李心亮李 珂△劉月平李若存謝芳一

（1.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410006；2.湖南省兒童醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

·研究報(bào)告·

煅石膏外用對(duì)急性軟組織損傷的治療作用及其機(jī)制研究*

李心亮1李 珂1△劉月平2李若存1謝芳一1

（1.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410006；2.湖南省兒童醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

目的觀(guān)察煅石膏對(duì)實(shí)驗(yàn)性急性軟組織損傷模型大鼠的治療作用并對(duì)其可能存在的作用機(jī)制進(jìn)行研究。方法采用砝碼自由落體運(yùn)動(dòng)制備大鼠急性軟組織損傷模型，分組給藥后，在給藥后1、4、7 d分別處死動(dòng)物，動(dòng)態(tài)檢測(cè)大鼠損傷癥候指數(shù)并測(cè)定給藥后不同時(shí)間血清白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）、前列腺素2（PGE2）的水平改變。結(jié)果煅石膏、扶他林軟膏均能顯著改善模型大鼠損傷證候指數(shù)，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。煅石膏能夠顯著降低急性軟組織損傷大鼠模型血清中IL-1、IL-6、PGE2水平，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論煅石膏具有較好的活血化瘀、抗炎消腫等功效，能夠顯著改善急性軟組織損傷的腫脹、瘀斑，促進(jìn)軟組織的修復(fù)與再生，其作用機(jī)制可能與抑制IL-1、IL-6等炎性因子及抑制PGE2的生成有關(guān)。

煅石膏 急性軟組織損傷 外用 炎性因子 大鼠

煅石膏為石膏的炮制品，收載于2010版《中國(guó)藥典》，功能為收濕、生肌、斂瘡、止血。臨床除外用治療瘡瘍不斂、濕疹瘙癢、水火燙傷和外傷出血外，對(duì)于骨折、軟損傷引起的紅、腫、熱、痛等癥狀，局部外用有確切的療效，已在臨床得到廣泛的應(yīng)用［1-2］，但其藥效學(xué)及作用機(jī)制未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)復(fù)制大鼠軟組織損傷模型，觀(guān)察了煅石膏對(duì)急性軟組織損傷的治療作用，采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)煅石膏干預(yù)后急性軟組織損傷模型大鼠血清白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）及前列腺素2（PGE2）的影響對(duì)其可能存在的軟組織損傷的機(jī)制進(jìn)行研究，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康清潔級(jí)SD大鼠60只，體質(zhì)量180~ 220 g，雌雄各半。購(gòu)自湖南長(zhǎng)沙斯萊克景達(dá)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)公司，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d。

1.2 藥物及試劑 煅石膏用大豆油（6.6∶3.4）配制，由湖南省中醫(yī)藥研究院中藥研究所課題組提供，生產(chǎn)批號(hào)：20131026。雙氯芬酸由北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)，每支20 g，批號(hào)X4447，購(gòu)自長(zhǎng)沙永康堂大藥房。IL-1 ELISA試劑盒，美國(guó)RD公司，批號(hào)：DZE30418。IL-6 ELISA試劑盒，美國(guó)RD公司，批號(hào)：DZE30646。PGE2ELISA試劑盒，美國(guó)RD公司，批號(hào)：DZE30446。

1.3 分組與造模 參考文獻(xiàn) ［3］的方法造模。采用10%硫化鈉溶液脫除大鼠的小腿部鼠毛，用自制撞擊器，質(zhì)量160 g，固定高度，撞擊接觸面直徑0.8 cm在大鼠小腿中部外側(cè)連續(xù)打擊7次，造成局部軟組織挫傷模型。造模成功后將動(dòng)物隨機(jī)分為模型對(duì)照組，陽(yáng)性組（予雙氯芬酸0.75 g/kg）、煅石膏低劑量組（0.15 g/kg）和高劑量組（0.75 g/kg），另設(shè)空白對(duì)照組，每組12只動(dòng)物。其中模型對(duì)照組與空白對(duì)照組不作處理，其余各組給予相應(yīng)的藥物，每天換藥1次，共給藥7 d。分別于給藥后1、4、7 d各組隨機(jī)選取4只動(dòng)物10%水合氯醛0.3 mL/kg麻醉后腹主動(dòng)脈取血，3000 r/min離心15 min后取血清采用酶聯(lián)免疫吸附法 （ELISA）檢測(cè)IL-1β、IL-6、PGE2水平的變化。

