摘 要：維生素C又名抗壞血酸，是白色結晶或結晶性粉末，無臭，味酸，久置顏色逐漸變微黃；受光照則逐漸變褐，干燥狀態(tài)下在空氣中相當穩(wěn)定，但在空氣存在下于溶液中則迅速變質，pH值3.4～4.5時較穩(wěn)定。在水中易溶，在乙醇中略溶，在氯仿或乙醚中不溶。閃點99℃；熔點187℃～192℃，熔融時同時分解。呈強還原性，有抑制多酚氧化酶作用。

關鍵詞：材料；步驟；方法；

中圖分類號：R741 文獻標識碼：A 文章編號：1674-3520（2014）-12-00-02

動物生理學研究顯示，近幾十年來為如何提高畜產品質量提供科學依據(jù)，為不同的動物，提供不同的營養(yǎng)配方，進一步利用智能化的計算機對動物個體進行診斷并給予營養(yǎng)配方，運用飼養(yǎng)成果的檢測與評價，調整飼料營養(yǎng)配方，以達到提高畜禽產品的質量，預防和治療疾病的效果，提高人們生活水平的研究越來越多。

維生素C一般有以下幾種存在方式，維生素C[英文名：Vitamin C （L-Ascorbic acid）]、維生素C 100目（百目維生素C）、維生素C顆粒[維生素C-DC97]等等。本實驗采用的是維生素C顆粒。詳細信息如下：白色至微黃色固體顆粒，是由維生素C和淀粉按一定比例制成，作用與維生素C基本相同，維生素C顆粒具有較好的流動性、可壓性和易混合性，色澤穩(wěn)定，用于口服和咀嚼片的直接壓制，也可用于維生素礦物質復合片的壓制，性狀白色至微黃色固體顆粒：砷≤0.0003%，重金屬（以Pb計）≤0.001%，干燥失重≤0.20%，含量96%～98%。

肌細胞疲勞的詳細機制尚不完全清楚，目前認為可能與下列因素有關。

能源物質耗竭 劇烈運動后肌肉之所以出現(xiàn)疲勞，原因之一是由于能源物質的耗竭。從肌肉收縮的細胞學機制可以看出，肌肉的收縮和舒張都有賴于三磷酸腺苷，因此三磷酸腺苷的缺乏將導致肌肉收縮和舒張功能的障礙。但研究證實[6]，甚至在高強度運動疲勞時細胞內的三磷酸腺苷也很有下降到運動前水平的70%以下，因此認為運動疲勞的原因不在于三磷酸腺苷本身，可能是由于其他原因降低了三磷酸腺苷酶的活性使其利用率降低，或是由于三磷酸腺苷再合成時的后備能源。

一、實驗材料

選用規(guī)格相近，色彩鮮艷，健康活潑的蛙30只，Pclab-UE生物醫(yī)學信號采集儀，蛙類解剖器械，任氏液、維生素C。

二、方法及步驟

（一）分組

選用規(guī)格相近，色彩鮮艷，健康活潑的蛙30只，經典方法制備腓腸肌標本，分別置于25℃的維生素C濃度分別為0mmol/L、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L、3.0 mmol/L、4.0 mmol/L 、5.0 mmol/L 、6.0 mmol/L 、7.0 mmol/L的任式液中浸泡5分鐘待測。

（二）蛙坐骨神經腓腸肌標本制作

1、分離坐骨神經 取一條腿放置在蛙板上，用一根固定針將粗制標本的脊柱固定在蛙板上（腹面朝上），將下肢拉直并向外旋轉趾蹼朝上，用固定針在跖骨部固定在蛙板上，用玻璃分針沿脊柱旁游離坐骨神經至尾骨處、再循坐骨神經溝（股二頭肌和半膜肌之間的裂逢處），找出坐骨神經的大腿段，用玻璃分針仔細剝離，剪斷坐骨神經的所有分支，并將神經分離直至膝關節(jié)處。

2、分離腓腸肌 用玻璃分針或鑷子將腓腸肌跟腱分離，并穿線結扎。在結扎遠端用粗剪刀剪斷跟腱，左手執(zhí)線提起腓腸肌，以手術剪刀剪去其周圍聯(lián)系的組織，但保留腓腸肌起始點與骨的聯(lián)系，唯須注意勿損傷支配該肌的神經分支。

3、游離坐骨神經腓腸肌標本 將該后肢股部所有肌肉從膝關節(jié)起沿股骨剝離并剪去，以粗剪刀在股骨上中1/3處剪斷股骨，剪下一小段與神經相連的脊柱（約3個脊椎骨）在膝關節(jié)下將小腿剪掉，留下的即為坐骨神經腓腸肌標本。

4、檢查標本的興奮性 用經任氏溶液潤濕的鋅銅弓輕輕接觸一下坐骨神經，如腓腸肌發(fā)生迅速而明顯的收縮，則表明標本的興奮性良好，即可將標本放在盛有任氏液的培養(yǎng)皿中，以備實驗用。若無鋅銅弓，亦可用中等強度單個電刺激作上述試驗。

（三）試驗過程

1、配置含有不同濃度的維生素C的任氏液8組，在25攝氏度下保溫，濃度分別為0mmol/L（對照組）、1.0 mmol/L、2.0 mmol/L、3.0 mmol/L、、4.0 mmol/L 、5.0 mmol/L 、6.0 mmol/L 、7.0 mmol/L。（其中一組為對照組，七組為預試驗，待找出適宜范圍后，再分三組進行比較試驗）。

