趙 媛，胡恩亮，鄭 恬，王 妍，鄭善鑾

(第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西西安710032)

有核紅細(xì)胞(nucleated red blood cell，NRBC)一般僅存在于骨髓中，在出生1周內(nèi)的新生兒外周血中可見到少量的NRBC，如成人外周血涂片中出現(xiàn)NRBC均屬病理現(xiàn)象[1]，常見于晚幼紅細(xì)胞或中幼紅細(xì)胞多見的增生性貧血，如各種溶血性貧血等，以及原紅細(xì)胞、早幼紅細(xì)胞多見的紅血病、紅白血病，亦可見于髓外造血、骨髓纖維化、骨髓轉(zhuǎn)移癌、嚴(yán)重缺氧等疾病。因此，準(zhǔn)確計(jì)數(shù)血液中NRBC對(duì)鑒別各種血液疾病具有重要的臨床意義。計(jì)數(shù)NRBC最經(jīng)典的方法是用顯微鏡油鏡分類計(jì)數(shù)瑞氏染色血涂片中100個(gè)白細(xì)胞(white blood cell，WBC)時(shí)所見到的NRBC數(shù)量，即NRBC在血液中的百分率(NRBC%)[2]。SYSMEX XN-3000 血液分析儀(簡稱XN-3000)可對(duì)外周血中NRBC進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，計(jì)數(shù)原理是利用熒光染色對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色，流式法測(cè)定側(cè)向熒光強(qiáng)度(反映細(xì)胞核酸含量多少)和前向散射光強(qiáng)度(反映細(xì)胞體積大小)，將其與 WBC、紅細(xì)胞以及血小板區(qū)別。為了解XN-3000對(duì)外周血NRBC計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性及異常提示信息的可靠性，本研究將XN-3000檢測(cè)NRBC結(jié)果與人工顯微鏡鏡檢法進(jìn)行了比較和評(píng)價(jià)。

材料和方法

一、研究對(duì)象

第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院住院患者96例，男61例，女35例，其中確診血液病患者72例，非血液病患者24 例，年齡為(41.34 ±6.23)歲。

二、儀器與試劑

XN-3000和SYSMEX-SP10推片機(jī)配套試劑和質(zhì)控品，BASO染液。OLYMPUS顯微鏡、Cellavison自動(dòng)閱片機(jī)和乙二胺四乙酸二鉀血液抗凝管。

三、NRBC計(jì)數(shù)

1.XN-3000儀器法 嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程執(zhí)行，在室內(nèi)質(zhì)控在控后，檢測(cè)乙二胺四乙酸二鉀抗凝血標(biāo)本，并在4 h內(nèi)檢測(cè)完畢。

2.顯微鏡鏡檢法 取乙二胺四乙酸二鉀抗凝血標(biāo)本，在SYSMEX-SP10推片機(jī)(BASO染液)制備血片，2 h內(nèi)完成。形態(tài)學(xué)檢查由經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)專業(yè)培訓(xùn)的主管技師按全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行顯微鏡鏡檢，分類200個(gè)WBC，計(jì)數(shù)NRBC數(shù)量，以NRBC/100WBC表示。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、重復(fù)性試驗(yàn)

取NRBC計(jì)數(shù)百分?jǐn)?shù)為高值、中值、低值的標(biāo)本，由專業(yè)人員在30 min內(nèi)進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)各5次，結(jié)果顯示XN-3000檢測(cè)重復(fù)性好。見表1。

表1 NRBC%重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

二、敏感性和特異性

以顯微鏡鏡檢法為參照標(biāo)準(zhǔn)，32份標(biāo)本XN-3000檢測(cè)NRBC陰性，血片手工復(fù)檢出現(xiàn)1例NRBC陽性;64例標(biāo)本 XN-3000檢測(cè) NRBC陽性，血片手工復(fù)檢出現(xiàn)62例陽性;XN-3000檢測(cè)NRBC的敏感性 98.41%(62/63)，特異性為93.94%(31/33)，假陽性率為3.13%(2/64)，假陰性率為3.13%(1/32)。見表2。

表2 XN-3000和顯微鏡鏡檢法檢測(cè)NRBC的結(jié)果比較

三、XN-3000與顯微鏡計(jì)數(shù)NRBC的相關(guān)性

XN-3000提示NRBC陽性的標(biāo)本64例，以分類100個(gè)WBC所算得的NRBC計(jì)數(shù)百分?jǐn)?shù)和顯微鏡計(jì)數(shù)的NRBC計(jì)數(shù)百分?jǐn)?shù)顯示出良好的線性相關(guān)(r2=0.867)。見圖1。