1.4 觀(guān)察指標(biāo) 損傷證候指數(shù)自造模后每天觀(guān)察傷肢腫脹和瘀斑等證候表現(xiàn)，并分級(jí)評(píng)分。皮下瘀血：多量塊狀計(jì)2分，少量點(diǎn)狀計(jì)1分，無(wú)瘀血者計(jì)0分。肌肉腫脹：明顯腫脹計(jì)2分，稍有腫脹計(jì)1分，無(wú)腫脹者計(jì)0分。皮膚顏色：紫暗色深計(jì)2分，暗紅色淺計(jì)1分，色澤正常計(jì)0分。血清IL-1、檢測(cè)采用ELISA方法測(cè)定，按操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較方差分析采用單因素分析。組間比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 煅石膏對(duì)急性軟組織損傷模型大鼠損傷證候的影響 見(jiàn)表1。大鼠經(jīng)過(guò)打擊造模后迅速出現(xiàn)腫脹、皮膚瘀斑及皮下出血現(xiàn)象，說(shuō)明造模成功。與模型組比較，陽(yáng)性組大鼠在給藥第3天后損傷證候指數(shù)顯著降低（P＜0.01）；煅石膏高劑量組大鼠在給藥第4天后損傷證候指數(shù)顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）；煅石膏低劑量組大鼠在給藥第6天后損傷指數(shù)顯著降低（P＜0.01）。

表1 各組急性軟組織損傷模型大鼠損傷證候指數(shù)比較（分，±s）

表1 各組急性軟組織損傷模型大鼠損傷證候指數(shù)比較（分，±s）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組別 n 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d空白組 12 1.42±0.51 1.33±0.49 1.25±0.62 0.92±0.79 0.75±0.75 0.83±0.72 0.75±0.75模型組 12 5.42±0.51**5.00±0.74**4.42±0.51**3.92±0.51**3.25±0.45**3.00±0.60**2.17±0.39**陽(yáng)性組 12 5.33±0.78 4.42±0.79 3.67±0.65△△3.00±0.74△△2.58±0.51△△2.00±0.60△△1.58±.051△△煅石膏高劑量組12 5.50±0.90 4.42±0.95 4.08±0.90 3.25±0.87△2.58±0.79△2.00±0.60△△1.58±0.51△△煅石膏低劑量組12 5.75±0.45 5.17±0.58 4.58±0.51 4.00±0.43 3.08±0.29 2.25±0.45△△1.50±0.52△△

2.2 煅石膏對(duì)急性軟組織損傷模型大鼠IL-1水平的影響 見(jiàn)表2。與空白組比較，模型組大鼠血清IL-1水平在給藥后1、4、7 d均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，陽(yáng)性組、煅石膏高劑量組大鼠血清IL-1水平在1、4、7 d均顯著降低（P＜0.01）；煅石膏低劑量組大鼠血清IL-1水平在給藥后1、4、7 d有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-1水平比較（pg/mL，±s）

表2 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-1水平比較（pg/mL，±s）

組別n 7 d空白組 12 195.4±27.1模型組 12 299.4±19.9**陽(yáng)性組 12 244.4±20.7**△△1 d 4 d 190.8±25.4 201.5±30.39 315.8±29.9**376.3±34.6**280.8±25.5**△△324.6±22.1**△△煅石膏高劑量組 12 256.5±25.8**△△278.4±19.5**△△329.3±27.7**△△煅石膏低劑量組 12 300.3±30.2**△335.4±17.9**△288.8±24.7**△

2.3 煅石膏對(duì)急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-6的影響 見(jiàn)表3。與空白組比較，模型組大鼠血清IL-6水平在給藥后1、4、7 d均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，陽(yáng)性組大鼠在給藥4 d后血清IL-6水平顯著降低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。煅石膏高劑量、煅石膏低劑量組大鼠在給藥7 d時(shí)血清IL-1水平顯著降低。

表3 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-6水平比較（pg/mL，±s）

表3 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清IL-6水平比較（pg/mL，±s）

組別n 7 d空白組 12 89.3±17.1模型組 12 235±15.4**陽(yáng)性組 12 180.3±25.4**△△1 d 4 d 95.8±15.7 100.7±10.4 258.8±19.9**299.0±17.7**240.9±17.8**256.4±18.5**△煅石膏高劑量組 12 195.4±17.3**△△244.4±9.8**266.5±18.4**煅石膏低劑量組 12 255.7±14.6**273.9±28.4**210.5±20.3**△

2.4 煅石膏對(duì)急性軟組織損傷模型大鼠血清PGE2的影響 見(jiàn)表4。與空白組比較，模型組大鼠給藥1、4、7 d血清PGE2水平均顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，陽(yáng)性組、煅石膏高劑量組、煅石膏低劑量組大鼠給藥1、4、7 d后血清PGE2水平均有所降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。

表4 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清PGE2水平比較（pg/mL，±s）

表4 各組急性軟組織損傷模型大鼠血清PGE2水平比較（pg/mL，±s）

組別n 7 d空白組 12 195.7±17.5模型組 12 350.4±35.5**陽(yáng)性組 12 284.6±19.9**△△1 d 4 d 198.6±8.1 201.7±14.4 355.9±26.4**438.8±34.7**299.9±24.1**△△359.5±20.2**△△煅石膏高劑量組 12 276.5±25.4**△△305.4±19.8**△△330.3±27.9**△△煅石膏低劑量組 12 320.6±28.5**△367.8±32.3**△△300.7±22.5**△

