王躍斌，胡則輝，朱云海，柴學(xué)軍

（浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點實驗室，農(nóng)業(yè)部重點漁場漁業(yè)資源科學(xué)觀測實驗站，浙江舟山 316021）

鹽度對日本黃姑魚生長及非特異性免疫的影響

王躍斌，胡則輝，朱云海，柴學(xué)軍

（浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江省海水增養(yǎng)殖重點實驗室，農(nóng)業(yè)部重點漁場漁業(yè)資源科學(xué)觀測實驗站，浙江舟山 316021）

以初始體重8.36±0.85 g的日本黃姑魚為研究對象，進(jìn)行為期30 d的養(yǎng)殖試驗，研究不同鹽度（分別為鹽度0、6、12、18、24及30）對日本黃姑魚生長、存活和非特異性免疫的影響。結(jié)果顯示，鹽度0組日本黃姑魚從第7天開始停止攝食并出現(xiàn)死亡，至第10天時死亡率達(dá)100%，其余各鹽度組日本黃姑魚生長良好，均無死亡。試驗結(jié)束后，鹽度24組日本黃姑魚的體重及特定生長率最高，顯著高于鹽度6、12和18組（P〈0.05），但與鹽度30組無顯著差異（P〉0.05）；鹽度6組日本黃姑魚體重及特定生長率均最低但與鹽度12、18組無顯著差異（P〉0.05）。試驗結(jié)束后，對各鹽度組日本黃姑魚的腎臟、肝臟、肌肉及鰓中超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、堿性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，鹽度24組日本黃姑魚的腎臟AKP活力顯著低于鹽度6及18組（P〈0.05），但與鹽度12及30組差異不顯著（P〉0.05）；其它各組織中SOD、CAT、AKP和ACP活力在不同鹽度下均未發(fā)現(xiàn)有顯著差異（P〉0.05）。結(jié)果表明，日本黃姑魚對低鹽度的耐受力較強(qiáng)，在鹽度6的條件下經(jīng)過一段時間的適應(yīng)后可以正常生長存活，其適宜的鹽度范圍為18～30。

日本黃姑魚；鹽度；生長；非特異性免疫

日本黃姑魚Nibea japonica屬鱸形目Perciformes、石首魚科Sciaenidae、黃姑魚屬Nibea，俗稱黑毛鲿，分布于我國東海、南海以及日本南部海域，為廣鹽、暖水性大型肉食性魚類[1]，是一種生長速度快、抗病能力強(qiáng)，適合近海網(wǎng)箱養(yǎng)殖和池塘養(yǎng)殖的優(yōu)良品種。目前國內(nèi)外對日本黃姑魚的研究主要集中在苗種繁育、養(yǎng)殖試驗、能量代謝和分子生物學(xué)等方面[2-5]，在基礎(chǔ)生物學(xué)方面的研究較少[6]。

鹽度是影響魚類生長的重要因素之一，與魚類的滲透壓密切相關(guān)，對魚類呼吸代謝、生長、存活及免疫防御影響顯著[7]。非特異性免疫對于維持魚類的機(jī)體健康、抗病防御中具有重要作用，魚體各組織器官中非特異性免疫酶活力的變化一定程度上可以作為反映魚體對不同鹽度脅迫適應(yīng)能力的生理指標(biāo)。國內(nèi)外已報道了鹽度對很多魚類非特異性免疫的影響[8-10]，但對日本黃姑魚非特異性免疫的影響尚未見報道。本文研究了鹽度對日本黃姑魚生長及非特異性免疫酶活性的影響，旨在探討日本黃姑魚在不同鹽度環(huán)境下養(yǎng)殖的可能性，為日本黃姑魚的健康養(yǎng)殖提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗于2014年8-9月在浙江省海水增養(yǎng)殖重點實驗室西閃基地進(jìn)行。試驗用魚取自該基地自行培育的日本黃姑魚。挑選體質(zhì)健壯、規(guī)格整齊、體色正常的日本黃姑魚作為試驗用魚（初始體長8.08±0.37 cm，初始體重8.36±0.85 g）。試驗用養(yǎng)殖容器為有效容積200 L（直徑70 cm，高70 cm）的圓形塑料缸。

