秦 練,王 忠,王 麗,陳少澤,唐 輝,段軍倉(cāng),任宏強(qiáng)

(1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)二科，新疆石河子 832002；2.石河子大學(xué)藥學(xué)院藥物分析實(shí)驗(yàn)室，新疆石河子 832002)

論著·臨床研究

新疆哈薩克族、漢族血漿非對(duì)稱二甲基精氨酸水平與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性研究

秦 練1,王 忠1,王 麗1,陳少澤1,唐 輝2,段軍倉(cāng)1,任宏強(qiáng)1

(1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院心內(nèi)二科，新疆石河子 832002；2.石河子大學(xué)藥學(xué)院藥物分析實(shí)驗(yàn)室，新疆石河子 832002)

目的 探討血漿非對(duì)稱二甲基精氨酸(ADMA)與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性。方法選擇哈薩克族原發(fā)性高血壓患者(n=93)及漢族患者(n=112)，以哈薩克族(n=81)及漢族(n=100)健康人作為健康對(duì)照組，采用反相高效液相色潽法(RP-HPLC)法分別檢測(cè)兩個(gè)民族原發(fā)性高血壓患者及健康對(duì)照組人群血漿中ADMA水平，同時(shí)檢測(cè)肝、腎功能，血脂、血糖、果糖胺等生化指標(biāo)。結(jié)果兩個(gè)民族原發(fā)性高血壓患者血漿ADMA水平較健康人群顯著升高(P<0.01)，血漿ADMA水平與高血壓患者血壓水平呈正相關(guān)(哈薩克族r=0.715,P<0.01；漢族r=0.645,P<0.01)。結(jié)論新疆哈薩克及漢族血漿ADMA水平與原發(fā)性高血壓之間均具有相關(guān)性，提示ADMA可能參與了原發(fā)性高血壓的發(fā)生及發(fā)展。

新疆哈薩克族;非對(duì)稱二甲基精氨酸;高血壓

原發(fā)性高血壓(essential hypertension，EH) 具有高致殘率及致死率，是由多危險(xiǎn)因素導(dǎo)致的常見(jiàn)疾病之一。我國(guó)疾病預(yù)防控制中心的一項(xiàng)橫斷面研究顯示，2010年中國(guó)成年人高血壓患病率已高達(dá)33.5%[1],但患病人群對(duì)該疾病知曉率、控制率及治療率均明顯低于發(fā)達(dá)國(guó)家水平[2]，不同地區(qū)、不同民族高血壓患病率存在差異。EH發(fā)生及發(fā)展的始動(dòng)機(jī)制之一是血管內(nèi)皮功能損傷，非對(duì)稱二甲基精氨酸作為一氧化氮合酶(NOS)的內(nèi)源性抑制劑，在人體內(nèi)通過(guò)對(duì)NOS產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞NO/NOS通路障礙，NO合成減少；同時(shí)NO的抑制平滑肌細(xì)胞收縮、血管收縮調(diào)節(jié)作用及抗血小板聚集等功能進(jìn)一步下降[3]。近年來(lái)ADMA已成為EH發(fā)病新的研究熱點(diǎn)，本研究應(yīng)用反相高效液相法對(duì)新疆哈薩克族、漢族高血壓人群血漿ADMA進(jìn)行檢測(cè)，比較兩個(gè)民族血漿ADMA水平是否存在差異，進(jìn)一步探討ADMA與EH之間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查選擇新疆瑪納斯縣旱卡子灘鄉(xiāng)、沙灣縣東灣鎮(zhèn)哈薩克族EH及健康人群；同期選擇石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院體檢中心漢族EH患者及健康人群作為研究對(duì)象。選擇年齡35～70歲，按2010年中國(guó)高血壓防治指南標(biāo)準(zhǔn),確診為EH患者，哈薩克族EH患者93例作為病例組，其中男 48例(52%)，女45例(48%)，平均年齡(46.1±10.6)歲；哈薩克族健康人群81例作為對(duì)照組，其中男39例(48%)，女42例(52%)，平均年齡(45.3± 11.7)歲；選擇本院體檢中心漢族EH患者112例作為病例組，其中男62例(55%)，女 50例(45%)，平均年齡為(47.2± 10.0)歲；漢族健康人群共計(jì)110例作為對(duì)照組，其中男59例(54%)，女51例(46%)，平均年齡(46.1±12.7)歲。將研究對(duì)象嚴(yán)格按統(tǒng)計(jì)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)分為病例組及對(duì)照組。入選病例組與對(duì)照組之間年齡、性別差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集及生化指標(biāo)檢測(cè) 入選病例均隔夜禁食12 h，晨起后取肘前靜脈血10 mL并分成兩份，于普通離心管及5 mL乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝保存。普通離心管中靜脈血以3 000 r/min轉(zhuǎn)速于4 ℃離心15 min后于-80 ℃冰箱保存。生化指標(biāo)于石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)(各項(xiàng)指標(biāo)均由同一人員使用同一儀器，統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)完成)。檢測(cè)項(xiàng)目及正常值范圍：總膽固醇(<5.72 mmol/L)、低密度脂蛋白膽固醇(<3.37 mmol/L)、高密度脂蛋白膽固醇(0.90～1.45 mmol/L)、三酰甘油(<2.3 mmol/L)、血糖(3.91～6.21 mmol/L)、果糖胺(10～286 μmmol/L)等。

