江 巖，陳慶森*，李俊潔，閆亞麗，趙 培

酪蛋白糖巨肽對小鼠腸道雙歧桿菌增殖水平的影響

江 巖，陳慶森*，李俊潔，閆亞麗，趙 培

（天津市食品生物技術(shù)重點實驗室，天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院，天津 300134）

采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）分析不同劑量酪蛋白糖巨肽（cas ein glycomacropeptide，CGMP）對小鼠腸道雙歧桿菌增殖水平的影響，揭示乳源CGMP是否有增殖腸道關(guān)鍵益生菌的功能。選用50只健康BALB/c小鼠，隨機分為對照組，安慰組（灌胃生理鹽水0.2 mL），乳源CGMP低、中、高劑量組（灌胃等體積不同質(zhì)量濃度的乳源CGMP），灌胃周期為2周。于灌胃后第0、3、5、7、9、11、15天及停止灌胃后1周（第21天）采集的小鼠新鮮糞便，并進行糞便菌體基因組DNA抽提。依據(jù)雙歧桿菌的16S rRNA基因序列設(shè)計5對種屬特異性引物，以兩歧雙歧桿菌（Bifidobacterium bifidum）CICC6071的基因組DNA作為標(biāo)準(zhǔn)品，進行梯度稀釋制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；分析樣品PCR擴增產(chǎn)物的熔解曲線，評價反應(yīng)的特異性。結(jié)果表明：Real-time PCR可準(zhǔn)確定量小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量；且灌胃中劑量乳源CGMP可以促進小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌的增殖，在灌胃第11天時小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量達到最高值，即乳源CGMP對小鼠腸道雙歧桿菌的增殖作用存在劑量選擇性。

實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；酪蛋白糖巨肽；雙歧桿菌；小鼠糞便

自1956年Waugh等[1]發(fā)現(xiàn)了κ-酪蛋白，1965年Delfour等[2]發(fā)現(xiàn)用凝乳酶切斷κ-酪蛋白的特定位置，會生成不溶性的副κ-酪蛋白和在三氯乙酸中可溶的 酪蛋白糖巨肽兩部分。酪蛋白糖巨肽（casein glycomacropeptide，CGMP）是由κ-酪蛋白第106～169位氨基酸（第106位氨基酸為Met，第169位氨基酸為Val）共64個殘基構(gòu)成的高度糖基化、并且有磷酸化修飾的多肽，具有多種生理功能[3]：抑制胃液分泌、抑制病原體（包括病毒和細(xì)菌等）黏附細(xì)胞、抑制霍亂弧菌等的毒素與受體結(jié)合等。另外，CGMP還具有促進雙歧桿菌增殖的作用：Gy?rzy等[4]首先發(fā)現(xiàn)了在人初乳和常乳中存在雙歧桿菌生長促進因子糖巨肽（GMP），經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)兩歧雙歧桿菌賓夕法尼亞亞種的生長需要人類來源的初乳成分。李楠等[5]研究了不同蛋白酶酶解糖巨肽包括商業(yè)化CGMP在體外對乳雙歧桿菌BB12的促生長效果，發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生的多肽類物質(zhì)能夠在培養(yǎng)基中促進雙歧桿菌的增殖。雙歧桿菌作為恒溫動物腸道中一種重要的益生菌群，具有抑制有害菌群生長、免疫調(diào)節(jié)、提供營養(yǎng)成分及影響機體代謝等多種生理功能[6-8]。因此，準(zhǔn)確定量分析動物腸道內(nèi)雙歧桿菌對營養(yǎng)保健及醫(yī)療衛(wèi)生方面的研究具有重要意義。但由于雙歧桿菌屬于革蘭氏陽性嚴(yán)格厭氧菌，對營養(yǎng)條件及培養(yǎng)環(huán)境要求苛刻，在動物體外很難生長，使得傳統(tǒng)培養(yǎng)方法對雙歧桿菌的定量存在一定局限性。本實驗采用實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）分析比較不同劑量的乳源CGMP對小鼠腸道中雙歧桿菌的增殖水平的影響，為乳源CGMP的進一步開發(fā)利用奠定實驗基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1菌種與培養(yǎng)基