1.2 試驗方法

試驗開始前試驗用魚先在塑料缸中暫養(yǎng)7 d。試驗設(shè)鹽度0（淡水組）、6、12、18、24、30（海水對照）共6個鹽度梯度，每個鹽度梯度設(shè)置3個平行組，每個平行隨機(jī)放入日本黃姑魚30ind，并測量初始體重。采用經(jīng)充分曝氣自來水和自然沙濾海水（鹽度30）混合的方式降低鹽度，各組魚馴化方法為：鹽度24、18、12組不經(jīng)過馴化直接放入；鹽度6組從鹽度12開始馴化，以每天降鹽度2的速度馴化至鹽度6；淡水組從鹽度6開始馴化，以每天降鹽度2的速度馴化至鹽度0。試驗期間水溫26～29℃，pH 7.8～8.1，自然光照，連續(xù)24 h充氣，保持水中溶解氧含量大于5.0 mg/L。每天吸污1次，100%換水1次。日投飼量為魚體質(zhì)量的3%～5%，以實際攝食量為準(zhǔn)，分2次投喂。養(yǎng)殖試驗持續(xù)30 d。

1.3 樣品采集及測定

試驗結(jié)束后停飼24 h，測量每個平行組的終末體重和存活魚尾數(shù)。每個平行隨機(jī)挑3 ind魚測量體長并進(jìn)行取樣。取樣前先用丁香酚對試驗魚進(jìn)行麻醉處理，取其腎臟、肝臟、肌肉和鰓組織放入離心管中，再放入液氮中冷凍保存，以上操作均在冰盤中進(jìn)行。所有樣品帶回實驗室后分別測定各組織（腎臟、肝臟、肌肉和鰓）內(nèi)超氧化物歧化酶（SOD）活力，過氧化氫酶（CAT）活力、堿性磷酸酶（AKP）活力及酸性磷酸酶（ACP）活力。組織樣品用手術(shù)剪剪碎，準(zhǔn)確稱取0.2 g于玻璃勻漿管中，加入9倍的生理鹽水后冰水浴條件下機(jī)械勻漿,再用離心機(jī)2 500 r/min離心10 min然后取上清分別稀釋至所需濃度后進(jìn)行酶活的測定。所有酶活力及蛋白含量（蛋白含量測定采用考馬斯亮蘭法）的測定所用試劑盒均購自南京建成生物工程有限公司，測定方法參照試劑盒說明書。SOD酶活力單位定義：每毫克組織蛋白在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時所對應(yīng)的SOD量為1個酶活力單位（U）；CAT酶活力單位定義：每毫克組織蛋白每秒鐘分解1μmol的H2O2的量為1個酶活力單位（U）；AKP酶活力單位定義：每克組織蛋白在37℃下與基質(zhì)作用15 min產(chǎn)生1 mg酚為1個酶活力單位（U）；ACP酶活力單位定義：每克組織蛋白在37℃下與基質(zhì)作用15 min產(chǎn)生1 mg酚為1個酶活力單位（U）。

1.4 計算方法

特定生長率(SGR/%)=(1nWt-1nW0)/t×100

成活率（SR/%）=Nt/N0×100

式中，W0為初始平均體重(g)，Wt為終末平均體重(g)，t為實驗時間(d)，N0為試驗開始時魚尾數(shù)，Nt為試驗結(jié)束時魚尾數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

測定和分析的結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示；實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 鹽度對日本黃姑魚生長及存活的影響

試驗過程中除淡水組外其余各鹽度組日本黃姑魚生長良好，均無死亡，存活率100%。淡水組日本黃姑魚從試驗第6天開始攝食量明顯降低，且體色發(fā)黑，游動變緩；第7天開始停止攝食并出現(xiàn)死亡，死亡率為16.67%；至第10天時死亡率達(dá)100%。日本黃姑魚在不同鹽度下的生長情況見表1。鹽度24組日本黃姑魚的體重及特定生長率最高，顯著高于鹽度6、12和18組（P＜0.05），但與鹽度30組無顯著差異（P＞0.05）；鹽度6組日本黃姑魚體重及特定生長率均最低但與鹽度12、18組無顯著差異（P＞0.05）；鹽度6組日本黃姑魚體長與鹽度12組無顯著差異（P＞0.05），但顯著低于鹽度18、24、30組（P＜0.05）。

