陶正明，姜 武，吳志剛，任江劍

（1.浙江省亞熱帶作物研究所，浙江溫州 325005；2.浙江省中藥研究所有限公司，浙江杭州 310023）

不同產(chǎn)地溫郁金藥材有效成分含量比較

陶正明1，姜 武1，吳志剛1，任江劍2

（1.浙江省亞熱帶作物研究所，浙江溫州 325005；2.浙江省中藥研究所有限公司，浙江杭州 310023）

采用HPLC方法對(duì)溫州7個(gè)產(chǎn)地連續(xù)2年的溫郁金藥材揮發(fā)油、吉瑪酮和莪術(shù)醇的含量進(jìn)行比較研究。結(jié)果表明，各批次溫州產(chǎn)溫郁金藥材均符合中國(guó)藥典2010年版標(biāo)準(zhǔn)要求，其中2012年各產(chǎn)地溫莪術(shù)平均揮發(fā)油、吉馬酮及莪術(shù)醇含量分別為4.07%，0.36%和0.07%；片姜黃平均揮發(fā)油、吉馬酮及莪術(shù)醇含量分別為3.02%，0.25%和0.05%，且以瑞安馬嶼產(chǎn)溫郁金藥材的有效成分含量最高。2013年各產(chǎn)地溫莪術(shù)平均揮發(fā)油、吉馬酮及莪術(shù)醇含量分別為5.07%，0.45%和0.09%；片姜黃平均揮發(fā)油、吉馬酮及莪術(shù)醇含量分別為3.33%，0.27%和0.05%，且以文成金星的溫莪術(shù)藥材和瑞安順泰的片姜黃藥材的有效成分含量最高。

溫郁金；揮發(fā)油；吉馬酮；莪術(shù)醇

溫郁金（Curcuma wenyujin）系姜科姜黃屬植物，其塊根、根莖供藥用，塊根加工成的藥材溫郁金是浙江省著名道地藥材“浙八味”之一［1-3］。根據(jù)藥用部位與加工方法的不同，其地下根莖、塊根可分別加工成3種不同藥材：塊根煮熟曬干稱(chēng)溫郁金，側(cè)根莖鮮縱切厚片曬干稱(chēng)片姜黃，主根莖煮熟曬干稱(chēng)溫莪術(shù)。3種藥材均為2010年版《中國(guó)藥典》收載品種［4］。

早在世界第一部藥典《新修草本》（唐）中就有溫郁金入藥的記載，至宋《重修政和經(jīng)史證類(lèi)備用本草》中記載的蓬莪術(shù)則在其名前冠以“溫州”二字以示道地，預(yù)示著溫郁金在溫州地區(qū)的栽培已達(dá)1 000多年［5］。吳志剛等［6］基于地理信息（GIS）技術(shù)平臺(tái)，根據(jù)生物引種原理對(duì)溫郁金在溫州各縣區(qū)的種植適宜性進(jìn)行評(píng)價(jià)，其結(jié)果與本草古籍記載的溫郁金產(chǎn)地相一致?，F(xiàn)代藥理學(xué)表明溫郁金對(duì)子宮頸癌、子宮頸糜爛、皮膚病等有一定療效，且莪術(shù)醇、吉馬酮是溫郁金藥材抗腫瘤的主要活性成分［7-10］。然而，隨著溫郁金市場(chǎng)價(jià)值的不斷上升和產(chǎn)區(qū)農(nóng)戶(hù)良種意識(shí)的薄弱，追求一時(shí)的經(jīng)濟(jì)利益導(dǎo)致部分良種直接用于銷(xiāo)售，而將并不適合作為種源的根莖用于留種栽培；加之產(chǎn)業(yè)管理混亂，土壤營(yíng)養(yǎng)貧瘠和工業(yè)化帶來(lái)的污染，使得溫州部分縣市產(chǎn)區(qū)的溫郁金種質(zhì)出現(xiàn)退化，其品質(zhì)下降，嚴(yán)重影響溫郁金藥材產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。保證藥用植物的品質(zhì)是生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)藥材的基礎(chǔ)，2010年版《中國(guó)藥典》在莪術(shù)、片姜黃項(xiàng)下僅收載揮發(fā)油、灰分、浸出物等含量作為評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量控制指標(biāo)，較難充分反映藥材的質(zhì)量好壞，且不同產(chǎn)地溫郁金藥材的品質(zhì)比較研究尚未見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究以揮發(fā)油、吉馬酮和莪術(shù)醇的含量作為溫郁金藥材品質(zhì)的評(píng)價(jià)因子，對(duì)2012，2013年溫州7個(gè)不同產(chǎn)地的溫郁金藥材品質(zhì)進(jìn)行比較研究，旨在為道地藥材溫郁金質(zhì)量評(píng)估提供依據(jù)，以更好地滿(mǎn)足優(yōu)質(zhì)溫郁金藥材的生產(chǎn)需要。

