李帥鋒鄭傳柱張 麗蘭才武賀定翔丁安偉

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國家地方聯(lián)合工程研究中心，江蘇南京210023；2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司，貴州凱里556000）

不同產(chǎn)地何首烏藥材的質(zhì)量分析

李帥鋒1鄭傳柱1張 麗1蘭才武2賀定翔2丁安偉1

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心/中藥資源產(chǎn)業(yè)化與方劑創(chuàng)新藥物國家地方聯(lián)合工程研究中心，江蘇南京210023；2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司，貴州凱里556000）

目的：研究不同產(chǎn)地何首烏藥材質(zhì)量，為何首烏藥材適宜產(chǎn)地的確立提供科學(xué)依據(jù)。方法：以何首烏主要含有的二苯乙烯苷和蒽醌類成分為指標(biāo)，通過HCLP法進(jìn)行含量測定并對測定結(jié)果運(yùn)用matlab進(jìn)行相關(guān)性及聚類分析，研究產(chǎn)地差異對何首烏藥材質(zhì)量的影響。結(jié)果：不同產(chǎn)地對何首烏各有效成分的含量影響較大，相關(guān)性分析表明不同產(chǎn)地何首烏藥材中二苯乙烯苷與結(jié)合蒽醌類成分呈顯著正相關(guān)性。聚類分析表明云南、貴州產(chǎn)何首烏質(zhì)量較優(yōu)。結(jié)論：不同產(chǎn)地何首烏有效成分的含量差異較大，故有必要建立不同地域藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以確保何首烏臨床合理、安全的用藥。

何首烏 產(chǎn)地 高效液相色譜 二苯乙烯 蒽醌

何首烏（Polygoni Multiflori Radix，PMR）始載于《開寶本草》，為蓼科植物何首烏Polygonum multiflorum Thunb.的干燥塊根[1]，何首烏分布范圍較廣，主產(chǎn)于黃河以南、長江南北，如貴州、云南、廣東、四川、湖南、河南等省[2]，具有解毒、消癰、截瘧、潤腸通便之功效，用于瘡癰、瘰癘、風(fēng)疹瘙癢、久瘧體虛、腸燥便秘等癥[3]。研究表明，何首烏中二苯乙烯苷具有保護(hù)神經(jīng)、改善記憶、保肝、抗氧化等作用[4-6]。何首烏中蒽醌類成分（主要包括大黃素、大黃素甲醚等）多具有抗菌、消炎、瀉下、抗氧化等生物活性[7-8]，目前認(rèn)為此兩者是何首烏解毒、消癰、潤腸通便的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，且結(jié)合蒽醌瀉下作用強(qiáng)于游離蒽醌[9]。作為目前何首烏質(zhì)量控制的主要成分，2010年版《中國藥典》中對上述兩類成分均有含量測定要求。雖然有文獻(xiàn)研究不同產(chǎn)地何首烏藥材質(zhì)量的差異，但是存在樣品來源少，指標(biāo)性成分少等問題[10-11]。因此，本研究在廣泛收集樣品的基礎(chǔ)上，對18批不同產(chǎn)地何首烏進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，并運(yùn)用matlab對測定結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性、聚類分析，以期為何首烏產(chǎn)地的優(yōu)選提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Waters 2695高效液相色譜儀 （配 Waters 2998檢測器，Empower色譜工作站）；FA1104N電子天平 （上海精密科學(xué)儀器有限公司）；分析天平（SARTORIUS AG；BP211D；d=0.01mg）；DHG-9140A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；乙腈（色譜純，購自德國 Merck公司）；其他試劑均為分析純 （國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚對照品購自成都瑞芬思生物科技有限公司（批號(hào):F-022-130512、D-029-130401、D-004-130315，純度均大于98%）。何首烏樣品由貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司提供，產(chǎn)地見表1，經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)段金廒教授鑒定為蓼科植物何首烏（Polygonum multiflorum Thunb.）的干燥塊根。潤濕切厚片，置于恒溫干燥箱中50℃，16h烘干，粉碎，過四號(hào)篩，備用。

表1 何首烏樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 二苯乙烯苷含量測定

2.1.1 對照品溶液的制備 取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每1mL含0.186mg的溶液，即得。

2.1.2 樣品測定 取不同產(chǎn)地的何首烏樣品粉末，按《中國藥典》2010年版一部何首烏含量測定二苯乙烯苷項(xiàng)下的方法制備供試品溶液[3]，每個(gè)樣品平行2份，并按《中國藥典》2010年版一部何首烏含量測定二苯乙烯苷項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，每份平行測定2次，計(jì)算各樣品中二苯乙烯苷的含量[3]，色譜圖見圖1，結(jié)果見表2。

