摘要：目的 探討各種麻醉劑對小鼠晶狀體透明度的影響。方法 將環(huán)境溫度控制為（24±1）℃，分別用10%水合氯醛（400 mg/kg）、2%戊巴比妥鈉（40mg/kg）及25%烏拉坦（1000mg/kg）腹腔注射麻醉C57/BL6小鼠，擴瞳后于10、20、30、45、60min裂隙燈觀察晶狀體渾濁情況。結(jié)果 烏拉坦、水合氯醛麻醉組與戊巴比妥鈉麻醉組相比，麻醉持續(xù)時間較長，晶狀體出現(xiàn)渾濁的時間較早，渾濁程度較重；24h后裂隙燈檢測顯示各麻醉組晶狀體恢復透明狀態(tài)。結(jié)論 不同麻醉劑誘導小鼠晶狀體出現(xiàn)突發(fā)性渾濁的程度不同，使用小鼠進行晶狀體等眼球相關(guān)實驗時，要注意麻醉劑的選擇，減少對實驗結(jié)果的影響。

關(guān)鍵詞：麻醉；小鼠；晶狀體在研究晶狀體病變或者視網(wǎng)膜病變等眼科相關(guān)疾病時，C57/BL6小鼠已成為常見的實驗動物，麻醉是動物實驗中重要的步驟，麻醉后晶狀體是否透明在進行ERG、VEP、OCT等眼科儀器檢測時是至關(guān)重要的因素[1]。有研究指出，用甲苯噻嗪/氯胺酮、水合氯醛在進行常規(guī)麻醉時，會誘導小鼠晶狀體出現(xiàn)突發(fā)性可逆性渾濁，并干擾眼科儀器的檢查，影響實驗結(jié)果[2，3]，并指出麻醉后實驗動物出現(xiàn)晶狀體渾濁與溫度有關(guān)[2，4]。在前期研究中，我們也已經(jīng)證實了低溫會誘導麻醉后C57/BL6小鼠晶狀體出現(xiàn)渾濁，因此，本實驗將溫度恒定在（24±1）℃，擬探討各種麻醉劑對小鼠晶狀體透明度的影響，為進行眼科動物實驗麻醉提供研究基礎。

1資料與方法

1.1實驗材料、試劑及主要儀器

1.1.1動物健康雄性C57/BL6小鼠36只，2個月齡，體重19～24g。由中南大學湘雅醫(yī)學院實驗動物中心提供。所有小鼠實驗前托吡卡胺眼液擴瞳后經(jīng)裂隙燈檢測，晶狀體均透明正常。

1.1.2試劑及主要儀器麻醉劑水合氯醛、戊巴比妥鈉、烏拉坦（國藥集團化學試劑有限公司）；托吡卡胺擴瞳眼液（武漢五景藥業(yè)有限公司）；主要儀器為HS900BQ裂隙燈（瑞士）。

1.2方法

1.2.1實驗動物分組及處理將小鼠隨機分為4組：包括未經(jīng)任何處置的正常對照組，其余三組分別用2%戊巴比妥鈉（40mg/kg）、25%烏拉坦（1000mg/kg）及10%水合氯醛（400mg/kg）腹腔注射麻醉，各麻醉組先后進行2次麻醉，間隔時間為24h。實驗期間，所有實驗小鼠飼養(yǎng)于室溫（24±1）℃、相對濕度50％～60％的環(huán)境，給予12h/12h光暗周期節(jié)律。

1.2.2裂隙燈檢查第1次麻醉后，卡托吡胺眼液擴瞳，分別于10、20、30、45、60min用裂隙燈觀察晶狀體渾濁情況，24h后，卡托吡胺眼液擴瞳，裂隙燈檢測晶狀體狀態(tài)，再行第2次麻醉，同樣于10、20、30、45、60min用裂隙燈觀察晶狀體渾濁情況。在裂隙燈下視野中，晶狀體 渾濁程度分為4個等級：無渾濁；輕度渾濁(晶狀體渾濁區(qū)域≤1/2)；中度渾濁(晶狀體渾濁區(qū)域>1/2)；重度渾濁(晶狀體全部渾濁)。見圖1。

圖1裂隙燈下晶狀體四種渾濁等級：0:無渾濁；1:輕度混濁；2:中度渾濁；3:重度渾濁。

2結(jié)果

2.1麻醉狀況各麻醉組麻醉狀況良好，角膜反射消失，呼吸心跳有所減慢，體溫稍有下降。水合氯醛麻醉組及烏拉坦麻醉組麻醉持續(xù)時間較長，可長達為90～150min，戊巴比妥鈉麻醉組麻醉持續(xù)時間為60～90min。24h后，進行第2次麻醉，發(fā)現(xiàn)各麻醉組麻醉的持續(xù)時間與第1次相比略微縮短。