雙歧桿菌菌株為兩歧雙歧桿菌（Bifidobacterium bifi dum）CICC6071，來自中國微生物菌種保藏中心。

培養(yǎng)兩歧雙歧桿菌所用培養(yǎng)基為莫匹羅星鋰鹽改良的MRS培養(yǎng)基。

1.1.2試劑

10×PCR Buffer（100 mmol/L Tris-HCl（pH 8.3）、500 mmol/L KCl）、MgCl2（25 mmol/L）、dNTPs（2 mmol/L）、TaqDNA聚合酶（5 U/μL） 寶生物工程（大連）有限公司；2×Fast SYBR Green Master Mix美國AB公司；細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒 天根生化科技（北京）有限公司；實驗中使用的引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1.1.3動物

SPF級BALB/c健康雄性小鼠，體質(zhì)量（25±2）g，購自中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，期間小鼠被飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中，12 h光照/12 h黑暗，室溫（20±2） ℃，相對濕度（50±10）%，自由進食和飲水。

1.2方法

1.2.1乳源CGMP溶液的配制

乳源CGMP樣品（CGMP純度71%，唾液酸含量5.6%），購自新西蘭Tatua合作乳品有限公司。用無菌生理鹽水溶解CGMP，配制成不同質(zhì)量濃度的溶液，備用。

1.2.2動物的分組及處理

將BALB/c雄性小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機分為5組：安慰組每天早上灌胃生理鹽水0.2 mL，乳源CGMP低、中、高劑量組每天早上分別灌胃0.2 mL不同質(zhì)量濃度（0.3、0.5、0.7 mg/mL）的乳源CGMP，對照組既不灌胃生理鹽水，也不灌胃乳源CGMP。灌胃周期為2周。所有小鼠在整個實驗期間均飲用純凈水，定期更換墊料以保持環(huán)境清潔與干燥。

1.2.3樣品的采集處理及細(xì)菌基因組DNA的提取

分別于灌胃后第0、3、5、7、9、11、13、15天以及第21天（即灌胃停止后1周）的清晨，用逼迫法采集各組小鼠的新鮮糞便，放置于無菌的密封厭氧帶袋，存于-20 ℃冰箱中，24 h內(nèi)對其進行處理。

取約200 mg小鼠糞便樣品置于2 mL無菌離心管中，加入1 mL pH 7.4的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS），在漩渦儀上充分振蕩混勻后，1 800 r/min離心6 min，用移液器輕取上清液，向沉淀中再加入1 mL PBS（pH 7.4），1 800 r/min離心6 min，取上清液。合并兩次離心所得上清液，再次2 300 r/min離心6 min，收集上清液。12 000 r/min繼續(xù)離心8 min，收集菌體，加入PBS充分懸浮菌體并進行洗滌，離心收集沉淀，重復(fù)操作兩次。再用無菌水重復(fù)操作兩次。

用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒進行基因組DNA的抽提，最后用TE緩沖液（Tris和乙二胺四乙酸配制）進行溶解，-20 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 PCR引物序列的選擇

依據(jù)雙歧桿菌16S rRNA基因序列并參考文獻[9-13]，合成以下5對引物（表1），通過實驗最終確定其中的1對作為檢測小鼠腸道雙歧桿菌的引物。

表1 雙歧桿菌的PCR引物序列Table1 PCR primers for Bifidobacterium genus

1.2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

取B. bifidumCICC6071菌株，用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒進行菌體DNA的提取，換算為B. bifidum的拷貝數(shù)，10倍梯度稀釋為107～103copies/μL，作為標(biāo)準(zhǔn)品。

Real-time PCR體系共25μL：2×Fast SYBR Green Master Mix 12.5μL、雙歧桿菌屬上下游引物（10μmol/L）各1 μL、模板（B. bifidumCICC6071菌株基因組DNA）2μL、ddH2O 8.5μL。

