5］。茵陳蒿湯由茵陳、梔子、大黃等組成［6］。原方來(lái)源于《傷寒論·辨陽(yáng)明病脈證并治》，具有清熱利濕退黃的功效，臨床主要用于治療濕熱黃疸［7］。茵陳為方中君藥，綠原酸為其主要有效成分之一［8-10］，《中國(guó)藥典》以綠原酸作為茵陳中成分定量測(cè)定的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)選用茵陳為研究對(duì)象，以綠原酸為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)比茵陳壓制前后有效成分的溶出，為壓制飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供參考。

1 儀器與試藥

HP 1100 高效液相色譜儀(配有DAD 檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器、四元梯度泵、在線脫氣裝置，美國(guó)惠普公司)，Agilent Chem Station 色譜工作站(美國(guó)Agilent 公司);依利特C18色譜柱(Hypersil BDS，150 mm×4.6 mm，5 μm，大連依利特分析儀器有限公司);BP211D 分析天平(十萬(wàn)分之一型，德國(guó)賽多利斯公司);101A-3 干燥箱(上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠);永欣TW-2000W 可調(diào)溫電爐(郫縣永結(jié)電器總廠)。

綠原酸對(duì)照品(批號(hào)110737-200415，供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所);茵陳傳統(tǒng)飲片(批號(hào)120701)購(gòu)自四川省中藥飲片有限公司，符合《中國(guó)藥典》2010 年版一部“茵陳”項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定;茵陳壓制中藥飲片(批號(hào)120701)購(gòu)自四川省中藥飲片有限公司;乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 茵陳復(fù)方測(cè)定方法研究［11-14］

2.1.1 色譜條件 依利特Hypersil BDS 色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸溶液(10 ∶90);體積流量1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm，柱溫30 ℃;進(jìn)樣量5 μL。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品2.61 mg，置25 mL 棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度搖勻，即得(0.104 4 mg/mL)。

2.1.3 供試品溶液的制備 按照茵陳蒿湯處方比例稱(chēng)取藥材1 500 g，加10 倍量的水，浸泡30 min，第1 次煎煮保持微沸15 min，第2 次煎煮保持沸騰10 min，濾過(guò)，藥液定容至10 000 mL。精密吸取上述樣品溶液10 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加50% 甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.1.4 陰性樣品溶液的制備 按“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法，制備缺茵陳陰性樣品，作為陰性樣品溶液。

2.1.5 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 按“2. 1. 1”項(xiàng)下色譜條件，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，結(jié)果陰性無(wú)干擾，理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算不低于5 000，供試品中綠原酸色譜峰與相鄰色譜峰分離度﹥1.5，見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品、陰性樣品和供試品的HPLC 圖譜Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances，negative sample and sample

2.1.6 線性范圍考察 分別精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液1、3、5、10、15 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸，計(jì)算回歸方程Y =1 601.617 32X +25.426 76 (r =0.999 3)，結(jié)果表明，在0.104 4 ～1.566 μg 范圍內(nèi)綠原酸峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。

2.1.7 綠原酸的測(cè)定 按上述色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定得茵陳壓制飲片、傳統(tǒng)飲片中綠原酸含有量均值分別為5.772 mg/g、5.105 mg/g。

2.1.8 精密度試驗(yàn) 按上述色譜條件，精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液5 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6 次，記錄綠原酸色譜峰峰面積均值為887.6，RSD 為0.2%，表明精密度良好。

2.1.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按上述色譜條件，精密吸取供試品溶液5 μL，分別于0、2、4、6、8、10 h，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算綠原酸峰面積均值為369.8，RSD 為1.5%，表明供試品溶液在10 h 內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.1.10 重復(fù)性試驗(yàn) 分別制備供試品溶液6 份，按上述色譜條件，注入液相色譜儀，記錄綠原酸色譜峰峰面積，計(jì)算樣品中綠原酸含有量均值為0.041 9 mg/g，RSD 為2.7%，表明方法重復(fù)性較好。

2.1.11 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含有量的樣品制備溶液5 mL (0.104 7 mg/mL)，共6 份，分別精密加入綠原酸對(duì)照品溶液3 mL，按供試品制備方法及色譜條件，測(cè)定，計(jì)算得綠原酸的加樣回收率平均值為100.1%，RSD 為2. 6%，表明該方法的加樣回收率較好。

