摘要：目的 建立HPLC法測(cè)定馬來(lái)酸依那普利含量的檢測(cè)方法。方法 采用Kromasil 100-5C18(150×4.0mm)色譜柱，流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)pH至2.2）-乙腈（75:25），檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm，流速：1.0ml/min，柱溫：50℃，進(jìn)樣量：20μl。結(jié)果 馬來(lái)酸依那普利的在濃度為0.12mg/ml~0.28mg/ml的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.9998)，回收率（n=9）為100.1%，RSD為0.4%。結(jié)論 該方法專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可靠，可用于馬來(lái)酸依那普利的含量測(cè)定的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：HPLC；馬來(lái)酸依那普利；含量測(cè)定隨著社會(huì)的發(fā)展，物質(zhì)生活水平的提高，工作節(jié)奏的加快以及人們?cè)谏铒嬍撤矫娴牟蛔⒁夂凸ぷ鲏毫Φ雀鞣矫嬖?，使得高血壓成為一種高發(fā)病。高血壓患病率隨著年齡的增長(zhǎng)呈明顯上升趨勢(shì)，即60歲及以上老年人有50%為高血壓患者。但近年來(lái)年輕人群患病率的增加趨勢(shì)比老年人更明顯，使得高血壓具有年輕化趨勢(shì)。高血壓是世界最常見(jiàn)的心血管疾病，也是最大的流行病之一，常引起心、腦、腎等臟器的并發(fā)癥，嚴(yán)重危害著人類的健康，因此提高對(duì)高血壓病的認(rèn)識(shí)，對(duì)早期預(yù)防、及時(shí)治療有極其重要的意義。馬來(lái)酸依那普利是第二代血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI)，既能有效降低血壓，又能減少尿白蛋白排泄量(UAE)，對(duì)二腎型高血壓、一腎型高血壓及自發(fā)性高血壓均有明顯降壓作用，對(duì)合并外周動(dòng)脈病變有較好的療效，是治療高原性高血壓測(cè)首選要藥。其制劑馬來(lái)酸依那普利片、馬來(lái)酸依那普利膠囊是治療高原性抗血壓藥，而作為其唯一原料藥的馬來(lái)酸依那普利的中國(guó)藥典質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅采用高氯酸滴定法測(cè)定其含量。本文采用HPLC法測(cè)定其含量，該方法方法重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，可靠，可用于馬來(lái)酸依那普利的含量測(cè)定的質(zhì)量控制。

1儀器與試藥

1.1試藥馬來(lái)酸依那普利原料藥批號(hào)為5113-13-001、5113-13-005、5113-13-009由浙江華海藥業(yè)股份有限公司提供；馬來(lái)酸由浙江華海藥業(yè)股份有限公司提供，依那普利拉對(duì)照品批號(hào)：100707-200401，馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品批號(hào)：100705-200401，依那普利雙酮對(duì)照品，批號(hào)：100706-200401，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。

1.2試劑水是二次純化水，乙腈是色譜級(jí)，其他試劑均為分析純。

1.3試驗(yàn)儀器Agilent 1100高效液相色譜儀，Agilent1100色譜工作站，紫外可變檢測(cè)器，AE240雙量程電子天平，ZRS-8G智能藥物溶出儀等。

2色譜條件

色譜柱:Kromasil 100-C8(150×4.6nm); 流動(dòng)相: 磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)pH至2.2）-乙腈（75:25）；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm；柱溫：50℃；進(jìn)樣量20μl。

3測(cè)定方法

3.1含量測(cè)定供試品溶液的制備：精密稱量馬來(lái)酸依那普利10mg，置于50ml量瓶中，加水適量，超聲溶解，在加水稀釋至刻度，搖勻，即可。

對(duì)照品溶液的制備：精密稱量馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品40mg，置于50ml量瓶中，加水適量，超聲溶解，在加水稀釋至刻度，搖勻，即可，得對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密移取對(duì)照品儲(chǔ)備液5ml，置20ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液。精密取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl注入液相色譜儀，在215nm處測(cè)定峰面積，記錄色譜圖。

3.2方法專屬性分別取溶劑（水）、流動(dòng)相、\"3.1\"項(xiàng)下馬來(lái)酸依那普利供試品溶液、馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品溶液各20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。色譜圖見(jiàn)圖1~圖4結(jié)果表明，在相同的檢測(cè)條件下，溶劑、流動(dòng)相、對(duì)馬來(lái)酸依那普利的檢測(cè)均無(wú)干擾。（圖中1-馬來(lái)酸，2-依那普利）。

圖1-溶劑（水）

圖2-流動(dòng)相

圖3-對(duì)照品 圖-4樣品圖

圖5-系統(tǒng)適應(yīng)性圖譜

3.3系統(tǒng)適用性的考察系統(tǒng)適用性溶液配制：用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，稱取馬來(lái)酸適量，加流動(dòng)相超聲溶解并制成每1ml含馬來(lái)酸0.5mg的溶液；另分別取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品、依那普利拉對(duì)照品、依那普利雙酮對(duì)照品溶液適量，加流動(dòng)相超聲溶解成每1ml中含0.2mg的溶液，再精密移取1ml到10ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋到刻度，搖勻，得混合溶液。取馬來(lái)酸溶液和混合溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，在215nm處測(cè)定峰面積，記錄色譜圖。依那普利峰拖尾因子應(yīng)小于2.0，馬來(lái)酸峰與依那普利拉峰的分離度應(yīng)符合要求，依那普利拉，依那普利與依那普利雙酮各峰之間的分離度應(yīng)大于4.0。色譜圖見(jiàn)圖5 （1-馬來(lái)酸，2-依那普利拉，3-依那普利，4-依那普利雙酮）。