Real-time PCR擴增條件：94 ℃預(yù)變性3 min；94 ℃變性40 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸50 s，79 ℃ 10 s，40個循環(huán)；最后72 ℃延伸3 min。

1.2.6樣品的檢測及數(shù)據(jù)處理

將待測樣品DNA按照與標(biāo)準(zhǔn)品相同的體系和條件進行Real-time PCR和熔解曲線的制 作。

熔解條件：從72 ℃ 以20℃/s的速率升溫至94 ℃，保持15 s；再以20℃/s的速率降至60 ℃，保持1 min；最終以0.3 ℃/s（每升高0.3 ℃收集1次熒光信號）的速率升溫至94 ℃，保持15 s。

1.3數(shù)據(jù)處理

將所有樣品定量數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行顯著性檢驗分析，以P＜0.05作為統(tǒng)計學(xué)差異的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1小鼠腸道雙歧桿菌引物檢測效果的選擇及分析

將所選擇的5對引物，以標(biāo)準(zhǔn)菌株（B. bifidumCICC6071）及樣品的基因組DNA為模板進行PCR擴增，將所得產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖1所示。

圖1 雙歧桿菌PCR擴增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖Fig.1 Agarose gel electrophoregrams of PCR-amplified products from bifidobacteria

如圖1所示，以B. bifidumCICC6071基因組DNA為模板時，引物B（B350-1/B350-2）出現(xiàn)非特異性擴增產(chǎn)物，大小約為1 200 bp，直接被排除；而以小鼠糞便樣品為模板時，引物E（g-Bifid-F/g-Bifid-R）無任何產(chǎn)物條帶出現(xiàn)，也直接被排除；雖然以小鼠糞便基因組DNA為模板時，引物A（B230-1/B230-2）、引物D（Bif164-f/ Bif662-r）及引物C（lm26/Lm3r）都會得到相應(yīng)大小的目的產(chǎn)物片段，但是前兩種引物在得到目的產(chǎn)物片段的同時也會得到與片段長度差異較小的非特異性產(chǎn)物片段，且通過改變PCR條件不能將非特異性擴增產(chǎn)物消除。因此，最終選擇只得到1條目的產(chǎn)物條帶的lm26/Lm3r作為檢測小鼠腸道雙歧桿菌的引物。

2.2 Real-time PCR定量檢測小鼠腸道中雙歧桿菌有關(guān)條件的建立

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)品的PCR擴增曲線及反應(yīng)靈敏度

標(biāo)準(zhǔn)品不同稀釋度（不同模板量）體系的熒光信號隨著循環(huán)數(shù)的增加也相應(yīng)的增強，在經(jīng)過一個指數(shù)擴增期后進入“平臺期”。不同模板量的體系達到熒光閾值（即進入指數(shù)期）的初始循環(huán)數(shù)是不相同的，初始循環(huán)數(shù)與模板量之間的對應(yīng)關(guān)系是雙歧桿菌定量的基礎(chǔ)。

圖2 梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的PCR擴增曲線Fig.2 Amplification curves of 10-fold serially diluted standards

如圖2所示，PCR擴增曲線的橫坐標(biāo)代表PCR反應(yīng)的循環(huán)數(shù)，縱坐標(biāo)代表SYBR Green染料與雙鏈DNA小溝結(jié)合后產(chǎn)生的熒光強度（Rn）。圖中梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的擴增曲線均呈“S”型，且濃度最低的103copies/μL的標(biāo)準(zhǔn)品仍有特征性擴增曲線，說明該Real-time PCR擴增過程具有較好的靈敏度。

2.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的輸出

以各個稀釋度的菌落總數(shù)的對數(shù)值為縱坐標(biāo)，相應(yīng)的循環(huán)數(shù)為橫坐標(biāo)，得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y＝-0.237 8x+10.815（R2＝0.971 3）。通過Real-time PCR得到各個時間點采集的樣品達到熒光閾值所需要的初始循環(huán)數(shù)，將其代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，即可得到對應(yīng)的菌落總數(shù)對數(shù)值，最終以每克糞便的菌落總數(shù)表示。

