吳洪革 邵成雷 付素心

【摘 要】 目的：觀察藏藥仁青常覺對抗腫瘤化療所致的免疫抑制。方法：通過仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺治療L615白血病小鼠、P388白血病小鼠的藥效學實驗研究，比較各實驗組IL-2、IL-6、IFN-γ、NKC等細胞因子的變化。結果：仁青常覺可以調節(jié)T細胞亞群比例及促進IL-2、IL-6、IFN-γ、NKC等細胞因子的分泌，且呈濃度依賴性。結論：仁青常覺與化療藥物同用，能提高機體免疫，有助于化療的完成。

【關鍵詞】 仁青常覺;環(huán)磷酰胺;白血病;實驗研究

【中圖分類號】R285.5 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2014）15-0021-03

Experimental study of Renqingchangjue combined with cyclophosphamide on treatment for leukemia

WU Hong-ge1 SHAO Cheng-lei2 FU Su-xin2

（1.The hospital of Zichuan District in zibo，ShanDong Province ，zibo 255100， china;

2.Shandong Arura Medicine Research And Develop Corportion， ShanDong Province ， Jinan 250101， china）

Abstract：Objective to observe Renqingchangjue against chemotherapy-induced immune suppression. Methods Through experimental studies of Renqingchangjue in combination with cyclophosphamide on L615 leukemia mice and P388 leukemia mice ，comparing cytokines changes of IL-2、IL-6、IFN-γ、NKC. Results Renqingchangjue can regulate the percentage of T cell subgroup and promote the secretion of cytokines such as IL - 2， IL - 6， IFN - gamma， NKC， etc. Conclusion Renqingchangjue combined with chemotherapy drugs，can improve the body immunity，helps chemotherapy completed.

Keywords：Renqingchangjue; cyclophosphamide; leukemia; Experimental study

仁青常覺系藏族驗方，成方于公元八世紀，具有一千多年的應用歷史，現(xiàn)收載于《中國藥典》（2010版）一部。仁青常覺依據(jù)藏醫(yī)藥學原理，由珍珠、朱砂、檀香、降香、沉香、訶子、牛黃、人工麝香、西紅花等精選的160余味純天然、珍貴、稀有藏藥材組成，有“百病一藥”、“藥之珍寶”等美稱。臨床上廣泛用于腫瘤、胃腸潰瘍、各種中毒癥、缺鐵性貧血等，特別對萎縮性胃炎、久治不愈的頑固性疾病等有特殊療效。能提高機體免疫力和抗應激能力，減輕放化療的毒副反應[1]。本文通過環(huán)磷酰胺聯(lián)用仁青常覺治療L615白血病小鼠、P388白血病小鼠的藥效學實驗，觀察仁青常覺對抗腫瘤化療所致的免疫抑制，對有效保證化療的完成，具有積極的意義。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種一級小鼠，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供，雌雄各半，體重18～22g，合格證號：SCXK（魯）20080002。

1.1.2 主要試劑和藥品 環(huán)磷酰胺，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產;標準重組人白介素-2（北京雙鷺藥業(yè)股份有限公司生產）;Yackl及IL-2依賴細胞株CTLL（中國科學院上海生命科學院細胞資源中心提供）;RPMII640細胞培養(yǎng)液及胎牛血清（華美生物工程公司生產）;四甲基偶氮唑鹽（MTT）、十二烷基磺酸鈉及刀豆球蛋白、二甲基甲酰胺均為Sigma公司生產;仁青常覺（金訶藏藥股份有限公司生產）。

1.1.3 儀器 加樣器、CO2培養(yǎng)箱、ELX-800酶標儀，均由美國Bio-Tek公司生產;96孔平底細胞培養(yǎng)板、Epics流式細胞儀，由美國Beckman公司生產。

1.2 實驗方法

1.2.1 仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺對L615白血病小鼠的影響 取健康昆明種小鼠120只，雌雄各半，按體重隨機分為6組，每組20只，即正常對照組、模型對照組、化療組、化療加仁青常覺低劑量組、化療加仁青常覺中劑量組、化療加仁青常覺高劑量組。除正常對照組外，各組小鼠接種L615白血病細胞0.2ml（在無菌條件下取L615白血病小鼠脾制成25%生理鹽水細胞懸液，小鼠皮下接種），于接種后第3d給藥，化療組腹腔注射環(huán)磷酰胺200mg/（kg·d）;化療加仁青常覺低劑量組、化療加仁青常覺中劑量組和化療加仁青常覺高劑量組除注射環(huán)磷酰胺外，分別灌胃給予仁青常覺75mg/kg、150mg/kg、300mg/kg，上、下午各1次;正常對照組和模型對照組腹腔注射生理鹽水0.2ml/（只·d），同時上、下午各灌胃相同體積的生理鹽水。于第5天每組取10只動物處死，取脾臟勻漿，流式細胞儀測定T細胞亞群，酶聯(lián)免疫法測定IL-2，IL-6，IFN-γ活性，余下各動物進行生存期觀察。