2.2 單味飲片煎煮質(zhì)量的比較 分別稱(chēng)取茵陳傳統(tǒng)飲片和定量壓制飲片各600 g，兩組，分別作為機(jī)器煎煮組與傳統(tǒng)煎煮組。加15 倍量水，浸泡30 min，第1 次煎煮保持微沸15 min，第2 次煎煮保持沸騰10 min，濾過(guò)，濾液定容至10 000 mL，備用。精密吸取上述樣品溶液5 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液10 μL，注入液相色譜儀，計(jì)算綠原酸量，結(jié)果見(jiàn)表1。由此表明，茵陳壓制飲片使用機(jī)器煎煮和傳統(tǒng)煎煮的綠原酸含有量均比傳統(tǒng)飲片高。

2.3 茵陳蒿湯煎煮質(zhì)量的比較 按茵陳蒿湯處方比例稱(chēng)取6 份，其中茵陳分別選取壓制前、后的飲片，分為機(jī)器煎煮組與傳統(tǒng)煎煮組。按照“2.2”項(xiàng)下煎煮，藥液定容至10 000 mL。分別精密吸取上述溶液10 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液10 μL，注入液相色譜儀，計(jì)算綠原酸量，結(jié)果見(jiàn)表2。由此表明，茵陳壓制飲片使用機(jī)器煎煮和傳統(tǒng)煎煮的綠原酸含有量均比傳統(tǒng)飲片高。

表1 單味煎煮比較結(jié)果(n=6)Tab.1 Comparison result of single herb decoction(n=6)

表2 復(fù)方煎煮比較結(jié)果(n=6)Tab.2 Comparison result of compound decoction (n=6)

2.4 不同時(shí)間點(diǎn)綠原酸溶出曲線比較 分別稱(chēng)取茵陳傳統(tǒng)飲片和定量壓制飲片各100 g，加水2 000 mL (補(bǔ)加吸水量)，浸泡30 min，分別于煎煮5、10、15、20、30、40、50、60 min 取樣100 mL，并補(bǔ)充水體積，藥液濾過(guò)，備用。精密吸取上述樣品溶液5 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。精密吸取供試液10 μL，注入液相色譜儀，計(jì)算綠原酸量，溶出曲線見(jiàn)圖2。

圖2 定量壓制飲片與傳統(tǒng)飲片溶出曲線Fig.2 Comparison chart of chlorogenic acid dissolving amount from compressed pieces and traditional pieces

3 討論

中藥定量壓制飲片工藝已獲得4 項(xiàng)國(guó)家專(zhuān)利成果技術(shù)，符合傳統(tǒng)的中藥應(yīng)用要求，采用壓制技術(shù)，使體積大幅縮小，解決了生產(chǎn)、運(yùn)輸、倉(cāng)儲(chǔ)和藥房調(diào)劑等出現(xiàn)的困擾［15-16］。飲片壓制成塊后，能使飲片揮發(fā)性成分不易散失，提高藥效。同時(shí)，加大了飲片比重，使中藥更易完全浸入水中，避免了漂浮，有利于浸潤(rùn)和煎煮，符合中醫(yī)所說(shuō)的“藥力共出”。對(duì)飲片進(jìn)行壓制，破壞了組織結(jié)構(gòu)，提高了溶出度，壓制飲片沒(méi)有改變其內(nèi)在質(zhì)量。

茵陳定量壓制飲片壓制前后單味煎煮、復(fù)方煎煮、溶出曲線比較結(jié)果表明，壓制中藥飲片水煎液中綠原酸含有量、藥材中含有量及干膏收率均略高于傳統(tǒng)飲片，壓制飲片并不影響茵陳的煎煮效果，且能提高煎煮效率。由對(duì)比溶出曲線圖可知:煎煮時(shí)間在約30 min 之前，壓制飲片綠原酸溶出略高于傳統(tǒng)飲片，說(shuō)明中藥定量壓制飲片能夠保證藥效的穩(wěn)定性，有利于藥效成分的溶出。煎煮時(shí)間在約30 min 之后，壓制飲片和傳統(tǒng)飲片的綠原酸含有量均出現(xiàn)下降趨勢(shì)，證明壓制中藥飲片亦不是隨煎煮時(shí)間增長(zhǎng)有效成分增多，煎煮時(shí)間越長(zhǎng)，反而會(huì)影響藥效。

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