2.2.3樣品熔解曲線

圖3 樣品的熔解曲線Fig.3 Melting curves

由于實驗中所用的SYBR Green染料能與所有DNA雙鏈的小溝結(jié)合，不能將非特異性擴增產(chǎn)物片段與目的產(chǎn)物片段區(qū)別開來。若出現(xiàn)一個峰，說明只有一種產(chǎn)物生成，因為的片段大小不同或者堿基序列不同的雙鏈產(chǎn)物，其解鏈溫度是不一樣的。依據(jù)1.2.6節(jié)方法對PCR擴增產(chǎn)物進行熔解，得到熔解曲線。如圖3所示，實驗所得到的熔解曲線中只出現(xiàn)一個峰，說明引物的特異性很好，沒有非特異性擴增產(chǎn)物出現(xiàn)。

2.3不同劑量乳源CGMP對小鼠腸道雙歧桿菌增殖水平的影響

基于上述分析過程所建立的Real-time PCR檢測相關(guān)條件，對不同劑量乳源CGMP干預(yù)小鼠腸道雙歧桿菌的增殖情況進行檢測，結(jié)果見圖4。

圖4 低、中、高劑量的乳源CGMP對小鼠腸道雙歧桿菌增殖水平的影響Fig.4 Effects of milk-derived CGMP at low, moderate and high doses on the number of mouse intestinal bifidobacteria

如圖4所示，對照組與安慰組小鼠腸道中雙歧桿菌水平都未呈現(xiàn)出一定的變化趨勢，只是在某一生理范圍內(nèi)（3.39×107～1.41×108CFU/g）上下波動。

如圖4a所示，與對照組和安慰組相比，乳源CGMP低劑量組小鼠腸道中雙歧桿菌水平均無顯著差異（P＞0.05），同樣為在一個生理范圍內(nèi)波動（3.80×107～2.00×108CFU/g）。

如圖4b所示，在灌胃第0天時，與對照組和安慰組相比，乳源CGMP中劑量組小鼠腸道中雙歧桿菌水平無明顯的差異，基本在同一水平。從灌胃第3天開始，乳源CGMP中劑量組小鼠腸道中雙歧桿菌數(shù)量就有一定增加，在此之后一直處于上升趨勢，直到灌胃第11天，達到最大值（3.09×108CFU/g），與對照組相比存在顯著差異（P＜0.05）。在停止灌胃1周后，小鼠腸道雙歧桿菌數(shù)量有所降低（7.76×107CFU/g），但仍比灌胃前（3.80×107CFU/g）高約0.4個數(shù)量級。

如圖4c所示，乳源CGMP高劑量組小鼠腸道中雙歧桿菌數(shù)量沒有明顯的變化趨勢，只是在一定范圍內(nèi)上下波動（5.13×107～1.78×108CFU/g），與對照組和安慰組相比都不存在顯著差異（P＞0.05）。

綜合分析，在不同劑量乳源CGMP灌胃小鼠的第0～3天時，小鼠腸道中雙歧桿菌數(shù)量都有增長的趨勢，說明乳源CGMP可以有效地促進雙歧桿菌增殖，但隨后乳源CGMP低、高劑量組小鼠腸道中雙歧桿菌數(shù)量開始出現(xiàn)波動，總體上促進小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌增殖的效果沒有乳源CGMP中劑量組的效果好，這說明乳源CGMP促進小鼠腸道糞便雙歧桿菌的增殖作用存在劑量選擇性。

3 討 論

隨著微生物學(xué)的快速發(fā)展和人們健康意識的提高，人們逐漸認(rèn)識到腸道微生物與宿主形成相互依賴制約的統(tǒng)一體的重要性。腸道微生物菌群數(shù)量龐大，會影響到宿主的消化、免疫和代謝能力，以及宿主的健康狀況[14]。許多分子生物學(xué)技術(shù)可用于腸道微生物多樣性的研究[15]，其中宏基因組測序技術(shù)目前在腸道微生物菌群的研究中應(yīng)用廣泛。但是宏基因組測序技術(shù)能夠確定樣本中微生物的種類，卻無法精確對其定量，而Real-time PCR可發(fā)揮其優(yōu)勢，確定樣本中某一菌種的具體數(shù)量[16-18]，同時可通過定量對比，分析某一因素是否影響腸道微生物菌群的增殖。因此，Real-time PCR技術(shù)也因其敏感性高、復(fù)現(xiàn)性好、特異性強等優(yōu)點，被廣泛地應(yīng)用于微生物菌群的定量檢測中。

