王亞娟，謝光磊（.陜西華西制藥股份有限公司，寶雞 703；.東盛科技股份有限公司西安制藥廠，西安 70065）

肺結(jié)核丸質(zhì)量標準研究

王亞娟1，謝光磊2（1.陜西華西制藥股份有限公司，寶雞 721013；2.東盛科技股份有限公司西安制藥廠，西安 710065）

目的 建立肺結(jié)核丸的質(zhì)量標準。方法 采用TLC法對制劑中制何首烏、白及進行定性鑒別；采用HPLC法對制何首烏中的2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷進行定量測定。結(jié)果 薄層色譜鑒別何首烏、白及的斑點清晰，分離效果好，陰性對照無干擾；2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷在6.0～48.0μg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.999 3）。平均回收率為99.0%，RSD為0.30%（n＝9）。結(jié)論 該方法簡單準確，專屬性強，重復(fù)性好，可有效控制該制劑的質(zhì)量。

肺結(jié)核丸；質(zhì)量標準；2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷；TLC；HPLC

肺結(jié)核丸由制何首烏、白及、土鱉蟲3味中藥組成，該品種是在《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第9冊收載的肺結(jié)核丸（標準編號：WS3－B－1799－94）基礎(chǔ)上開發(fā)的中藥［1］；具有斂陰補肺的功效；臨床上用于治療肺空洞、肺出血。肺結(jié)核丸原部頒質(zhì)量標準中［鑒別］項內(nèi)容只有顯微鑒別，專屬性較差，且沒有薄層色譜鑒別、含量測定項目，難以較好地控制產(chǎn)品質(zhì)量。為了保證藥品質(zhì)量，通過實驗研究增加了以何首烏、白及對照藥材為對照的薄層鑒別方法，并采用HPLC法定量測定肺結(jié)核丸中何首烏所含2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷［2－5］。研究結(jié)果表明，所建立的TLC和HPLC法專屬性強，操作簡便可行，重復(fù)性好，可以保證該產(chǎn)品的安全性、有效性、穩(wěn)定性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀（大連依利特科學儀器有限公司），Echrom2000色譜數(shù)據(jù)處理工作站，P200Ⅱ型高壓恒流泵，UV－200Ⅱ型紫外檢測器；BT255 Sartorius電子天平（十萬分之一，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；UV－2410PC紫外分光光度計（無錫科達儀器廠）；KQ－50B超聲波清洗器（250W，20kHz，昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥 對照藥材、對照品均購自中國藥品生物制品檢定所，何首烏（批號121454－200401）、白及（批號121262－0301）、2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷（批號110844－200003）；肺結(jié)核丸（批號080801，080802，080803）及陰性樣品均自制。薄層層析用硅膠G（青島海洋化工集團）；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；哇哈哈純凈水。

2 薄層鑒別

2.1 何首烏的薄層色譜鑒別 取本品，研細，稱取2g，加乙醇35mL，加熱回流1h，濾過，濾液濃縮至2mL，作為供試品溶液［2］。另取缺制何首烏的陰性樣品2g，按上述方法制成陰性供試品溶液。再取何首烏對照藥材0.3g，按上述方法制成何首烏對照藥材溶液。分別吸取上述供試品溶液、陰性供試品溶液、對照藥材溶液各5μL，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以苯－乙醇（2∶1）為展開劑，展至約4cm，取出，晾干，再以苯－乙醇（4∶1）為展開劑，展至約7cm，取出，晾干，置于紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照樣品無干擾。

2.2 白及的薄層色譜鑒別 取本品，研細，稱取3g，加甲醇20mL，超聲處理（250W，20kHz）20min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40mL使溶解，再加鹽酸4mL，加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚振搖提取3次，每次30mL，合并提取液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1mL使溶解，作為供試品溶液［2］。另取缺白及的陰性樣品3g，制成陰性供試品溶液。再取白及對照藥材2g，按上述方法制成對照藥材溶液。分別吸取上述供試品溶液、陰性供試品溶液各10μL、對照藥材溶液5μL，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外光燈（365nm）下檢視。結(jié)果供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照樣品無干擾。

3 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷的含量測定

3.1 色譜條件 Hypersil BDS C18（200mm×4.6mm， 5μm）色譜柱；流動相為乙腈－水（25∶75）；檢測波長320nm；體積流量：0.8mL·min－1；柱溫：室溫；進樣量：10μL。2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷峰的保留時間為5.4min，理論板數(shù)按2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷峰計算均大于2 000，2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷及其他物質(zhì)峰的分離度均大于1.5，符合要求。

3.2 對照品溶液的制備 取2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成1mL含15μg的對照品溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備 取本品水蜜丸，研細，取約0.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入50mL稀乙醇，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流30min，放冷，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，精密吸取續(xù)濾液5mL，置于25mL量瓶中，用稀乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4 陰性對照溶液的制備 按處方量以相同的方法制備不含制何首烏的陰性對照樣品，再取該樣品按3.3項下方法處理，得陰性對照溶液。

3.5 專屬性實驗 精密吸取對照品、供試品和陰性對照溶液各10μL，注入液相色譜儀進行測定。結(jié)果顯示：陰性對照色譜在與2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷對照品及供試品色譜圖相同保留時間處未顯吸收峰，故認為其他成分對測定2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷無干擾。見圖1。