1.2.2 ADMA檢測(cè)方法及步驟 (1)標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制：將5 mg ADMA標(biāo)準(zhǔn)品加入50 mL超純水并漩渦混勻5 min(標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液濃度：100 μg/mL，于4 ℃冰箱冷藏)。(2)OPA衍生劑：于40 mL避光儲(chǔ)液瓶中加入鄰苯二甲醛200 mg，硼酸溶液36 mL，甲醇4 mL及三巰基丙酸200 μL；將上述溶液漩渦混勻10 min冷藏備用[4]。(3)色譜條件：色譜柱為Agilent C18柱(5 μm,3.9 mm×250 mm)，流動(dòng)相A為0.05 μmmol/L乙酸鈉溶液(pH 6.8)，流動(dòng)相B為甲醇(65:35)等度洗脫，進(jìn)樣量20 μL/次，流速1 mL/min。紫外檢測(cè)器吸收值通道A 203 nm，通道B 254 nm[5]。(4)標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：于5支1.5 mL離心管中依次加入不同量及濃度的ADMA儲(chǔ)備液，再一次加入空白血漿，配制成濃度依次為0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 μg/mL的血漿標(biāo)準(zhǔn)品溶液。按血漿樣本處理方法進(jìn)行處理，同時(shí)記錄色譜圖，以峰面積為縱坐標(biāo)，ADMA濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得到直線回歸方程Area=1 680.2C+5 251.6，r2=0.999 4，其含量在0.1～2.0 μg/mL之間有良好的線性關(guān)系。(5)血漿樣品檢測(cè)：于1.5 mL離心管加入200 μL待測(cè)血漿及乙腈800 μL，渦旋混勻5 min，4 ℃ 12 000 r/min低溫離心15 min；取上清液100 μL，加OPA衍生劑100 μL渦旋混勻，避光反應(yīng)3 min，將反應(yīng)后產(chǎn)物經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液進(jìn)行測(cè)定[6]。色譜圖可見(jiàn)血漿中ADMA峰形良好，分離完全，無(wú)雜質(zhì)峰干擾。

2 結(jié) 果

2.1 病例組與對(duì)照組血漿ADMA水平比較 與同民族的對(duì)照組相比，兩個(gè)民族病例組年齡、血清葡萄糖、果糖胺、體質(zhì)量指數(shù)、總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇水平比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩個(gè)民族病例組血漿ADMA水平均高于各自對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；哈薩克族病例組血漿ADMA水平高于漢族病例組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 哈薩克族與漢族病例組血漿ADMA水平與各自對(duì)照組比較 哈薩克族與漢族病例組血漿ADMA水平明顯高于各自對(duì)照組(P<0.01)，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.3 哈薩克族與漢族病例組ADMA水平比較(根據(jù)血壓分層) 按2010年中國(guó)高血壓指南標(biāo)準(zhǔn)，將哈薩克族及漢族高血壓患者按血壓水平進(jìn)行分層，采用秩和檢驗(yàn)，兩民族高血壓患者血漿ADMA水平均隨血壓水平增高而逐漸增高(P<0.01)，見(jiàn)表2、3。