開展基于Real-time PCR方法分析鑒定腸道雙歧桿菌水平的研究，選擇引物至關(guān)重要，因此本研究根據(jù)文獻報道，對5對引物的效果進行了分析評判。結(jié)果表明，以小鼠糞便樣品為模板時，引物g-Bifid-F/g-Bifid-R無任何條帶出現(xiàn)，但是Matsuki[19]和張翼[20]等卻用此引物分別對人類和大鼠腸道中的雙歧桿菌進行了定量，這就說明小鼠腸道中存在的優(yōu)勢雙歧桿菌可能與人類和大鼠腸道中不一樣。另外，Lamendella等[21]的研究結(jié)果也與本實驗結(jié)果一致，他們在研究中選擇了g-Bifid-F/g-Bifid-R、Bif164-f/Bif662r及l(fā)m26/Lm3r這3對引物對32種269個動物個體進行了糞便雙歧v桿菌的檢測，最終在25種動物糞便中發(fā)現(xiàn)了雙歧桿菌，在剩下7種動物的糞便中沒有檢測到任何雙歧桿菌。他們還證實了用引物lm26/Lm3r可在奶牛、雞等動物糞便中檢測到雙歧桿菌，且lm26/Lm3r是唯一可以在豬及兔子糞便中擴增出現(xiàn)目的片段的引物。這說明本實驗小鼠腸道中檢測出的雙歧桿菌可能與上述幾種動物腸道中存在的雙歧桿菌在菌群結(jié)構(gòu)方面較為相似。綜合分析，在沒有明確小鼠腸道中雙歧桿菌優(yōu)勢菌群的情況下，對引物進行充分選擇是很有必要的。

研究發(fā)現(xiàn)[22]雙歧桿菌是最早定殖于嬰兒腸道內(nèi)的微生物菌群之一，在人的一生中，腸道內(nèi)雙歧桿菌的構(gòu)成會隨著年齡的變化而不斷改變。Centanni等[23]采用了一種指紋圖譜芯片技術(shù)與Real-time PCR相結(jié)合的方法檢測比較了8位母乳喂養(yǎng)嬰兒（2～6個月）和5位年輕成年人糞便微生物的種類和數(shù)量。結(jié)果顯示，嬰兒的腸道菌群主要是雙歧桿菌，其次為腸桿菌科；而成人腸道菌群占主導(dǎo)地位的是厚壁菌門和擬桿菌門。如今，越來越多的研究以雙歧桿菌為切入點[24]，研究其與克羅恩病、哮喘、糖尿病和腸道疾病等多種疾病的關(guān)系。人們希望能采用一些物質(zhì)來促進雙歧桿菌的生長，比如王建等[25]選取了番茄汁、肝浸汁、VC、蜂蜜和新鮮乳清等對嬰兒雙歧桿菌進行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)它們對雙歧桿菌的生長都有促進作用。

