張明文

（江西省峽江縣中醫(yī)院，江西 峽江 331400）

慢性胃炎多由幽門螺桿菌（Hp）感染引發(fā)，發(fā)達(dá)國家為30%～50%，發(fā)展中國家高達(dá)80%以上［1－2］。Hp為慢性胃炎的主要?jiǎng)右?，同時(shí)細(xì)胞毒素、黏附分子、細(xì)胞因子／炎癥遞質(zhì)均參與Hp感染的炎癥反應(yīng)，同時(shí)腫瘤壞死因子α（TNF－α）還被發(fā)現(xiàn)參與了慢性胃炎的病理過程，而誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）產(chǎn)生NO 同為病發(fā)的重要機(jī)制［3－4］。本次研究旨在研究TNF－α、iNOS水平與Hp胃炎相關(guān)性，旨在指導(dǎo)臨床，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2011年2月～2014年1月114例慢性胃炎患者為研究對(duì)象，符合2012年中國慢性胃炎共識(shí)意見［2］中診斷標(biāo)準(zhǔn)，其中男70 例，女44例，年齡22～67歲，平均（41.32±7.45）歲，根據(jù)胃鏡與組織學(xué)檢查結(jié)果分為Hp陽性組（54例）與Hp陰性組（60例），兩組年齡、性別等基線資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），具有可比性?；颊邔?duì)本次研究均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 TNF－α檢測(cè) 放射免疫法測(cè)定，用0.9%氯化鈉沖洗選取的胃黏膜樣本至無血，用分析天平對(duì)濕質(zhì)量進(jìn)行稱重并放入微型玻璃勻漿器中，將0.9%氯化鈉注入，粉碎組織后放置離心機(jī)中，設(shè)置參數(shù)為3 000r／min，持續(xù)離心15 min后提取上清液，保存于－20 ℃冷柜中待檢。組織含量根據(jù)每克濕質(zhì)量算出。最后根據(jù)TNF－α試劑盒說明書嚴(yán)格操作，在BH6020全自動(dòng)γ計(jì)數(shù)器中測(cè)出。

1.2.2 iNOS表達(dá)水平檢測(cè) 以免疫組織化學(xué)法檢測(cè)進(jìn)行測(cè)定，先切片常規(guī)脫蠟至水，尿素消化30 min，10 ml／L過氧化氫封閉內(nèi)源酶0.5h，正常羊血清在37 ℃下放置0.5h，后滴加一抗4 ℃放至隔天，將生物素羊抗兔IgG（1∶100）37 ℃40min，滴入ABC 復(fù)合物（1∶100）37℃40min，DAB顯色后蘇木精襯染，脫水透明封片，分為PBS置換一抗（陰性對(duì)照組）與明確5－HT 染色陽性小鼠小腸切片（陽性對(duì)照組）。光鏡輔助下400視野觀察每片中相對(duì)染色強(qiáng)、陽性細(xì)胞多的部位，得出陽性細(xì)胞所占比重，將400視野內(nèi)陽性細(xì)胞占有面積比例進(jìn)行綜合［5－6］。最終免疫組化結(jié)果判定為染色陽性信號(hào)處于細(xì)胞值，且顏色為棕黃到黃色。

1.3 觀察指標(biāo) ①對(duì)比Hp 陽性組與Hp 陰性組TNF－α、iNOS水平；②分析胃黏膜炎癥程度，輕度：炎癥細(xì)胞輕度浸潤(rùn)，占胃黏膜全層1／3；中度：炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)處于1／3～2／3之間；重度：炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)面積基本達(dá)全黏膜層，同時(shí)伴胃小凹、黏膜上皮壞死等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料采用（±s）表示，組間對(duì)比采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P ＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TNF－α、iNOS 水平對(duì)比 Hp 陽 性 組TNF－α水平及iNOS表達(dá)均高于Hp陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.001），提示胃炎的病發(fā)與TNFα、iNOS居較高水平相關(guān)，可作用臨床診斷指標(biāo)。見表1。

表1 兩組TNF－α、iNOS水平對(duì)比 （±s）

表1 兩組TNF－α、iNOS水平對(duì)比 （±s）

組別 n TNF－α（ng／mg）iNOS（%）Hp陽性組 54 1.41±0.33 69.34±6.10 Hp陰性組 60 0.64±0.22 21.94±3.87 t 14.790 50.043 P ＜0.001 ＜0.001

2.2 胃黏膜炎癥程度在兩組中分布對(duì)比 Hp 陽性組、Hp陰性組胃黏膜炎癥嚴(yán)重程度的分布不同，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝57.014，P ＜0.001），Hp陽性組以重度分布較多，Hp陰性組以輕度分布較多。見表2。

表2 胃黏膜炎癥程度在兩組分布對(duì)比 （n，%）

3 討論

Hp為革蘭陰性細(xì)菌，對(duì)單核細(xì)胞有刺激作用，外膜成分中含有脂多糖，可使單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞分泌促進(jìn)炎癥遞質(zhì)分泌，同時(shí)鞭毛蛋白也發(fā)揮協(xié)同作用。另外Hp在為乳液與胃黏膜上皮的中性微氧環(huán)境中定植，可立即釋放出VacA、CagA 等毒素，最終可加重炎癥反應(yīng)［6－7］。

TNF－α為單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞受到致炎因子影響后所釋放的細(xì)胞因子，為促炎癥蛋白，可使中性粒細(xì)胞出現(xiàn)移動(dòng)，具體機(jī)制為調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞上黏附分子和中性粒細(xì)胞表達(dá)，還可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞黏附、白細(xì)胞穿出血管壁，導(dǎo)致胃黏膜內(nèi)細(xì)胞損傷，進(jìn)而減少血流量［8－9］。胃黏膜血流是胃黏膜整體防御機(jī)制的重點(diǎn)，因此出血可直接導(dǎo)致胃黏膜損傷。同時(shí)TNF－α能夠作用于靶細(xì)胞膜的磷脂代謝，進(jìn)而導(dǎo)致氧自由基出現(xiàn)，引發(fā)溶酶體破裂，使組織出現(xiàn)損傷和死亡［10］。

NO 主要由一氧化氮合酶（NOS）催化形成，NOS活性變化可使NO 生成量與正常的生物效應(yīng)受到影響。其具有廣泛生物效應(yīng)，具有正反兩面性，一方面有生理功能，同時(shí)又是炎癥遞質(zhì)。正常生理狀態(tài)下，胃黏膜血管內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)元產(chǎn)生的NO 含量較低，主要作用為調(diào)節(jié)閉黏液與胃黏膜微循環(huán)與黏液的分泌，是胃黏膜的重要保護(hù)物質(zhì)。但在炎癥的病理狀態(tài)下，NO過量產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致羥自由基和過氧硝基陰離子的毒性上升，或可引發(fā)正?；蛲蛔?。有研究顯示Hp感染可提高NO 水平，而炎癥細(xì)胞分泌以及大量細(xì)胞因子、白解毒等物質(zhì)的釋放可提高iNOS 表達(dá)。本次研究中Hp陽性患者iNOS 表達(dá)水平顯著高于Hp 陰性，且Hp陽性組中、重度患者顯著高于對(duì)照組，可見iNOS表達(dá)上升是慢性胃炎致病機(jī)制之一，

綜上所述，TNF－α、iNOS 表達(dá)水平上升是胃炎發(fā)病的重要機(jī)制，應(yīng)引起臨床的關(guān)注。

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