吳波

長春市疾病預(yù)防控制中心,吉林長春 130033

水是生產(chǎn)生活中不可或缺的重要資源，水質(zhì)的好壞直接影響著人們的生活質(zhì)量和身體健康。近年來，環(huán)境及水資源污染問題日益嚴(yán)重，水的安全問題也引起了人們的廣泛重視。水質(zhì)檢驗(yàn)是檢驗(yàn)水質(zhì)、確保水質(zhì)安全的重要措施，平皿計(jì)數(shù)法是多年來被廣泛采用的水質(zhì)檢測方法，其操作過程復(fù)雜、消毒清洗量大，易出現(xiàn)假陰性結(jié)果[1]。為克服該檢測方法的不足，人們研制出了更為有效的紙片檢測方法。3M 紙片法通過在細(xì)菌生長所需營養(yǎng)成分中附加著色劑，使其比平皿計(jì)數(shù)法等傳統(tǒng)檢測方法更易于判讀[2]，但其應(yīng)用價(jià)值尚待進(jìn)一步證實(shí)。有鑒于此，該文探討了3M 紙片法在水質(zhì)檢驗(yàn)工作中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 檢測材料

高壓蒸汽滅菌器（山東新華醫(yī)療器械公司生產(chǎn)，YXQG02 型）、恒溫培養(yǎng)箱（沈陽利港凈化設(shè)備廠生產(chǎn)，420 型）、3M Petrifilm 檢測紙片（美國3M 公司）、標(biāo)準(zhǔn)菌株（中國生物制品檢定所，大腸桿菌（CMCC44159）、金黃色葡萄球菌（CMCC26001））、該轄區(qū)內(nèi)末梢水樣品、二次加壓水樣品和井水樣品共54份。

1.2 檢測方法

將培養(yǎng)好的大腸桿菌和經(jīng)黃色葡萄球菌制成濃度為109/mL 的菌懸液，由于3M 紙片法和平皿計(jì)數(shù)法判讀菌落數(shù)范圍為101/mL 至102/mL，因此可將菌懸液依次10倍稀釋至101/mL、102/mL，兩種方法標(biāo)準(zhǔn)菌株每個(gè)稀釋度均做8 個(gè)和6 個(gè)平行樣，水樣檢測每種方法均做兩個(gè)平行樣，取其平均數(shù)。

3M 紙片法：在無菌操作下分別取均勻混合的菌懸液1 mL，揭開3M 細(xì)菌數(shù)測試片上層膜后將其垂直滴加在測試片中間位置，隨后蓋上上層膜，使用特制壓板使樣液在圓形培養(yǎng)面積上均勻覆蓋，待培養(yǎng)液凝固后將透明面朝上置于恒溫箱（30 ℃下）內(nèi)培養(yǎng)48 h，將滅菌生理鹽水注入另一張測試紙片作為空白對(duì)照。

平皿計(jì)數(shù)法：在無菌操作下使用滅菌吸管各取菌懸液1 mL，將其注入平皿中，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，通過旋搖使水樣和培養(yǎng)基充分混勻。凝固后翻轉(zhuǎn)器皿至底面朝上，置于恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48 h，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基至另一個(gè)平皿中作為空白對(duì)照。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，采用t 檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株檢測結(jié)果比較

將菌懸液稀釋至101/mL、102/mL 后兩組方法檢測大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的結(jié)果均存在明顯差異，3M紙片法的計(jì)數(shù)結(jié)果多于平皿計(jì)數(shù)法，比較均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1 和表2。

表1 兩種方法標(biāo)準(zhǔn)菌株檢測結(jié)果比較[（），101/mL]

表1 兩種方法標(biāo)準(zhǔn)菌株檢測結(jié)果比較[（），101/mL]

注：與平皿計(jì)數(shù)法比較，*P＜0.05。

表2 兩種方法標(biāo)準(zhǔn)菌株檢測結(jié)果比較[（），102/mL]

表2 兩種方法標(biāo)準(zhǔn)菌株檢測結(jié)果比較[（），102/mL]

注：與平皿計(jì)數(shù)法比較，*P＜0.05。

2.2 水樣檢測結(jié)果比較

采用3M 紙片法檢測末梢水樣品、二次加壓水樣品和井水樣品的平均菌落數(shù)為（32.7±8.31）個(gè)，平皿計(jì)數(shù)法檢測的平均菌落數(shù)（22.9±2.58）個(gè)，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。兩組方法檢測結(jié)果呈正相關(guān)(r=0.6837，P＜0.01)。