1.2.2 仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺對P388白血病小鼠的影響 取健康昆明種小鼠48只，接體重隨機分為6組，每組8只，即正常對照組、模型對照組、化療組、化療加仁青常覺低劑量組、化療加仁青常覺中劑量組、化療加仁青常覺高劑量組。除正常對照組外，各組小鼠接種P388淋巴細胞白血病瘤株（接種方法[2]：取腹水型P388白血病小鼠，脫頸椎處死，腹部消毒，抽吸腹水，加入生理鹽水混勻，顯微鏡下調整細胞濃度為1.5×107個/ml，每只小鼠右腋下注射0.2ml）。化療組腹腔注射環(huán)磷酰胺35mg/（kg·d），連續(xù)6d;化療加仁青常覺低劑量組、化療加仁青常覺中劑量組、化療加仁青常覺高劑量組除注射環(huán)磷酰胺外，分別灌胃給予仁青常覺150mg/kg、300mg/kg、600mg/kg，連續(xù)灌胃給藥14d;正常對照組和模型對照組給予相同體積的生理鹽水。于第15天脫頸椎處死，在無菌條件下取脾臟，勻漿，測定NKC、IL-2活性。

1.2.3 統(tǒng)計學方法 計量資料以均數(shù)±標準差（x±s），以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義表示，數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布時進行單因素方差分析，不呈正態(tài)分布采用非參數(shù)檢驗。

2 結果

2.1 仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺對L615白血病小鼠的影響

2.1.1 對生存期的影響 實驗結果表明，與模型對照組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組生存期明顯延長，差異具統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與化療組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組生存期亦明顯延長，差異具統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結果見表1。

2.1.2 對T細胞亞群的影響 實驗結果表明，與模型對照組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組CD3+、CD4+明顯增加，CD8+明顯減少，CD4/CD8比值明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與化療組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組亦表現(xiàn)出CD3+、CD4+明顯增加，CD8+明顯減少，CD4/CD8比值明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結果見表2。

2.1.3 對IL-2，IL-6，IFN-γ活性的影響 與模型組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組IL-6、IFN-γ明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與化療組比較，化療加仁青常覺低、中、高劑量組IL-2、IL-6、IFN-γ明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），結果見表3。

2.2 仁青常覺聯(lián)合環(huán)磷酰胺對P388白血病小鼠的影響 實驗結果表明，與模型組比較，化療組NKC及IL-2活性明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;與化療組比較，化療加仁青常覺中、高劑量組IL-2活性明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。結果見表4

3 討論

免疫功能的正常與否是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素之一，而免疫功能是通過免疫細胞所分泌的細胞因子所執(zhí)行的。NKC是三大類淋巴細胞之一，是一群廣譜抗腫瘤細胞，能迅速分泌大量細胞因子如干擾素-γ （IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α （TNF-α）、粒單細胞集落刺激因子（GMCSF）、IL-2等，調節(jié)吞噬細胞及T、B細胞功能。IL -2是機體內最主要、最強有力的T細胞生長因子，可誘導或促進多種細胞毒性細胞的活性，如NKC、細胞毒性T淋巴細胞（CTL）、淋巴因子活化的殺傷細胞（LAK）和腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）等，這些細胞在機體的免疫監(jiān)視和抗腫瘤免疫方面至關重要[3]。

白血病小鼠化療后T細胞亞群比例失調，NKC，IL-2，IL-6，IFN-γ等細胞因子分泌水平下降。本研究顯示通過使用仁青常覺治療后，T細胞亞群比例恢復正常，NKC，IL-2，IL-6，IFN-γ等細胞因子分泌水平回升，說明仁青常覺可通過調節(jié)T細胞亞群比例及促進細胞因子的分泌發(fā)揮其免疫調節(jié)作用，對于防治腫瘤化療所致的免疫抑制，有效保證化療的完成，具有積極的意義。

參考文獻

[1]國家藥典委員會. 《中國藥典》[S].2010年版.中國醫(yī)藥科技出版社，2010：573.

[2]王四旺，施新猷，黃傳貴，等. 中藥藥效學研究與評價[M].西安：陜西科學技術出版社，2005：719-721.

[3]李偶，田衛(wèi)衛(wèi). 補腎益氣沖劑對P388白血病小鼠化療后自然殺傷細胞、白介素-2活性的影響[J].成都中醫(yī)藥大學學報，2001，2 （1）：40-41.

（收稿日期：2014.05.20）