陳同偉

(嘉善縣中醫(yī)醫(yī)院檢驗科，浙江嘉善314100)

隨著全球人口老齡化日益加劇，老年期認知障礙的發(fā)病率也逐漸增加，其中阿爾茨海默病(Alzheimer disease，AD)的發(fā)病率最高，已成為當今社會面臨的難題之一。AD是一種以進行性認知障礙和記憶能力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。有研究表明[1]在多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中存在細胞凋亡的異常，而 Fas/Fas配體(sFas ligand，F(xiàn)asL)系統(tǒng)在介導細胞凋亡過程中起到重要的信號傳遞作用。研究表明Fas介導的細胞凋亡參與了AD的病理生理過程[2]。為此，本研究通過檢測不同程度的AD患者的血清可溶性Fas(soluble Fas，sFas)及其配體(sFasL)水平，探討其與AD發(fā)生的關系。

材料和方法

一、研究對象

選取2012年10月至2013年12月在嘉善縣中醫(yī)醫(yī)院住院的AD患者100例，男55例，女45例，年齡56～83歲，均符合美國精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊(第4版)制定的AD診斷標準。根據(jù)臨床癡呆評定量表(clinical dementia rating，CDR)評分將AD患者分為輕度癡呆組(30例，男16例，女14例，年齡54～80歲)、中度癡呆組(45例，男24例，女21例，年齡57～84歲)和重度癡呆組(25例，男15例，女10例，年齡62～86歲)。另選取同期嘉善縣中醫(yī)醫(yī)院體檢者100例，根據(jù)臨床體檢結果有無異常分為老年疾病對照組和正常對照組。老年疾病對照組共54例，男28例，女26例，年齡60～87歲，包括17例糖尿病患者、18例高血壓患者、15例高血脂患者及4例其它內(nèi)分泌疾病患者。正常對照組共46名，男20名，女16名，年齡57～85歲，均無心腦血管疾病、無高血壓、無智能障礙、無神經(jīng)精神科疾病史、內(nèi)分泌疾病史及癡呆家族史，近期無感染性疾病。各組之間年齡及性別構成差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表1。所有研究對象均簽署知情同意書。

表1 AD組和對照組一般資料比較

二、納入及排除標準

1.納入標準 (1)根據(jù)神經(jīng)心理量表檢測證實有癡呆，簡易智能精神狀態(tài)量表(mini-mental state examination，MMSE)評分 ＜17(文盲)、20(小學)、24(中學及以上)測評確定;Hachinski缺血指數(shù)量表(Hachinski ischemic scale，HIS)＜4分，不以抑郁為起病形式;(2)至少有兩項認知功能的受損:記憶力、計算力或定向力等;(3)記憶或其他認知功能進行性損害;(4)無意識障礙;(5)發(fā)病年齡在50～90歲;(6)進行性記憶力和其他認知功能障礙，不能用系統(tǒng)性疾病或其它腦部疾病來解釋;(7)病程半年以上。

2.排除標準 (1)突然地卒中樣起病;(2)早期出現(xiàn)局灶性神經(jīng)系統(tǒng)特征，如偏癱、感覺喪生、視野缺損、共濟失調(diào);(3)早期或起病時出現(xiàn)癲癇發(fā)作或步態(tài)障礙;(4)近期有感染性疾病發(fā)生;(5)近期服用激素類藥物;(6)顱內(nèi)腫瘤、占位性病變等疾病。

三、方法

1.測試工具 (1)以MMSE為癡呆篩查工具，篩選對照組;(2)以HIS評定癡呆類型，4分以下多為AD;(3)以CDR評定癡呆程度。以上評定均由2名具有高級職稱的臨床醫(yī)生進行。

2.標本的采集和測定 血樣本采集均經(jīng)當事人或家屬同意，患者于入院后次日早晨8點前抽取空腹靜脈血4 mL，室溫靜置凝集1 h后，以900×g離心10 min，取血清分裝于EP管中，置－70℃保存待檢。體檢者同樣按上述要求留取血樣保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinked immunosorbent assay，ELISA)檢測血清 sFas和sFasL水平，試劑盒購自美國R＆D公司，嚴格按照操作說明書進行。測定標本在450 nm波長下的吸光度(A)值，根據(jù)標準曲線的直線回歸方程計算出sFas和sFasL水平。

四、統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析。數(shù)據(jù)均呈正態(tài)分布，采用±s表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組比較采用單因素方差分析，相關分析采用Pearson相關。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

一、AD組、老年疾病對照組及正常對照組血清sFas、sFasL水平比較

AD組血清sFas、sFasL水平明顯高于老年疾病對照組和正常對照組(P＜0.01)。AD組輕度癡呆、中度癡呆及重度癡呆血清sFas、sFasL水平明顯高于正常對照組(P＜0.01)，且隨著癡呆程度的加重，血清sFas和sFasL水平也逐漸增高。見表2。

二、AD患者血清 sFas和 sFasL與病程、年齡、MMSE評分及HIS評分的相關性分析

血清sFas與年齡、病程、MMSE評分呈正相關(r值分別為 0.856、0.834、0.799，P ＜0.01)，與 HIS評分呈負相關(r= －0.714，P ＜0.01);血清sFasL與年齡、病程呈正相關(r值分別為0.863、0.857，P ＜0.01)，與 MMSE、HIS 評分呈負相關(r值分別為 －0.801、－0.745，P ＜0.01)。