本實驗采用Real-time PCR技術(shù)，分析不同劑量的乳源CGMP對小鼠腸道雙歧桿菌增殖水平的影響。對各組小鼠腸道中的雙歧桿菌進行定量后，發(fā)現(xiàn)對照組與安慰組的雙歧桿菌數(shù)量沒有明顯的變化趨勢，乳源CGMP低、高劑量組小鼠腸道雙歧桿菌的數(shù)量也不呈現(xiàn)一定的變化規(guī)律。灌胃中劑量的乳源CGMP時，小鼠腸道雙歧桿菌數(shù)量呈現(xiàn)出了明顯的變化趨勢，從灌胃第3天開始，雙歧桿菌數(shù)量開始上升，在第11天時達到最大值，之后雙歧桿菌數(shù)量降低，但在灌胃結(jié)束后1周內(nèi)其數(shù)量級仍高于灌胃前的水平。此結(jié)果與任效東等[26]用傳統(tǒng)培養(yǎng)方法對小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌檢測得到的結(jié)論是一致的，即灌胃適宜劑量（0.5 mg/mL）的乳源CGMP可顯著（P＜0.05）促進小鼠腸道中雙歧桿菌的增殖，而乳源CGMP低、高劑量組與安慰組及對照組相比則不存在顯著差異（P＞0.05），只是在某一生理范圍內(nèi)上下波動。低劑量的乳源CGMP對小鼠腸道雙歧桿菌沒有明顯的增殖作用，可能是因為灌胃劑量比較小，沒有達到刺激雙歧桿菌增殖的效果；高劑量的乳源CGMP同樣沒有達到促雙歧桿菌增殖的理想作用，這可能與高劑量的乳源CGMP對小鼠腸道內(nèi)其他有害菌群的作用有關(guān)系，或與小鼠腸道黏膜的耐受性相關(guān)。曹晉宜等[27]研究發(fā)現(xiàn)高劑量的乳源CGMP對小鼠盲腸中的腸桿菌等可疑致病菌不但沒有起到抑制的作用，反而有明顯的促進作用，這些腸道條件致病菌的大量增殖可能對雙歧桿菌的生長產(chǎn)生了一定的影響，從而使得高劑量乳源CGMP沒能達到促雙歧桿菌增殖的作用。這些研究也說明在各類具有某種生物活性的益生元、生物活性制劑或藥劑中，存在最合適劑量活性或藥性理論。

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Real-Time PCR for Detecting the Growth-Promoting Effect of Casein Glycomacropeptide on Intestinal Bifidobacteria in Mice

JIANG Yan, CHEN Qingsen*, LI Junjie, YAN Yali, ZHAO Pei
(Tianjin Key Laboratory of Food Biotechnology, College of Biotechnology and Food Science, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China)

Purpose∶ Toanalyze the growth-promoting effects of different doses of casein glycomacropeptide (CGMP) on intestinal bifi dobacteria in mice byquantitativereal-time polymerase chain reaction PCR (qRT-PCR), which reveal whethe r or not CGMP derived from milk is able to proliferate the key intestinal probiotics. Methods: A total of 50 healthyBALB/c mice were randomlydivided into fi ve groups: control group (daily diet), placebo group (0.2 mL of normal saline), low-, mode rate-, high-dose CGMP treatments (the same volume as normal saline at different concentrations).The administration durati on was 2 weeks.We took the fresh feces of mice after 0, 3, 5, 7, 9, 11, 13 and 15 consecutive days of once-daily administration and at 6 days after the last administration for genomic DNA extraction. Five pairs of group-specifi c primers for bifi dobacteria were designed according to 16S rRNA sequence.Bifi dobacterium bifi dumCICC6071 was used to make the standard curve by gradient dilution to determine the response sensitivity. The melting curves of PCR products were used to evaluate the specificity. The results indicated that qRT-PCR could accurately quantify the number of mouse intestinal bifidobacteria. The moderate dose of CGMP could promote the growthof bifi dobacteria and the number of bifi dobacteria reached the maximum after 11 days of administration. This study demonstrates that CGMP from milk has the function of regulating the mouse intestinal bifi dobacteria in a dose-dependent manner.

real-time polymerase chain reaction; casein glycomacropeptide (CGMP);Bifi dobacterium; mouse feces

TS252.9

1002-6630（2015）17-0219-06

10.7506/spkx1002-6630-201517041

2015-04-17

國家自然科學(xué)基金面上項目（31071522）

江巖（1990—），女，碩士研究生，研究方向為發(fā)酵生物技術(shù)。E-mail：jiangyanjssh@126.com

*通信作者：陳慶森（1957—），男，教授，碩士，研究方向為發(fā)酵生物技術(shù)、蛋白資源開發(fā)與應(yīng)用。E-mail：chqsen@tjcu.edu.cn