2.4 哈薩克族與漢族血漿ADMA濃度與EH相關(guān)性分析 經(jīng)雙變量相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)兩個(gè)民族患者血漿ADMA 水平均與EH之間呈正相關(guān)(哈薩克族r=0.715,P<0.01；漢族r=0.645,P<0.01)。

2.5 哈薩克族與漢族族病例組ADMA水平與高血壓危險(xiǎn)因素關(guān)聯(lián)性分析 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，按血漿ADMA水平進(jìn)行分層，分析兩民族血漿ADMA水平與高血壓危險(xiǎn)因素相關(guān)指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性，根據(jù)公式求得哈薩克族總膽固醇與ADMA的列聯(lián)系數(shù)為0.269，低密度脂蛋白與ADMA列聯(lián)系數(shù)為0.247，漢族膽固醇與內(nèi)臟脂肪素的列聯(lián)系數(shù)為0.24，低密度脂蛋白與ADMA列聯(lián)系數(shù)為0.239。結(jié)果提示哈薩克族、漢族ADMA水平均與總膽固醇、低密度脂蛋白相關(guān)，雖然具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但關(guān)系不密切，見(jiàn)表4、5。

表1 哈薩克族與漢族病例組與對(duì)照組相關(guān)臨床指標(biāo)及血漿ADMA水平比較

GLU:血清葡萄糖；FROCT：果糖胺；BMI:體質(zhì)量指數(shù)；LDL-C:低密度脂蛋白膽固醇；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；a：P<0.05，與同民族對(duì)照組比較；b：P<0.05，與漢族病例組比較。

表2 哈薩克族高血壓患者不同血壓水平與血漿ADMA濃度比較M(P75～P25)

表3 漢族高血壓患者不同血壓水平與血漿ADMA濃度比較M(P75～P25)

表4 哈薩克族ADMA水平與EH危險(xiǎn)因素關(guān)聯(lián)性分析(n)

表5 漢族ADMA水平與EH危險(xiǎn)因素關(guān)聯(lián)性分析(n)

3 討 論

ADMA作為L(zhǎng)-精氨酸/ NO通路的內(nèi)源性抑制因子，通過(guò)與L-精氨酸競(jìng)爭(zhēng)NOS的活性結(jié)合位點(diǎn)[7]抑制NOS活性，并促進(jìn)NOS解耦連[8]；同時(shí)還通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)陽(yáng)離子y+轉(zhuǎn)運(yùn)通路，進(jìn)一步干擾L-精氨酸向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，通過(guò)上述兩種機(jī)制導(dǎo)致內(nèi)源性NO生成進(jìn)一步減少。有研究發(fā)現(xiàn)高血壓患者血漿ADMA水平高于健康對(duì)照組[9-10],其水平增高與血管內(nèi)皮損傷及動(dòng)脈硬化發(fā)生具有相關(guān)性[11-12]。但國(guó)內(nèi)外對(duì)哈薩克族高血壓人群ADMA水平的相關(guān)研究較少。本研究采用反相高效液相法檢測(cè)哈薩克族與漢族高血壓人群血漿ADMA濃度，觀察到兩個(gè)民族高血壓患者血漿ADMA水平均高于各自對(duì)照組，伴隨患者血壓分級(jí)的增高，ADMA水平亦逐漸升高，ADMA水平與高血壓之間呈正相關(guān)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)ADMA與高血壓危險(xiǎn)因素中的低密度脂蛋白及膽固醇之間具有一定相關(guān)性，雖有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但二者關(guān)系不密切。