1 材料與方法

1.1 材料

2012，2013年課題組采集溫州7個(gè)產(chǎn)地溫郁金的新鮮樣品，根據(jù)不同加工方法分別加工成溫莪術(shù)、片姜黃藥材，材料均經(jīng)溫州大學(xué)植物分類(lèi)學(xué)科丁炳揚(yáng)教授鑒定為溫郁金Curcuma wenyujin植物。瑞安陶山、瑞安順泰、瑞安馬嶼、樂(lè)清石帆、永嘉烏牛、文成金星和蒼南橋墩試材編號(hào)依次為1～7。

儀器有Agilent 1100高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器，大連依利特C18柱，Satorius電子分析天平，Millipore純凈水發(fā)生器。試劑有甲醇（分析純），乙腈（色譜純），莪術(shù)醇（批號(hào)111665-200401，中國(guó)生物制品檢定所），吉馬酮對(duì)照品（批號(hào)100185-200506，純度94.96%，中國(guó)生物制品檢定所），自制超純水。

1.2 方法

1.2.1 揮發(fā)油的提取

準(zhǔn)確稱(chēng)取藥材粉末35 g，于1 000 m L燒瓶中，加水600 m L，安裝揮發(fā)油收集器，在120℃條件下油浴回流提取1 h，讀數(shù)計(jì)量，冷卻，收集莪術(shù)油備用。

1.2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

用十八烷基硅烷鍵合硅膠作填充料，C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；以乙腈為流動(dòng)相A，以甲醇為流動(dòng)相B，以0.4%磷酸水溶液為流動(dòng)相C進(jìn)行梯度洗脫；柱溫30℃；流速1.0 m L· min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm。柱后運(yùn)行10 min，進(jìn)樣量5μL。

1.2.3 供試品溶液制備

取揮發(fā)油約0.050 g，精密稱(chēng)定（2～3滴）置于10 mL量瓶中，以流動(dòng)相（乙腈∶甲醇∶水為50∶22.5∶27.5）溶液溶解定容。

1.2.4 對(duì)照品溶液制備

莪術(shù)醇。精密稱(chēng)取莪術(shù)醇10.68 mg于25 m L容量瓶中，以流動(dòng)相溶解定容，即得濃度0.427 2 mg· m L-1，備用。

莪術(shù)醇、吉馬酮混合對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)取吉馬酮6.83 mg于25 mL容量瓶中，準(zhǔn)確移入上述莪術(shù)醇對(duì)照品液5 m L，續(xù)以流動(dòng)相溶解定容，即得莪術(shù)醇0.085 4 mg·m L-1、吉馬酮0.259 4 mg· m L-1的混合對(duì)照品溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 線(xiàn)性關(guān)系

分別精密吸取混合對(duì)照品溶液1，3，5，7和10μL進(jìn)樣，按色譜條件測(cè)定，按照莪術(shù)醇、吉馬酮?dú)w屬分別計(jì)算各自峰面積（表1），并以峰面積y為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量x（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得莪術(shù)醇線(xiàn)性方程y=1 030.403 x+41.349，r=0.999 9；吉馬酮線(xiàn)性方程y=3 358.714 x+ 14.866，r=0.999 8。

2.2 精密度

吸取適量的混合對(duì)照品溶液，在色譜條件下，連續(xù)進(jìn)樣5次，每次5μL，分別測(cè)定莪術(shù)醇、吉馬酮峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。由表2可知，莪術(shù)醇、吉馬酮的平均峰面積分別為479.690和4 410.072，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差分別為1.077%和1.159%，精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性

取供試品溶液1份，分別于樣品制備后0，1，3，8，16 h依色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每次進(jìn)樣5μL，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。莪術(shù)醇和吉馬酮的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差分別為1.657%和0.219%，表明被分析成分在16 h穩(wěn)定。

表1 莪術(shù)醇和吉馬酮進(jìn)樣量和峰面積的線(xiàn)性關(guān)系

表2 莪術(shù)醇、吉馬酮的精密度試驗(yàn)結(jié)果

表3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)的結(jié)果

2.4 重現(xiàn)性

取精密稱(chēng)取的溫郁金藥材粉末，依1.2.1節(jié)法進(jìn)行莪術(shù)油提取，所得莪術(shù)油按1.2.3節(jié)法平行制備5份供試品溶液，在色譜條件下，每份供試樣品分別進(jìn)樣5μL，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。莪術(shù)醇、吉馬酮的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差分別為1.533%和0.484%，表明方法重復(fù)性好。

表4 莪術(shù)醇、吉馬酮重現(xiàn)性試驗(yàn)的結(jié)果

2.5 加樣回收率

精密稱(chēng)取5份約50 mg已知含量的莪術(shù)油樣品于10 mL容量瓶中，分別加入1.2.4節(jié)方法中的混合對(duì)照品溶液1 mL，并用流動(dòng)相溶液稀釋至刻度，即得5份含對(duì)照品的供試品溶液。按色譜條件，每次進(jìn)樣5μL，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表5。莪術(shù)醇、吉馬酮的平均回收率分別為99.904%和99.669%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差分別為0.409%和0.689%。

