鄭業(yè)煥，陳 玕，王則宇，馬 冰，席 宇，朱大恒

(1.鄭州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河南鄭州450001;2.河南省疾病預(yù)防控制中心，河南鄭州450016;3.河南省人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南鄭州450003)

解脲脲原體是寄生于泌尿生殖道的病原體，常引起非淋菌性尿道炎、宮頸炎、盆腔炎、睪丸炎和附睪炎等疾病，并可引起男女不育不孕(西方國家已作為不明原因不育不孕癥的必查項(xiàng)目)[1]。由于抗菌藥物的濫用，國內(nèi)外出現(xiàn)了多重耐藥的解脲脲原體，給臨床治療帶來了極大的困難。2011年，美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(Clinical and Laboratory Standards Institude，CLSI)推出了關(guān)于人支原體體外藥物敏感性試驗(yàn)，即CLSI M43-A標(biāo)準(zhǔn)指南[2]，該指南為臨床支原體體外藥物敏感性試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化提供了依據(jù)。本研究依據(jù)該指南就臨床收集的219株解脲脲原體進(jìn)行體外藥物敏感性試驗(yàn)，并結(jié)合指南中的折點(diǎn)值對其敏感性結(jié)果進(jìn)行判讀，以考察該指南在臨床試驗(yàn)中的情況，為解脲脲原體的臨床治療提供參考價(jià)值，指導(dǎo)臨床合理用藥。

材料和方法

一、解脲脲原體來源

篩選河南省人民醫(yī)院2012年9月至2013年11月疑似支原體感染患者，從女性宮頸分泌物和男性尿道分泌物、尿液、精液等臨床樣本中分離的219株解脲脲原體(排除同一感染株)，經(jīng)分離鑒定后置于支原體肉湯培養(yǎng)基中-80℃?zhèn)溆茫怆咫逶w(ATCC 33175)質(zhì)控株由鄭州安圖生物工程股份有限公司提供。

二、試劑

采用Oxoid公司支原體肉湯CM0403(批號1242053)及SR0059C添加劑(批號1028599)，按照說明書要求配置相應(yīng)支原體肉湯培養(yǎng)基，并補(bǔ)加酚紅指示劑。所用抗菌藥物均為標(biāo)準(zhǔn)品，其中左氧氟沙星、莫西沙星、四環(huán)素、紅霉素均購于中國藥品生物制品檢定所，泰利霉素購于J＆K公司。

三、體外藥物敏感性試驗(yàn)

體外藥物敏感性試驗(yàn)操作和結(jié)果判讀參照CLSI M43-A 指南[2]及《支原體與支原體病》[3]。采用微量肉湯稀釋法，在96孔酶標(biāo)板每一排的2～12孔各加100μL肉湯培養(yǎng)基;加100μL含128 μg/mL抗菌藥物的肉湯培養(yǎng)基至每一排的第1和第2孔;從每一排的第2孔至12孔作對倍稀釋;加100μL含有104～105CCU解脲脲原體新鮮肉湯培養(yǎng)基至每一孔;設(shè)立陰性對照、抗菌藥物對照、陽性對照;密封酶標(biāo)板，35～37℃環(huán)境下孵育48 h，陽性對照孔肉湯培養(yǎng)基顏色由黃色變?yōu)榉奂t色，記錄最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration，MIC)值。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行 χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、質(zhì)控結(jié)果

陰性對照、抗菌藥物對照和陽性對照結(jié)果均無異常，用CLSI M43-A指南規(guī)定的解脲脲原體(ATCC 33175)進(jìn)行質(zhì)控，測定的結(jié)果及標(biāo)準(zhǔn)要求見表1。

二、微量肉湯稀釋法測定219株解脲脲原體的MIC值

219株解脲脲原體的MIC值見表2。

表1 解脲脲原體(ATCC 33175)質(zhì)控結(jié)果及要求 (μg/mL)