3 討論

平皿計(jì)數(shù)檢測法是一種國家標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，常用于檢測生活飲用水的細(xì)菌總數(shù)，其主要缺陷在于操作不夠簡便、配置營養(yǎng)基和消毒清洗工作量大以及不耐高溫、細(xì)菌易出現(xiàn)假陰性結(jié)果等。同時(shí)，該方法的檢驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)報(bào)告精準(zhǔn)度不高，不便于開展衛(wèi)生監(jiān)督工作，也就無法按需要提供相應(yīng)服務(wù)[3]。因此，探求一種更為準(zhǔn)確、靈敏度的水質(zhì)檢測方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。3M Petrifilm檢測紙片法由美國3M 公司所研制，該方法可將細(xì)菌生長過程中所需要的營養(yǎng)成分固定于紙片上，使用時(shí)較方便，同時(shí)其可通過將營養(yǎng)成分中附加著色劑將菌落染成紅色，進(jìn)而更易于判讀，實(shí)用性較突出。與平皿計(jì)數(shù)檢測法相比，3M Petrifilm 檢測紙片法主要具有如下優(yōu)勢[4]：①操作簡便、迅速。傳統(tǒng)平皿計(jì)數(shù)檢測法接種水樣后需傾倒?fàn)I養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，且需要控制其冷凝溫度，操作過程不夠簡便，而采用3M 紙片法檢測時(shí)培養(yǎng)基已在一次性使用的紙片上，僅需接種水樣和壓片即可，因而省去了平皿滅菌和配置制作培養(yǎng)基等操作。通常情況下，采用該方法檢驗(yàn)在不稀釋的情況下只需要1 min 即可完成整個(gè)試驗(yàn)過程，效率明顯快于傳統(tǒng)平皿計(jì)數(shù)檢測法。由此可見，檢測條件有限時(shí)3M 紙片法更適用于各種應(yīng)急檢測。②便于結(jié)果統(tǒng)計(jì)。傳統(tǒng)方法的培養(yǎng)結(jié)果通常是菌落形狀、大小不一，其顏色與營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的背景色相近，辨識(shí)度不高。此外，整個(gè)平皿經(jīng)?？梢姶竺娣e的片狀菌落，不利于觀察和計(jì)數(shù)。而3M 紙片法的菌落大小、形狀較為均衡，在適宜的稀釋梯度下很少發(fā)生菌落重疊現(xiàn)象，并其菌落顏色為顯眼的紅色，辨識(shí)度很高，與營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基存在十分明顯的色差，進(jìn)而為人眼計(jì)數(shù)提供了方便。在菌落數(shù)量多且分布均勻的情況下，可利用紙片上的小方格進(jìn)行計(jì)算（只計(jì)算該方格的數(shù)量），然后將其結(jié)果乘以20 即可獲得最終統(tǒng)計(jì)數(shù)量。③減少了被污染的可能性。采用平皿計(jì)數(shù)法檢測時(shí)隨著熔融次數(shù)增多，其所使用的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的成分和性能會(huì)出現(xiàn)衰變。而采用3M 紙片法進(jìn)行檢測時(shí)，菌落總數(shù)測試片在包裝冷藏良好的情況下其有效期長達(dá)3年。開袋后測試片可隨用隨取，不僅適用于單個(gè)水樣檢測，也適用于大批量的水樣檢測，同時(shí)不會(huì)對(duì)同一袋內(nèi)其他紙片的檢測性能產(chǎn)生影響。

據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道[5]，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌所引起的食物中毒事件高居第1 位和第2 位，是導(dǎo)致食品和水質(zhì)污染的主要病原菌。美國3M 公司所生產(chǎn)的PetrifilmTM 測試片對(duì)以上兩種菌株具有很強(qiáng)的選擇性。國外有學(xué)者曾采用傳統(tǒng)方法和3M 紙片法對(duì)金黃色葡萄球菌進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)后者的特異性較強(qiáng)，檢測十分迅速[6]。吳仲梁等[7]人采用PetrifilmTM 金黃色葡萄球菌測試片進(jìn)行食品檢樣，結(jié)果顯示其檢出率高達(dá)93.3%。該研究分別采用以上兩種方法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌株和隨機(jī)選取的水樣進(jìn)行了檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)3M 紙片法檢測大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的結(jié)果與平皿計(jì)數(shù)法檢測結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），3M 紙片法的計(jì)數(shù)結(jié)果明顯高于平皿計(jì)數(shù)法。菌落總體數(shù)量評(píng)估水質(zhì)是否被污染、飲用后是否會(huì)危害身體健康和生命安全的重要衛(wèi)生指標(biāo)之一，也是衡量日常飲用水是否達(dá)到衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的必檢項(xiàng)目[8]。生活用水的菌落總數(shù)是指水樣品在營養(yǎng)瓊脂上37 ℃（在有氧條件下）經(jīng)培養(yǎng)48 h 后所獲得的1 mL 水體所含有的菌落總數(shù)，是評(píng)價(jià)水污染程度的常用指標(biāo)。該研究發(fā)現(xiàn)，3M 紙片法檢測水樣的平均菌落數(shù)多于對(duì)照組平皿計(jì)數(shù)法檢測結(jié)果（P＜0.05），該研究與相關(guān)報(bào)道相符，提示采用3M 紙片法檢測水質(zhì)結(jié)果準(zhǔn)確，可靠性高，具有一定實(shí)用價(jià)值[9]。

綜上所述，水質(zhì)檢測項(xiàng)目較多，檢測方法及相關(guān)測試儀器也存在差異，應(yīng)在條件允許下操作方便、準(zhǔn)確度好和靈敏度高的測試方法進(jìn)行檢測，以保證水質(zhì)檢測質(zhì)量，為用水安全提供有力保障。采用3M 紙片法檢測水質(zhì)的準(zhǔn)確度高、特異性強(qiáng)，且方便快捷，是一種簡便可靠的水質(zhì)檢測方法，具有推廣應(yīng)用價(jià)值。

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