表1 不同鹽度下日本黃姑魚生長指標(biāo)Tab.1 The growth index ofN.japonicareared at different salinities

2.2 鹽度對日本黃姑魚不同組織SOD活力的影響

不同鹽度下日本黃姑魚不同組織中SOD活力變化見表2。日本黃姑魚不同組織中SOD活力在不同鹽度下無顯著性差異（P＞0.05）。其中肝臟中的SOD活力顯著高于其它各組織的SOD活力（P＜0.05）；腎臟中的SOD活力跟肝臟、肌肉、鰓中的SOD活力也有顯著差異（P＜0.05）；肌肉和鰓中的SOD活力顯著低于腎臟和肝臟中的SOD活力（P＜0.05），但兩者之間無顯著差異（P＞0.05）。

表2 不同鹽度下日本黃姑魚不同組織中SOD活力變化Tab.2 Changes of SOD activity in different tissues ofN.japonicaat different salinities U/mg prot

2.3 鹽度對日本黃姑魚不同組織CAT活力的影響

不同鹽度下日本黃姑魚不同組織中CAT活力變化見表3。日本黃姑魚不同組織中CAT活力在不同鹽度下無顯著性差異（P＞0.05），其中腎臟及肌肉組中的CAT活力有隨鹽度的升高而略有升高的趨勢。不同組織中的CAT活力大小順序依次為肝臟＞腎臟＞鰓＞肌肉，各組織中CAT活力存在顯著差異（P＜0.05）；其中肌肉中CAT活性含量最低，顯著低于其它各組織（P＜0.05）。

表3 不同鹽度下日本黃姑魚不同組織中CAT活力變化Tab.3 Changes of CAT activity in different tissues ofN.japonicaat different salinities U/mg prot

2.4 鹽度對日本黃姑魚不同組織AKP活力的影響

不同鹽度下日本黃姑魚不同組織中AKP活力變化見表4。鹽度24組中日本黃姑魚腎臟AKP活力顯著低于鹽度6及18組（P＜0.05），但與鹽度12及30組差異不顯著（P＞0.05）；肝臟、肌肉和鰓中AKP活力在不同鹽度下無顯著性差異著（P＞0.05）；不同組織中AKP活力以腎臟中活性最高，顯著高于其余各組織（P＜0.05），鰓次之，肌肉中含量最低。

表4 不同鹽度下日本黃姑魚不同組織中AKP活力變化Tab.4 Changes of AKP activity in different tissues ofN.japonicaat different salinities U/mg prot

表5 不同鹽度下日本黃姑魚不同組織中ACP活力變化Tab.5 Changes of ACP activity in different tissues ofN.japonicaat different salinities U/mg prot

2.5 鹽度對日本黃姑魚不同組織ACP活力的影響

不同鹽度下日本黃姑魚不同組織中ACP活力變化見表5。日本黃姑魚不同組織中ACP活力在不同鹽度下無顯著性差異（P＞0.05）。其中腎臟中的ACP活力顯著高于其它各組織（P＜0.05）；肝臟和鰓中的ACP活力次之，且兩者之間無顯著差異（P＞0.05）；肌肉中的ACP活性最低，顯著低于其它各組織（P＜0.05）。