圖1 HPLC圖A.對照品；B.供試品；C.陰性對照品；1.2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.sample；C.negative sample；1.2，3，5，4′－tetrohyoxystilbene－2－O－β－D－glucoside

3.6 線性范圍考察 取2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷對照品3mg，精密稱定，置于50mL量瓶中，加稀乙醇定容至刻度，作為對照品溶液（60μg·mL－1）。分別精密吸取該對照品溶液1，2，4，6和8mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別進樣10μL，記錄峰面積，以進樣質(zhì)量濃度X（μg·mL－1）與峰面積Y回歸，得回歸方程：Y＝504.88 X＋180.65，r＝0.999 3，結(jié)果進樣質(zhì)量濃度在6.0～48.0μg·mL－1范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

3.7 精密度實驗 取3.6中質(zhì)量濃度為12μg·mL－1的對照品溶液各10μL，連續(xù)進樣5次，結(jié)果2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷保留時間的RSD為0.17%，峰面積的RSD為0.83%。

3.8 重復(fù)性實驗 取批號為080801樣品，平行精密量取5份，按3.3項下方法處理測定，結(jié)果2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷的平均含量為7.725mg·g－1，峰面積的RSD為0.28%，表明該方法重復(fù)性較好。

3.9 穩(wěn)定性實驗 取批號為080801的供試品溶液，室溫放置，分別在0，2，4，6，8和12h進樣測定含量，結(jié)果供試品溶液的2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷峰面積在12h內(nèi)基本無變化，峰面積的平均值為7 889.42，RSD為0.94%。

3.10 加樣回收率實驗 取已測定含量的供試品（080801，2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷含量為7.725mg·g－1）9份各0.25g，精密稱定，按高、中、低質(zhì)量濃度分別加入2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷對照品1.50，2.00和2.50mg，各平行3份，按3.3項下方法操作，在3.1項下色譜條件進樣測定峰面積。結(jié)果2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷的平均回收率為99.0%，RSD為0.30%。見表1。

表1 2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷加樣回收率實驗結(jié)果Tab.1 Results of recovery of 2，3，5，4′－tetrohyoxystilbene－2－O－β－D－glucoside （n＝6）

3.11 含量測定 取肺結(jié)核丸樣品3批，按上述方法測定，計算2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品中2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷含量測定結(jié)果Tab.2 Results of the content of 2，3，5，4′－tetrohyoxystilbene－2－O－β－D－glucoside in samples

4 討論

取2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷對照品溶液，以流動相為空白，在UV－2410PC紫外分光光度計上，在200～400nm波長范圍內(nèi)掃描，繪制吸收光譜圖，在320nm處有最大吸收，基線平穩(wěn)，分離效果好。故選擇320nm為檢測波長。

測定2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷時，依《中國藥典》2005年版一部何首烏藥材的含量測定方法［2］，選擇乙腈－水＝25∶75為流動相，結(jié)果表明，峰形良好，基線平穩(wěn)，分離效果較佳。

提取方法考察：在2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷測定中，分別采用加熱回流30min及超聲提取30min［6］對樣品進行處理，測定含量，研究表明，回流30min提取更完全，故采用回流30min的方法。另外，對不同回流提取時間20，30，40和50 min分別進行了考察，結(jié)果表明，加熱回流30min已基本提取完全，故選擇加熱回流30min提取。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準：中藥成方制劑：第九冊［S］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：143.

［2］國家藥典委員會.中國藥典：2005年版［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2005：67，122－123.

［3］廖海民，胡正海，賀定翔，等.制首烏中二苯乙烯苷含量的HPLC測定［J］.西北藥學雜志，2006，21（1）：3－4.

［4］李亞林，張浩.HPLC法測定何首烏中二苯乙烯苷的含量［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2007，（12）：24－25.

［5］王春英，張?zhí)m桐.何首烏中有效成分二苯乙烯苷的研究進展［J］.河北醫(yī)科大學學報，2008，29（1）：157－160.

［6］張國躍，羅定強，吳芳，等.HPLC法測定不同產(chǎn)地首烏延壽片中2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D－葡萄糖苷的含量［J］.西北藥學雜志，2007，22（5）：245－246.

Study on quality standard for Feijiehe Pills

WANG Yajuan1，XIE Guanglei2（1.Shaanxi Huaxi Pharmaceutical Limited Company，Baoji 721013，China；2.Dongsheng Pharmaceutical Technology Limited Company in Xi′an，Xi′an 710065，China）

Objective To investigate the quality standard for Feijiehe Pills.Methods TLC was used to identify Radix Polygonum multiflorum Preparata and Rhizoma Bletillae，and HPLC was used to quantitatively measure 2，3，5，4′－tetrohyoxystilbene－2－O－β－D－glucoside.Results By TLC identification of Rhizoma Bletillae，Polygonum multiflorum，the spots were clear，and no interference was observed；Four hydroxyl 2，3，5，4′－2－2－styrene ＆western－beta－D－glucoside in the range of 6.0－48.0μg·mL－1（r＝0.999 3）demonstrated good linear relationship.The average recovery was 99.0%，and RSD was 0.30%（n＝9）.Conclusion The method is simple，accurate，and with strong specificity and good reproducibility，which shows the method can effectively control the quality of the preparation.

Feijiehe Pills；quality standard；2，3，5，4′－tetrohyoxystilbene－2－O－β－D－glucoside；TLC；HPLC

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.01.007

R917

A

1004－2407（2015）01－0023－03

2014－06－28）