表2 219株解脲脲原體的MIC值

三、解脲脲原體藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果

標(biāo)國按照CLSI M43-A指南判讀標(biāo)準(zhǔn):左氧氟沙星MIC≤2μg/mL為敏感，MIC≥4 μg/mL為耐藥;莫西沙星MIC≤2 μg/mL 為敏感，MIC≥4 μg/mL 為耐藥;四環(huán)素 MIC≤1 μg/mL 為敏感，MIC≥2 μg/mL為耐藥;紅霉素 MIC≤8 μg/mL為敏感，MIC≥16μg/mL為耐藥;泰利霉素 MIC≤4 μg/mL為敏感。把本次219例解脲脲原體的敏感性進(jìn)行判讀分析，結(jié)果見表3。

表3 219株解脲脲原體的體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果 [株(%)]

討 論

支原體體外藥物敏感性試驗(yàn)于20世紀(jì)60年代首次開展，隨后國內(nèi)外發(fā)表的有關(guān)支原體體外藥物敏感性試驗(yàn)方法和結(jié)果的文獻(xiàn)報(bào)道各不相同，但缺少普遍可接受或標(biāo)準(zhǔn)化的方法。M43-A文件經(jīng)歷10余年，由CLSI小組組織了一系列的支原體體外藥物敏感性試驗(yàn)研究，經(jīng)美國、加拿大、法國的10個(gè)實(shí)驗(yàn)室依據(jù)研究成果達(dá)成的共識撰寫而成[4]。M43-A是第1個(gè)公布的、提供了標(biāo)準(zhǔn)化的瓊脂法和肉湯稀釋法進(jìn)行支原體藥物敏感性試驗(yàn)的規(guī)范性文件，并用質(zhì)控菌株給出了可參考的抑菌濃度范圍。本研究參照該指南對質(zhì)控株進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果符合指南要求，說明了試驗(yàn)的有效性。

參照CLSI M43-A指南，219株臨床解脲脲原體對5種抗菌藥物的敏感性結(jié)果分別為左氧氟沙星70.78%、莫西沙星 90.87%、四環(huán)素 87.21%、紅霉素84.93%和泰利霉素98.17%。同為喹諾酮類的左氧氟沙星和莫西沙星的敏感性經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，莫西沙星作為最新的第4代喹諾酮類抗菌藥物，藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)更趨良好[5]，這可能與這2種抗菌藥物上市的時(shí)間及臨床使用情況有關(guān)。在本研究中泰利霉素表現(xiàn)出了極高的臨床敏感性，該種抗菌藥物在SFDA數(shù)據(jù)庫暫未查到授權(quán)上市，極高的敏感性可能與該種抗菌藥物未在國內(nèi)臨床使用有關(guān)。

之前，法國生物梅里埃公司的商品化Mycoplasma IST2產(chǎn)品被認(rèn)可并廣泛使用，根據(jù)IST2的判斷標(biāo)準(zhǔn)，紅霉素的敏感性多在70%以下，四環(huán)素的敏感性多在90%以上[6-10]。進(jìn)一步研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，IST2針對紅霉素的折點(diǎn)值設(shè)定為1和4 μg/mL，要低于CLSI M43-A指南中的折點(diǎn)值，四環(huán)素的折點(diǎn)值設(shè)定為4和8 μg/mL，要稍高于CLSI指南中的折點(diǎn)值。如果按照生物梅里埃公司的IST2折點(diǎn)判讀本次研究的數(shù)據(jù)，紅霉素的敏感性由84.93%下降為60.73%，四環(huán)素的敏感性由87.21%上升為95.43%。由此可見折點(diǎn)值的差異對結(jié)果的判讀影響重大。此外，這種差異也可能因指南中所要求的培養(yǎng)液pH值和成分與商品化產(chǎn)品中的培養(yǎng)液pH值和成分有差異所致。

體外藥物敏感性試驗(yàn)是臨床醫(yī)師選擇抗菌藥物的重要參考依據(jù)，正確的藥物敏感性試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)非常重要。隨著CLSI M43-A的推出，使支原體體外藥物敏感性試驗(yàn)將更加標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化，支原體體外藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果將更加準(zhǔn)確可靠，將為臨床支原體預(yù)防及治療提供重要參考依據(jù)。但該指南是否適合中國的國情，是否會(huì)存在地域、人種或人群的差異，值得進(jìn)一步思考和研究。

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