2、隨機選擇規(guī)格相近，色彩鮮艷，健康活潑的牛蛙30只。以上方法制備蛙坐骨神經腓腸肌標本，分別置于含不同濃度的維生素C的任氏液中浸泡5分鐘待測

3、打開計算機，啟動生物信號采集處理系統(tǒng)，進入“刺激頻率對骨骼肌收縮的影響”模擬實驗菜單，用計算機生物信號采集處理系統(tǒng)進行。以波寬為1ms，從最小刺激強度開始逐漸增加刺激強度對肌肉進行刺激，找到剛剛引起肌肉最大收縮的刺激強度，即為該標本的最適刺激強度，整個實驗過程中均固定在此刺激強度上（一般為5～7.5v）。

4、用單刺激作用于坐骨神經，可記錄到肌肉的單收縮曲線。用雙刺激作用于坐骨神經，使兩次刺激間隔時間為0.06～0.08s，記錄復合收縮曲線（紙速25～50mm/s）。將刺激方式置于“連續(xù)”，其余參數(shù)固定不變，用頻率為1、6、10、15、20、30Hz的連續(xù)刺激作用于作用于坐骨神經，可記錄到單收縮、不完全強直收縮和完全強直收縮曲線（紙速2～10mm/s）。

5、將蛙坐骨神經腓腸肌標本固定于恒溫容器，跟鏈端連接HU-I型肌肉張力換能器（五號教學提供），刺激電極置于肌腹上，采用D951生理實驗教學系統(tǒng)，刺激信號（912ms.7.5v）有4道輸出至刺激電極，給予連續(xù)刺激，肌肉張力信號經4道輸入記錄分析系統(tǒng)，連續(xù)記錄單收縮波形（靈敏度0.5，掃描速度32ms/div）至波幅下降至50%為止。

6、分別計算蛙坐骨神經腓腸肌收縮的強度和一個單收縮所需的時間。

（四）統(tǒng)計與分析方法

1、記錄坐骨神經腓腸肌的收縮力量、收縮總時間。

2、統(tǒng)計各組的結果，以平均值±標準差表示，繪制坐骨神經腓腸肌收縮張力增量（最大時）的關系曲線。

3、統(tǒng)計函數(shù)計算并比較，采用單因子方差分析，結果以±SD表示。

三、結果與分析

（一）不同濃度對腓腸肌收縮性的影響

本次實驗為預實驗，先找出蛙坐骨神經腓腸肌標本收縮的適宜范圍后再行實驗。

此實驗結果顯示，維生素C對蛙坐骨神經腓腸肌標本的收縮性有相關性，且在一定濃度范圍內，隨著濃度的增高，收縮性增強；超過一定濃度，收縮性減弱；當濃度超過5mmol∕L時，第一次刺激后，坐骨神經腓腸肌標本發(fā)生了強直收縮。所以確定實驗組的維生素C濃度為0.5mmol∕L、2.0mmol∕L、5.0mmol∕L，并記錄每組實驗數(shù)據(jù)并采用單因子方差分析的方法檢驗實驗數(shù)據(jù)。

與對照組比較P<0.05，P<0.01，0.5mmol/L和 5.0 mmol/L的維生素C都顯著地降低蛙坐骨神經腓腸肌標本的最大收縮幅度，2.0 mmol/L 維生素C作用后，顯著地增加了肌肉最大收縮幅度即：隨著濃度的增加，坐骨神經腓腸肌的收縮強度顯示先增加后減小的變化趨勢，且差異顯著（P<0.05）。

經比較維生素C濃度為0.5 mmol/ L的任氏液中處理的坐骨神經腓腸肌標本的單收縮時間未有顯著變化（P<0.01），2.0 mmol/L維生素C浸泡后， 極顯著地縮短了蛙坐骨神經腓腸肌標本的單收縮時間，而5.0 mmol/L 維生素C浸泡后， 顯著性地增加了坐骨神經腓腸肌單收縮的時間。

通過以上實驗。腓腸肌在維生素C含量在2.0mmol/L時收縮能力最佳。濃度過高或過低都將會導致肌肉的收縮能力下降。濃度在5.0mmol/L時，肌肉在收縮的初期出現(xiàn)強直收縮，且濃度越高，強直收縮的持續(xù)時間越長。

四、討論

實驗已證實[25]血紅蛋白可使 維生素C 變成促氧化劑。骨骼肌富含肌紅蛋白， 理論上肌紅蛋白也可能使 維生素C 變成促氧化劑。因此， 維生素C對骨骼肌可能有促氧化作用， 會造成肌肉氧化損傷而升高等長收縮的靜息張力，并同時降低等長松弛速度。維生素C 可促進肌肉組織內產生超氧陰離子等活性氧， 從而造成肌肉 Ca離子處理系統(tǒng)等成分發(fā)生氧化損傷而降低了肌肉松弛能力[26]。正常條件下， 肌肉組織內產生的活性氧量很少，且內源性抗氧化能力可有效清除所產生的活性氧， 不會造成肌肉組織明顯的氧化損傷。但等長收縮能力指標的變化能更好地表征受到損傷的肌肉成分和控制收縮與松弛的環(huán)節(jié)。維生素C的C–2及C–3兩個相鄰的烯醇式羥基極易解離出H離子是極強的還原劑。細胞外的維生素C與膜內維生素E耦聯(lián)起著增強維生素E保護膜脂質的作用。肌肉持續(xù)劇烈收縮誘發(fā)大量活性氧的產生。我們發(fā)現(xiàn)經典的活性氧清除劑和具活性氧清除能力的天然產物 ，都可以延緩離體肌肉收縮疲勞。維生素 C是體內重要的活性氧清除劑。因此， 本文結果可能表明適量的維生素C能緩解肌肉疲勞并延緩衰老的可能性，但仍需大量臨床實驗驗證

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