3 討論

3.1 鹽度對日本黃姑魚生長及存活的影響

鹽度是魚類生活中重要的環(huán)境因子，鹽度的變動對魚類的新陳代謝具有明顯的影響。鹽度發(fā)生變化時，魚類需要消耗大量的能量進(jìn)行滲透壓調(diào)節(jié)等一系列生理生化過程，加速體內(nèi)新陳代謝，增大了魚體的能量消耗，從而影響魚類的生長情況[11]。如果魚體長期處于低鹽或者高鹽狀態(tài)，將會導(dǎo)致魚體能量收支失衡，使其抵抗力下降，容易引起魚體死亡[12]。莊平等[13]研究指出，廣鹽性魚類在環(huán)境鹽度變化過程中會出現(xiàn)浮頭、游動減少和攝食活動降低等適應(yīng)性行為，且隨鹽度脅迫的量度和強(qiáng)度不同，對魚體造成的傷害也存在差異。本試驗結(jié)果顯示，除淡水組外，其余各鹽度組的日本黃姑魚均可長期生長存活。淡水組日本黃姑魚從試驗第6天開始攝食量明顯降低，且體色發(fā)黑，游動變緩；第7天開始停止攝食并出現(xiàn)死亡，死亡率為16.67%；至第10天時死亡率達(dá)100%，這種適應(yīng)性行為跟上述研究結(jié)果類似，但也有可能是試驗過程中從鹽度6馴化至淡水時用時過短，從而導(dǎo)致魚體死亡，具體情況還有待進(jìn)一步研究。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，日本黃姑魚在不同鹽度梯度下養(yǎng)殖30 d后，鹽度24組日本黃姑魚的體重及特定生長率最高，顯著高于鹽度6、12和18組（P＜0.05），但與鹽度30組無顯著差異（P＞0.05）；鹽度6組日本黃姑魚體重及特定生長率均最低但與鹽度12、18組無顯著差異（P＞0.05），說明日本黃姑魚在鹽度范圍6～18之間生長狀況無顯著差別，均可正常生長；而其最適的鹽度范圍為18～30，在該鹽度范圍內(nèi)，可能有利于日本黃姑魚將更多的能量用于生長。

3.2 鹽度對日本黃姑魚非特異性免疫的影響

SOD和CAT是生物機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶。SOD普遍存在于需氧生物的組織細(xì)胞中，其功能是將機(jī)體內(nèi)超氧陰離子自由基(O2-·)歧化成H2O2和O2，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。CAT可以將H2O2分解H2O為和O2，從而使細(xì)胞免于遭受過氧化氫的毒害，SOD和CAT二者的協(xié)同作用可以清除細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的過量的超氧陰離子自由基，對生物體具有重要保護(hù)功能[14]。VIARENGO[15]等研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)境條件的變動如水溫、鹽度、溶解氧等均可引起魚體抗氧化酶活性的變化。王曉杰等[16]對許氏平鲉Sebastes schlegelii的研究發(fā)現(xiàn)，許氏平鲉血液中SOD、CAT的活力隨海水鹽度降低呈逐漸上升趨勢；房子恒等[17]對經(jīng)長期低鹽度脅迫的半滑舌鰨Cynoglossus semilaevis研究發(fā)現(xiàn)，不同鹽度條件下半滑舌鰨幼魚組織中SOD、CAT出現(xiàn)顯著變化，肝臟中SOD、CAT含量顯著高于其它組織；但王妤等[18]對點籃子魚Siganus guttatus經(jīng)40 d不同鹽度馴養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，點籃子魚肝臟、腎臟和肌肉中SOD、CAT酶活性在不同鹽度下無顯著性差異（P＞0.05），且肝臟中SOD、CAT含量顯著高于其它組織；這說明肝臟是進(jìn)行氧化反應(yīng)較多的組織，所以其中的抗氧化酶活力較高[19]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，日本黃姑魚在不同鹽度條件下養(yǎng)殖30 d后，日本黃姑魚中腎臟、肝臟、肌肉和鰓中SOD、CAT活力均無顯著性差異（P＞0.05），且肝臟中SOD、CAT含量顯著高于其它組織，跟王妤等[18]對點籃子魚的研究結(jié)果類似。