2.2麻醉后對晶狀體的影響水合氯醛及烏拉坦麻醉小鼠后，出現(xiàn)明顯的眼球外突，眼瞼不能閉合，角膜干燥，而戊巴比妥鈉麻醉小鼠后眼瞼自然下垂，無明顯眼球外突及角膜干燥。三種麻醉劑麻醉小鼠后均呈現(xiàn)不同程度的晶狀體渾濁，主要表現(xiàn)為晶狀體皮質(zhì)性渾濁，多開始于晶狀體的周邊部，逐步向中心發(fā)展，渾濁可表現(xiàn)為細小顆粒狀和囊泡狀。第1次麻醉中，烏拉坦、水合氯醛麻醉后晶狀體出現(xiàn)渾濁的時間早于戊巴比妥鈉麻醉組，20min后即出現(xiàn)晶狀體渾濁，麻醉后60min表現(xiàn)為中度及重度渾濁；戊巴比妥鈉麻醉后45min才出現(xiàn)小鼠晶狀體渾濁，裂隙燈觀察晶狀體僅輕度渾濁。24h后裂隙燈檢測，晶狀體均恢復透明。再次麻醉小鼠后，與第1次麻醉相比，各組小鼠晶狀體均出現(xiàn)渾濁提前，渾濁加重，水合氯醛麻醉組第2次麻醉45min后即已出現(xiàn)晶狀體重度渾濁，麻醉60min后，烏拉坦表現(xiàn)為重度渾濁，而戊巴比妥鈉麻醉組表現(xiàn)為中度渾濁。見表1。

3討論

麻醉是動物實驗中非常重要的步驟，目前，已有研究指出，用甲苯噻嗪/氯胺酮、水合氯醛在進行常規(guī)麻醉時，會誘導小鼠晶狀體出現(xiàn)突發(fā)性可逆性渾濁，并干擾眼科儀器的檢查，影響實驗結(jié)果[2，4]。在我們的實驗中，用水合氯醛、烏拉坦、戊巴比妥鈉三種麻醉劑在常規(guī)劑量下對C57/BL6小鼠進行腹腔注射麻醉，均能達到有效的麻醉效果，但同時也發(fā)現(xiàn)麻醉小鼠后均出現(xiàn)了晶狀體突發(fā)性渾濁，阻礙了進一步的實驗進展，由于晶狀體的渾濁，導致用OCT檢測小鼠視網(wǎng)膜時無法成像。但是，在實驗過程中，我們發(fā)現(xiàn)了不同麻醉劑對小鼠晶狀體渾濁的發(fā)生發(fā)展是有差異的。從先后兩次麻醉情況而言，烏拉坦、水合氯醛麻醉組與戊巴比妥鈉麻醉組相比，晶狀體出現(xiàn)渾濁的時間較早，渾濁程度較重，在第1次麻醉24h后檢測晶狀體，發(fā)現(xiàn)晶狀體恢復了透明狀態(tài)，提示麻醉誘導的小鼠晶狀體渾濁有可能是短暫的并且可逆的，但多次反復麻醉后，小鼠晶狀體是否還能恢復透明狀態(tài)還有待進一步研究。

目前，盡管已有研究者發(fā)現(xiàn)藥物、低溫、紫外線輻射等因素會導致晶狀體出現(xiàn)渾濁，但是卻缺乏麻醉劑對晶狀體的毒理研究。在此實驗中，為了避免溫度對實驗的影響，已經(jīng)將溫度恒定在24℃左右。托吡卡胺眼液是目前常用的擴瞳藥物，Hubert等人在3000只小鼠使用托吡卡胺眼液后發(fā)現(xiàn)有19%的晶狀體出現(xiàn)渾濁[5]，本試驗中，所有小鼠在麻醉前托吡卡胺眼液擴瞳后經(jīng)裂隙燈檢查晶狀體均是透明正常的，可以排除托吡卡胺眼液對晶狀體的影響。有學者認為，氯胺酮/甲苯噻嗪、水合氯醛常規(guī)麻醉后能誘導晶狀體突發(fā)性可逆性渾濁，認為與麻醉劑后導致的眼球外突，角膜干燥及眼瞼不能閉合有關(guān)[6，7]，在本實驗中，戊巴比妥鈉麻醉組無明顯的眼球外突，角膜干燥，眼瞼自然閉合，但仍發(fā)生了輕度的晶狀體渾濁，此外，我們在實驗過程中也曾嘗試使用羥甲基纖維素滴眼液改善角膜干燥，發(fā)現(xiàn)仍然阻止不了晶狀體渾濁。

因此，我們認為麻醉劑的副作用不僅僅是晶狀體突發(fā)性渾濁的主要因素，與不同麻醉劑的選擇有一定關(guān)系。使用小鼠進行晶狀體等眼球相關(guān)實驗時，要注意麻醉劑的選擇，減少因麻醉誘導的晶狀體渾濁對實驗結(jié)果的干擾。

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編輯/哈濤