表2 AD組、老年疾病對照組及正常對照組血清sFas、sFasL水平比較 (±s，μg/L)

表2 AD組、老年疾病對照組及正常對照組血清sFas、sFasL水平比較 (±s，μg/L)

注:與正常對照組比較，*P＜0.01;與老年疾病對照組比較，#P ＜0.01

組別 例數(shù)sFas sFasL AD 組 100 52.4 ±16.7*#118.2 ±34.1*#輕度癡呆組 30 34.3 ±5.7*# 89.3 ±11.7*#中度癡呆組 45 50.4 ±8.5*# 107.4 ±22.1*#重度癡呆組 25 64.5 ±12.4*#123.5 ±29.5*#老年疾病對照組 54 20.3 ±8.3* 75.5 ±25.6*正常對照組46 12.4 ±5.5 51.8 ±22.7

討 論

細胞凋亡是機體在生長、發(fā)育過程中受到外來刺激時，為保持機體內(nèi)環(huán)境的一種自我調(diào)節(jié)方式，而Fas/FasL途徑是細胞凋亡中最主要的途徑之一。Fas屬腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF)家族，主要在激活的B細胞、巨噬細胞、NK細胞上表達，F(xiàn)asL主要在激活的T細胞上表達，兩者結合可致表達Fas的細胞凋亡[2]。研究認為Fas抗原介導凋亡的機制是通過與之相應的配體(FasL)或單克隆抗體結合后發(fā)出凋亡信號，并傳遞至細胞內(nèi)，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄，從而誘導細胞凋亡。細胞過度凋亡會引起神經(jīng)退行疾病，如AD。AD是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變。研究表明Fas介導的細胞凋亡參與了AD的疾病發(fā)展過程[3-4]。本研究結果顯示 AD患者血清 sFas和sFasL水平明顯高于正常對照組和老年疾病對照組，與文獻報道[5]相符;且隨著癡呆程度的提高，血清sFas和sFasL呈逐漸升高趨勢。由此提示sFas和sFasL可能參與了AD疾病中的神經(jīng)細胞凋亡的過程，與AD的發(fā)生、發(fā)展有密切關系。因此血清sFas和sFasL對于癡呆的嚴重程度有一定的預示作用，臨床上可考慮將血清sFas和sFasL水平作為癡呆病情發(fā)展的監(jiān)測指標之一。

智能水平和腦缺血指數(shù)是評定老年人大腦神經(jīng)細胞功能的量化指標。本研究結果顯示AD患者sFas與年齡、病程及MMSE評分呈正相關(r值分別為0.856、0.834、0.799，P ＜0.01)，而與 HIS評分呈負相關(r= －0.714，P ＜0.01)，這與國外研究結果(隨著年齡增長，sFas的表達明顯增高)[6]相一致。血清sFasL與年齡、病程呈正相關(r值分別為0.863、0.857，P ＜0.01)，而與 MMSE和HIS評分呈負相關(r值分別為 －0.801、－0.745，P ＜0.01)。原因可能是 sFas形成寡聚體與sFasL結合，反過來加劇sFasL陽性細胞的死亡，從而加速患者的癡呆進程，這與PROUSSAKOVA等[7]的報道一致。提示血清sFas和sFasL濃度與患者的智能水平和腦缺血程度存在某些關聯(lián)。但因本研究的病例數(shù)較少，該結論還需要大樣本、長期的研究才能進一步證實。

總之，AD患者存在血清sFas和sFasL水平異常，且其水平的高低與患者的癡呆程度有關，可能是AD患者病情進一步發(fā)展的原因之一。

[1]許靜，蒲傳強.Fas/FasL在神經(jīng)系統(tǒng)疾病作用的研究進展[J].國際神經(jīng)病學神經(jīng)外科學雜志，2013，40(3):297-298.

[2]張玲英，洪華，葉長寧，等.類風濕關節(jié)炎患者血清sFas、sFasL和 IL-18水平及意義[J].檢驗醫(yī)學，2004，19(2):104-105.

[3]CRAIG-SCHAPIRO R，KUHN M，XIONG C，et al.Multiplexed immunoassay panel identifies novel CSF biomarkers for Alzheimer's disease diagnosis and prognosis[J].PLoS One，2011，6(4):e18850.

[4]SU JH，ANDERSON AJ，CRIBBS DH，et al.Fas and Fas ligand are associated with neuritic degeneration in the AD brain and participate in beta-amyloid-induced neuronal death [J].Neurobiol Dis，2003，12(3):182-193.

[5]ERTEN-LYONS D，JACOBSON A，KRAMER P，et al.The FAS gene，brain volume，and disease progression in Alzheimer's disease[J].Alzheimers Dement，2010，6(2):118-124.

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[7]PROUSSAKOVA OV，RABAYA NA，MOSHNIKOVA AB，et al.Oligomerization of soluble Fas antigen indues its cytotoxicity [J].J Biol Chem，2003，278(38):36236-36241.