3 結(jié) 論

急性軟組織損傷的發(fā)病機(jī)制主要是局部損傷后炎癥介質(zhì)滲出，組織缺氧及酸性物質(zhì)堆積，破壞細(xì)胞有氧呼吸功能氧化磷酸化進(jìn)程受阻，致ATP生成下降或終止，最終導(dǎo)致組織傷害［4］。其主要治療方法是抗炎止痛。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為急性軟組織損傷屬于“筋傷”范疇，是指多因外力強(qiáng)烈作用而引起的筋肉、脈絡(luò)損傷、血溢脈外、氣血凝滯等病證，其主要病機(jī)是氣滯血瘀、脈絡(luò)不通［5］，其治療主要以消腫止痛、疏通筋絡(luò)、活血化瘀等。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示煅石膏能夠顯著改善急性軟組織損傷大鼠模型證候積分，對(duì)軟組織對(duì)大鼠軟組織損傷模型有較顯著的治療作用。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為急性軟組織損傷的關(guān)鍵是炎性介質(zhì)促進(jìn)炎性反應(yīng)導(dǎo)致。IL-1β是白介素1家族中的一個(gè)亞型，研究顯示在急性軟組織損傷過(guò)程中IL-1β主要是促進(jìn)炎性反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體發(fā)熱［6］。另有研究顯示IL-1β的釋放與軟組織損傷的疼痛相關(guān)［5］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠急性軟組織損傷后血液內(nèi)IL-1β含量迅速上升，煅石膏能夠有效降低其血液中IL-1β含量，說(shuō)明其治療軟組織損傷的作用機(jī)制可能與抑制IL-1β釋放，抑制炎性反應(yīng)，緩解疼痛有關(guān)。

IL-6是一種具有多生物效應(yīng)的細(xì)胞因子，是反應(yīng)炎癥和組織損傷程度的重要指標(biāo)［7］。其在炎癥反應(yīng)中占據(jù)重要地位。在急性軟組織損傷的初期IL-6會(huì)迅速升高，而康復(fù)治療過(guò)程中治療藥物的干預(yù)可對(duì)升高的IL-6含量產(chǎn)生抑制作用［8］。抑制急性軟組織損傷引起的IL-6的升高能夠促進(jìn)淤血消退，有利于肌纖維的修復(fù)［9］。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示煅石膏能夠抑制急性軟組織損傷引起的IL-6升高可能是其消腫散瘀作用機(jī)制的重要方面。

PGE2是機(jī)體在各類(lèi)生理病理反應(yīng)中由花生四烯酸在環(huán)氧化酶的作用下產(chǎn)生的一種具有多種生物活性的代謝產(chǎn)物，是一種重要的炎癥物質(zhì)，大量研究證實(shí)，在炎癥早起PGE2處于高表達(dá)狀態(tài)，可導(dǎo)致局部紅、熱和組織腫脹。通過(guò)抑制急性損傷期PGE2的含量可加速損傷組織炎癥的消退與組織的修復(fù)［10］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示煅石膏能夠抑制急性軟組織損傷早期PGE2的表達(dá)，說(shuō)明其治療急性軟組織損傷的消腫散瘀作用機(jī)制與抑制PGE2的表達(dá)有關(guān)。

綜上所述煅石膏具有活血化瘀、消腫止痛的功效，治療急性軟組織損傷療效確切，其作用機(jī)制可能是通過(guò)減少炎性因子IL-1β的釋放，抑制炎性介質(zhì)IL-6的升高及降低PGE2的表達(dá)等方面減輕炎癥反應(yīng)，加速瘀血消退與促進(jìn)組織修復(fù)而達(dá)到治療急性軟組織損傷的目的。

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Experimental Study on the Effect of Plaster of Paris on Acute Soft Tissue Injury and its Mechanism

LI Xinliang1，LI Ke1，LIU Yueping2，et al. 1 The Hunan Research Institute of Chinese Traditional Medicine，Hunan，Changsha 410006，China；2 Hunan Children′s Hospital，Hunan，Changsha 410007，China

Objective：To explore the effect and mechanisms of Plaster of paris on acute soft tissue injury.Method：Acute soft tissue injury models in SD rats were established and divided into 4 groups with administrated locally Plaster of paris or voltaren.The indexes of syndrome，plasma，and the levels of IL-1β，IL-6 and PGE2were measured in dynamic style.Results：The results showed that，compared with the model group，Plaster of Paris could improve the symptoms of swelling，bruising and dysfuction（P＜0.05 or P＜0.01），and significantly inhibit the levels of IL-1β，IL-6 and PGE2（P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion：Plaster of paris has an effect on activating blood dissolving stasis and analgesia，and can significantly improve the swelling，bruising and other symptoms of acute soft tissue injury.The mechanism may related to the inhibition of the levels of IL-1β，IL-6 and PGE2.

Plaster of paris；Acute soft tissue injury；Extenal application；Inflammatory factors；Rats

R274.3

A

1004-745X（2015）07-1176-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.07.017

2015-03-16）

湖南省中醫(yī)藥研究院院級(jí)課題（廳級(jí)）（201417）

△通信作者（電子郵箱：303962549@qq.com）