2.2 結(jié)合蒽醌含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 取大黃素、大黃素甲醚對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含54.2μg、18.8μg的溶液，即得。

2.2.2 樣品測定 取不同產(chǎn)地的何首烏樣品粉末，按《中國藥典》2010年版一部何首烏含量測定結(jié)合蒽醌項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，每個(gè)樣品平行2份，并按《中國藥典》2010年版一部何首烏含量測定方法結(jié)合蒽醌項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定，每份平行測定2次，計(jì)算各樣品中結(jié)合蒽醌的含量（結(jié)合蒽醌含量=總蒽醌-游離蒽醌）[3]，色譜圖見圖2，結(jié)果見表2。

2.3 相關(guān)性及主要成分分析 采用Matlab R2014a對18批不同產(chǎn)地何首烏樣品中二苯乙烯苷，結(jié)合蒽醌、游離蒽醌進(jìn)行兩兩相關(guān)性分析。結(jié)果見表3，提示何首烏中二苯乙烯苷和結(jié)合蒽醌呈顯著正相關(guān)。

為了比較不同產(chǎn)地何首烏之間的差異，以何首烏中二苯乙烯苷和結(jié)合蒽醌類成分含量為指標(biāo)，采用Matlab R2014a歐式距離對18份樣品進(jìn)行聚類分析。結(jié)果見圖3。

圖1 二苯乙烯苷對照品（A）和何首烏樣品（B）HPLC圖

圖2 對照品（A）和何首烏樣品（B）HPLC圖（1-大黃素，2-大黃素甲醚）

表2 不同產(chǎn)地何首烏樣品測定結(jié)果

表3 何首烏中主要化學(xué)成分相關(guān)性分析

圖3 不同產(chǎn)地何首烏二苯乙烯苷結(jié)合蒽醌類聚類分析圖

3 討論

本實(shí)驗(yàn)表明，不同產(chǎn)地的何首烏樣品中二苯乙烯苷的含量差異較大，但均達(dá)到藥典要求，其中貴州、云南永勝縣樣品中含量較高；不同產(chǎn)地何首烏樣品中結(jié)合蒽醌含量同樣差異較大，其中湖南、廣西、湖北三地樣品含量低于藥典要求。

由表2可以看出，樣品3、4、5、6、8、9、10、15即貴州余慶、從江、榕江、都勻市和湖南省通道縣、湖南省江華縣、廣西壯族自治區(qū)河池市、四川省阿壩州生產(chǎn)的何首烏中游離蒽醌含量大于結(jié)合蒽醌含量；同時(shí)由相關(guān)性分析可以得出不同產(chǎn)地的樣品中結(jié)合蒽醌類成分與二苯乙烯苷含量具有顯著正相關(guān)性，由于游離蒽醌具有抗菌、消炎、抗氧化等生物活性[7-8]，故僅僅選取二苯乙烯苷和結(jié)合蒽醌呈顯著正相關(guān)的一類成分不足以來評價(jià)何首烏質(zhì)量，可考慮把何首烏藥材中游離蒽醌含量作為評價(jià)何首烏質(zhì)量的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。

由圖3不同產(chǎn)地何首烏中二苯乙烯苷蒽醌類聚類分析結(jié)果可以看出，何首烏可以分為三類:云南省永勝縣、貴州省甕安縣、貴州省普安縣出產(chǎn)的為一類；貴州省凱里市、貴州省威寧縣、貴州省余慶縣、四川省北川縣、四川省阿壩州出產(chǎn)者為第二類；其余產(chǎn)地出產(chǎn)者為第三類。

綜上，產(chǎn)地對何首烏藥材的質(zhì)量影響較大，不同產(chǎn)地的何首烏有效成分含量存在較大差異，綜合其中兩類成分的含量以及聚類分析結(jié)果可以看出云南、貴州兩地的何首烏質(zhì)量較優(yōu)，符合何首烏野生資源的道地區(qū)域分布[12]。由于產(chǎn)地對何首烏藥材的質(zhì)量影響較大，故有必要建立不同地域的何首烏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以確保合理、安全用藥。

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R282.71

A

1672-397X（2015）08-0069-03

李帥鋒（1988—），男，碩士研究生，研究方向：中藥炮制與質(zhì)量控制。

丁安偉，碩士，教授，博士研究生導(dǎo)師。awding105@163.com

2015-04-07

編輯：吳 寧

國家“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2011BAI13B04）；貴州省中藥現(xiàn)代化專項(xiàng)（黔科合中藥字[2013]5059號(hào)）；江蘇省中藥資源產(chǎn)業(yè)化過程協(xié)同創(chuàng)新中心重點(diǎn)項(xiàng)目（ZDXM-1-3）