磷酸酶是一種催化各種含磷化合物水解的酶類，根據(jù)它們催化作用的最適pH特性，可分為堿性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）。磷酸酶具有非常重要的生理功能，是生物體內(nèi)重要的解毒體系，它們能通過調(diào)節(jié)蛋白的去磷酸化，在一些營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收、轉(zhuǎn)運過程中起著重要作用[20]。磷酸酶與水產(chǎn)動物機(jī)體的生長密切相關(guān)，詹付鳳等[21]用重金屬鎘對鯽魚Carassias auratus進(jìn)行致毒試驗時發(fā)現(xiàn)，在重金屬鎘高濃度長時間脅迫下，對鯽魚腸、肝胰臟和鰓中AKP和ACP酶活性有明顯的抑制作用；杜啟艷等[22]對泥鰍Misgurnus anguillicaudatus進(jìn)行饑餓和再投喂試驗發(fā)現(xiàn)泥鰍肝臟、肌肉和消化道中的AKP和ACP酶活性發(fā)生明顯變化。房子恒[17]等對半滑舌鰨幼魚研究中發(fā)現(xiàn)，在不同鹽度條件下半滑舌鰨幼魚組織中除肌肉ACP活力無顯著差異外（P＞0.05），鰓、肝臟和腎臟中的AKP和ACP活力均出現(xiàn)明顯變化。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，除生活在鹽度24中日本黃姑魚中腎臟AKP活力顯著低于鹽度6及18組外，肝臟、肌肉、鰓中AKP和ACP及腎臟ACP活力均無顯著差異（P＞0.05），跟房子恒等[17]對半滑舌鰨的研究結(jié)果并不一致，這可能跟不同魚種對鹽度的適應(yīng)能力不一樣或者實驗方法不同有一定的關(guān)系，具體情況還需進(jìn)一步研究。

通過本試驗的研究可以發(fā)現(xiàn)，鹽度6組日本黃姑魚體重及特定生長率較海水對照組有所下降但與鹽度12、18組無顯著差異（P＞0.05）；鹽度6組日本黃姑魚各組織中的SOD、CAT、AKP和ACP活力與海水對照組均無顯著差異（P＞0.05）。由此可知，日本黃姑魚對低鹽度的耐受力較強(qiáng)，在鹽度6的條件下經(jīng)過一段時間的適應(yīng)后可以正常生長存活，但在淡水中能否生長存活還有待進(jìn)一步研究確定。

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Effects of Salinity on Growth and Non-specific Immunity of Nibea japonica

WANG Yue-bin,HU Ze-hui,ZHU Yun-hai,et al
(Zhe jiang Marine Fisheries Research Institute,Zhe jiang Key Lab of Mariculture&Enhancement, Scientific Observation and Experiment Station of Fishery Resources in Key Fishing Grounds,Ministry of Agriculture,Zhoushan 316021,China)

A 30-day experiment was conducted to investigate the effect of salinity on the survival,growth and non-specific immunity for giant croaker(Nibea japonica)(8.36±0.85 g)under different salinities(salinity 0,6,12, 18,24 and 30).In the group of salinity 0,N.japonicastopped feeding from 7 th day and died completely from 10th day.In the rest of groups,N.japonicashowed well growth and no death.At the end of the experiment,weight gain rate (WGR)and specific growth rate(SGR)in the group of salinity 24 was the highest,which were significantly higher than that of salinity 6,12 and 18(P＜0.05),but no significant difference compared with the group of salinity 30(P＞0.05).In the group of salinity 6,N.japonicapresented the lowest WGR an SGR,whereas no significant differences compared with the group of salinity 12 and 18(P＞0.05).Based on the determination of superoxide dismutase (SOD),catalase(CAT),alkaline phosphatase(AKP)and acid phosphatase(ACP),the results showed that AKP in the kidney for the group of salinity 24 was significantly lower than that of salinity 6 and 18(P＜0.05),but no significant difference(P＞0.05)with the group of salinity 12 and 30.There were no significant differences for SOD,CAT, AKP and ACP in the other tissues at different salinities (P＞0.05).The results suggested thatN.japonicahas stronger tolerance to low salinity,which could grow and survive normally after a period of adaption under the salinity 6.It’s proved that the suitable salinity range forN.japonicais from 18 to 30.

Nibea japonica;salinity;growth;non-specific immunity

S917

A

1008-830X(2015)01-0026-06

2014-09-25

浙江省科技廳公益技術(shù)研究農(nóng)業(yè)項目（2014C32069）；浙江省科技廳創(chuàng)新團(tuán)隊建設(shè)與人才培養(yǎng)項目（2013F20001）；國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃（863計劃）（2012AA10A413）；2014年農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新與推廣（浙財農(nóng)[2014]306號）

王躍斌（1983-），男，浙江寧海人，工程師，研究方向：海水增養(yǎng)殖.E-mail:wybin@126.com

柴學(xué)軍，高級工程師.E-mail:chaixj6530@sohu.com