圖1 2種方法計(jì)數(shù)外周血NRBC的相關(guān)性

NRBC計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)在(0～50)×1012/L時(shí)，r2=0.931;NRBC計(jì)數(shù)的細(xì)胞數(shù)在(0～200)×1012/L時(shí)，r2=0.957。2種方法 64例標(biāo)本的NRBC計(jì)數(shù)百分?jǐn)?shù)進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.019)。

討 論

外周血中NRBC出現(xiàn)和數(shù)量與諸多血液病診斷和預(yù)后有關(guān)[3-8]，因而臨床上很關(guān)注。作為實(shí)驗(yàn)室是否能提供快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果顯得尤為重要。傳統(tǒng)的顯微鏡手工法在時(shí)間和人員上有一定局限性，因此XN-3000檢測(cè)外周血NRBC在保證結(jié)果準(zhǔn)確性的同時(shí)，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了工作效率，第一時(shí)間為臨床提供了診斷支持。

XN-3000通過計(jì)算NRBC與100個(gè)白細(xì)胞的比值(NRBC/100WBC)對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果自動(dòng)校準(zhǔn)。與手工顯微鏡鏡檢法相比，XN-3000測(cè)定NRBC結(jié)果客觀，并可通過散點(diǎn)圖清楚顯示NRBC的分布，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)有NRBC的異常標(biāo)本。在本研究中64例XN-3000提示陽性的標(biāo)本與顯微鏡鏡檢法檢測(cè)結(jié)果比較，相關(guān)性良好，(r2＞0.867)，配對(duì) t檢驗(yàn)顯示 P=0.019，表明 XN-3000基本可替代顯微鏡鏡檢法檢測(cè)外周血NRBC。

XN-3000檢測(cè)NRBC的敏感性為98.41%，特異性為93.94%，假陽性率為3.13%。由于儀器計(jì)數(shù)細(xì)胞多，無人為主觀誤差和血涂片上細(xì)胞分布的誤差，其敏感性更高，在NRBC數(shù)值較低時(shí)，人工計(jì)數(shù)未見NRBC是可預(yù)見偏差，也是造成少量假陽性結(jié)果的主要原因。至于假陰性率3.13%，可能由于個(gè)人對(duì)細(xì)胞形態(tài)識(shí)別差異、NRBC在涂片上分布差異以及檢驗(yàn)人員在選擇計(jì)數(shù)視野的差異所致。

綜上所述，使用XN-3000進(jìn)行外周血NRBC計(jì)數(shù)，其檢測(cè)結(jié)果重復(fù)性好，方法可靠，操作簡便快速，正確性高，有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三.全國臨床檢驗(yàn)操作[M].南京:東南大學(xué)出版社，1991:13.

[2]王欣，滕娟，郝少麗.血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)幼稚紅細(xì)胞的準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30(9):1056-1057.

[3]STACHON A，SONDERMANN N，IMOHL M，et al.Nucleated red blood cells indicate high risk of inhospital mortality[J].J Lab Clin Med，2002，140(6):407-412.

[4]STACHON A，HOLLAND-LETZ T，KRIEG M.High in-hospital mortality of intensive care patients with nucleated red blood cells in blood[J].Clin Chem Lab Med，2004，42(8):933-938.

[5]KRAJEWSKI P，WELFEL E，KALINKA J，et al.Evaluation of the relationship between circulating nucleated red blood cells count and inborn infection in neonates[J].Ginekol Pol，2008，79(1):17-22.

[6]HUANG R，BARBER TA，SCHMIDT MA，et al.A micro-fluidics approach for the isolation of nucleated red blood cells(NRBCs)from the peripheral blood of pregnant women[J].Prenat Diagn，2008，28(10):892-899.

[7]STEURER MA，BERGER TM.Massively elevated nucleated red blood cells an cerebral or pulmonary hemorrhage in severely growth-restricted infants-is there more than coincidence[J].Neonatology，2008，94(4):314-319.

[8]DE KEIJER MH，VAN DER MEER W.Automated counting of nucleated red blood samples[J].Clin Lab Haem atol，2002，24(6):343-345.