新疆為多民族聚居區(qū)，哈薩克族居民主要分布于新疆北部地區(qū),以牧業(yè)為主,由于氣候較寒冷,生存環(huán)境及生活條件較惡劣，哈薩克族牧民飲食結(jié)構(gòu)有自身特點(diǎn)，日常以面食、肉制品及乳制品為主，動(dòng)物脂肪及鹽攝入量高[13],但蔬菜及水果攝入量相對(duì)較少，哈薩克族高血壓發(fā)病率高于同地區(qū)漢族人群[14]。Xiao等[15]發(fā)現(xiàn)給予小鼠(載脂蛋白E基因缺陷)4周高ADMA飲食后,小鼠血脂水平增高,同時(shí)血管粥樣硬化病變程度明顯增加。同時(shí)有報(bào)道發(fā)現(xiàn)哈薩克族肥胖程度及血脂水平均高于漢族[16]，本研究以石河子市周邊哈薩克族牧民及市區(qū)漢族EH患者為研究對(duì)象，入選人群生活環(huán)境及飲食結(jié)構(gòu)相對(duì)固定，兩個(gè)民族血漿ADMA水平差異可能因素有以下幾點(diǎn):(1)基因遺傳特性；(2) 少數(shù)民族特有的膳食習(xí)慣、生活方式；(3)哈薩克族高血壓患者疾病知曉率及就診率低，治療依從性差。本研究結(jié)果具有自身的區(qū)域特征，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)血漿樣本處理、液相條件的選擇及ADMA衍生方法等方面均有一定的創(chuàng)新。

伴隨血壓水平的增高及病情的加重，EH患者血漿ADMA水平逐漸增高，提示ADMA在EH發(fā)展的各個(gè)階段持續(xù)參與了血管內(nèi)皮功能的損害，該因子對(duì)臨床上EH病情監(jiān)測(cè)[17]具有應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)為研究特異性治療藥物提供線索，但ADMA的其他生成途徑及代謝通路，包括轉(zhuǎn)運(yùn)[18]及調(diào)控機(jī)制等仍須進(jìn)一步研究。

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Correlation between plasma asymmetric dimethylarginine and essential hypertension of Kazak and Han nationalities in Xinjiang*

QinLian1,WangZhong1,WangLi1,ChenShaoze1,TangHui2,DuanJuncang1,RenHongqiang1

(1.SecondDepartmentofCardiology,FirstAffiliatedHospitalofMedicalCollege,ShiheziUniversity,Shihezi,Xinjiang832002,China;2.PharmaceuticalAnalysisLaboratory,PharmacyCollegeofShiheziUniversity,Shihezi,Xinjiang832000,China)

Objective To explore the correlation between plasma asymmetric dimethylarginin(ADMA) and essential hypertention(EH) by comparing the difference of plasma asymmetric dimethylarginine levels between Kazak and Han patients with EH in Xinjiang.Methods 91 Kazak and 112 Han patients with EH were selected.81 Kazak and 110 Han healthy people were selected as healthy control groups.The plasma ADMA levels in EH groups and the control groups were measured by using the reverse phase-high performance liquid chromatography(RP-HPLC).Meanwhile the liver function,renal function,blood lipids,blood glucose and fructosamine were measured.Results Kazak and Han patients with EH had higher levels of plasma ADMA than the control groups (P<0.01);there was a positive correlation between the plasma ADMA and blood pressure levels of EH patients in two nationalities(r=0.715,P<0.01 for Kazak;r=0.645,P<0.01 for Han).Conclusion Both Kazak and Han patients with EH have higher levels of ADMA than the respective healthy control group in Xinjiang.The correlation between the plasma levels of ADMA and EH existed,which indicate that ADMA might be involved in the occurrence and development of EH.

Kazak nationality in Xinjiang;asymmetric dimethylarginine;hypertension

:10.3969/j.issn.1671-8348.2015.15.021

兵團(tuán)醫(yī)藥專項(xiàng)課題基金資助(2012AB0140)。

秦練(1982-)，碩士，講師/主治醫(yī)師，主要從事高血壓發(fā)病基礎(chǔ)及臨床研究。

R544.1

A

1671-8348(2015)15-2072-04

2014-10-08

2015-01-16)