表5 莪術(shù)醇、吉馬酮加樣回收率

2.6 藥材有效成分含量

分別按1.2.1節(jié)和1.2.3節(jié)方法進(jìn)行揮發(fā)油的測(cè)定和供試品溶液的制備，進(jìn)樣5μL測(cè)定含量。莪術(shù)醇、吉馬酮對(duì)照品HPLC色譜圖如圖1所示，片姜黃藥材和溫莪術(shù)藥材（樂(lè)清石帆產(chǎn)為例）的莪術(shù)油HPLC色譜圖如圖2所示。2012，2013年溫郁金藥材有效成分含量測(cè)定結(jié)果分別見(jiàn)表6和7。

圖1 莪術(shù)醇、吉馬酮對(duì)照品HPLC的色譜圖

由圖2可知，莪術(shù)醇和吉馬酮大約分別在11和16 min。表6顯示，2012年溫州7個(gè)產(chǎn)地溫莪術(shù)、片姜黃平均揮發(fā)油含量分別為4.07%，3.02%，且藥材中吉馬酮平均含量分別為0.36%，0.25%；莪術(shù)醇平均含量分別為0.07%，0.05%。按照2010年版《中國(guó)藥典》關(guān)于莪術(shù)、片姜黃揮發(fā)油含量分別不得低于1.5%，1.0%的標(biāo)準(zhǔn)要求，2012年溫州產(chǎn)溫郁金藥材符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)要求，且以瑞安馬嶼產(chǎn)的藥材有效成分含量最高。

圖2 片姜黃藥材莪術(shù)油（A）和溫莪術(shù)藥材莪術(shù)油的HPLC色譜圖（B）

表6 2012年藥材揮發(fā)油及油/藥材中莪術(shù)醇、吉馬酮含量測(cè)定結(jié)果

表7 2013年藥材揮發(fā)油及油/藥材中莪術(shù)醇、吉馬酮含量測(cè)定結(jié)果

表7顯示，2013年溫州7個(gè)產(chǎn)地的溫莪術(shù)、片姜黃平均揮發(fā)油含量分別為5.07%，3.33%，且藥材中吉馬酮平均含量分別為0.45%，0.27%；莪術(shù)醇平均含量分別為0.09%，0.05%。按照2010年版《中國(guó)藥典》關(guān)于莪術(shù)、片姜黃揮發(fā)油含量分別不得低于1.5%，1.0%的標(biāo)準(zhǔn)要求，2013年溫州產(chǎn)溫郁金藥材均符合國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)要求，且文成金星產(chǎn)藥材在溫莪術(shù)揮發(fā)油含量及有效成分含量最高，而瑞安順泰產(chǎn)片姜黃藥材的揮發(fā)油含量及有效成分含量最高。

3 小結(jié)

通過(guò)對(duì)吉馬酮、莪術(shù)醇HPLC試驗(yàn)方法的研究，建立了溫莪術(shù)、片姜黃藥材含量的檢測(cè)方法，該方法精密度高、重現(xiàn)性較好，一個(gè)色譜條件下能同時(shí)靈敏檢測(cè)吉馬酮、莪術(shù)醇含量，因此該方法可作為溫莪術(shù)、片姜黃藥材的控制技術(shù)。

通過(guò)2年不同批次溫莪術(shù)、片姜黃藥材檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其最低揮發(fā)油含量分別為3.25%和2.00%，溫莪術(shù)藥材中吉馬酮和莪術(shù)醇含量最低分別為0.31%和0.06%，片姜黃藥材中吉馬酮和莪術(shù)醇含量最低為0.16%和0.03%。綜合研究結(jié)果，擬定溫莪術(shù)藥材揮發(fā)油含量不少于3.0%，吉馬酮不少于0.30%，莪術(shù)醇不少于0.05%；片姜黃藥材揮發(fā)油含量不得少于1.5%，吉馬酮不少于0.15%，莪術(shù)醇不少于0.03%，以期為重新建立溫莪術(shù)、片姜黃的藥材質(zhì)量控制指標(biāo)提供依據(jù)。

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（責(zé)任編輯：張瑞麟）

S 567.23

：A

：0528-9017（2015）10-1583-04

文獻(xiàn)著錄格式：陶正明，姜武，吳志剛，等.不同產(chǎn)地溫郁金藥材有效成分含量比較［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，56（10）：1583-1586.

10.16178/j.issn.0528-9017.20151019

2015-05-11

浙江省“十二五”中藥材育種專(zhuān)項(xiàng)（2012C12912-2）；國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥行業(yè)科研專(zhuān)項(xiàng)（201407002）

陶正明（1970-），男，江蘇姜堰人，副研究員，從事中藥栽培技術(shù)、品種選育與藥材質(zhì)量研究工作。E-mail：312633768 @qq.com。