3.4線性關(guān)系的考察分別精密移取\"3.1\"項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液3ml、4ml、5ml、6ml、7ml置5個(gè)20ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件將以上對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣20μl，以濃度（C，mg/ml）橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=2E+07x+172959r=0.9998結(jié)果表明，馬來(lái)酸依那普利在0.12mg/ml~0.28mg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3.5定量限和檢測(cè)限測(cè)定取線性范圍內(nèi)某一濃度逐級(jí)稀釋至一定濃度，在相應(yīng)的波長(zhǎng)下連續(xù)進(jìn)樣3次進(jìn)行檢測(cè)，取某一段基線，使信燥比為S/N=10:1為檢測(cè)定量限，使信燥比為S/N=3:1為最小檢測(cè)限，結(jié)果依那普利的檢測(cè)定量限為0.384ug/ml，最小檢測(cè)限為0.115ug/ml。

3.6精密度試驗(yàn)取\"3.1\"項(xiàng)下對(duì)照品溶液，精密吸取20ul注入液相色譜儀測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，測(cè)得依那普利峰面積的RSD（n=6）為0.07%。結(jié)果表明該方法精密度良好。

3.7重復(fù)性試驗(yàn)取\"3.1\"項(xiàng)下供試品溶液，精密吸取20ul注入液相色譜儀測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量，結(jié)果依那普利的平均含量為97.6%，RSD（n=6）為0.7%。表明方法的重復(fù)性良好。

3.8加樣回收率試驗(yàn)分別精密稱定已知含量的馬來(lái)酸依那普利4mg、5mg、6mg各3份分別置于50ml①量瓶中，再精密稱量馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品50mg置于50ml量瓶中，加水超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，再分別精密移取4、5、6ml各3份依次對(duì)應(yīng)移入上述①中，用水配制成相當(dāng)于含量測(cè)定的80%、100%、120%濃度的溶液各3份。再精密稱取馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品10mg，置于50ml量瓶中，加水超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液，按含量項(xiàng)下方法測(cè)定，記錄色譜圖，以外標(biāo)法計(jì)算低、中、高3個(gè)濃度的的回收率（n=3）分別為100.3%、（RSD=0.33%），100.15%（RSD=0.32%），99.85%（RSD=0.41%）；平均回收率（n=9）為100.1%，RSD為0.4%。

3.9溶液的穩(wěn)定性取\"3.1\"項(xiàng)下供試品溶液1份，于室溫放置，分別于0、2、4、6、8、10、12h時(shí)取20μl注入液相色譜儀在，在12h內(nèi)含量測(cè)定結(jié)果平均值為97.7%，RSD為0.1%，表明供試品溶液在室溫下放置12h內(nèi)的是穩(wěn)定的。

3.10色譜條件變化分別使用正常流動(dòng)相，預(yù)定測(cè)試不同比例的流動(dòng)相（緩沖液-乙腈比例分別為75-25；78-22；70-30）以及不同的柱流速（mL/min）分別為0.8、1.0、1.2，待儀器系統(tǒng)穩(wěn)定后測(cè)試系統(tǒng)適用性溶液。結(jié)果馬來(lái)酸與依那普利拉的分離度4.5、4.1、3.7；5.6、5.0、5.1；2.7、2.5、2.3；依那普利拉與依那普利的分離度7.7、6.9、6.3；8.9、8.0、7.5；5.9、5.4、4.9依那普利與依那普利雙酮分離度19.6、19.1、18.3；20.1、19.6、20.3；19.5、18.6、17.6。由數(shù)據(jù)可知，小的色譜條件的變動(dòng)，各峰的分離度變化量不大，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)符合要求，可以確定小的色譜條件變動(dòng)，不會(huì)影響到含量的測(cè)定結(jié)果。

3.11含量測(cè)定結(jié)果按已經(jīng)建立好的測(cè)定方法測(cè)定原料馬來(lái)酸依那普利3批樣品中依那普利的含量，批號(hào)為5113-13-001、5113-13-005、5113-13-009結(jié)果分別為99.3%、99.8%、99.6%。

4討論

4.1流動(dòng)相的選擇文獻(xiàn)3中采用甲醇-乙腈-水-1%磷酸（60:5:33.5:1.5）為流動(dòng)相測(cè)定馬來(lái)酸依那普利的含量；而2010年《中國(guó)藥典》二部，采用HPLC法對(duì)馬來(lái)酸依那普利的有關(guān)物質(zhì)及其制劑的有關(guān)物質(zhì)和含量進(jìn)行測(cè)定時(shí)均采用流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)pH至2.2）-乙腈（75:25），兩種流動(dòng)相相比較后，藥典標(biāo)準(zhǔn)所使用的流動(dòng)相中試劑較少，減少對(duì)環(huán)境的污染，且能使樣品中各峰很好的分離，所以參照2010年《中國(guó)藥典》二部標(biāo)準(zhǔn)采用此流動(dòng)相為馬來(lái)酸依那普利含量測(cè)定的流動(dòng)相，并用該流動(dòng)相對(duì)馬來(lái)酸依那普利的含量測(cè)定展開方法學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

4.2 HPLC測(cè)定的選擇2010版《中國(guó)藥典》二部采用冰醋酸和無(wú)水二氧六環(huán)微溫溶解后，加結(jié)晶紫指示液后，用高氯酸滴定液滴定來(lái)測(cè)定馬來(lái)酸依那普利的含量，在操作的過(guò)程中，冰醋酸易受溫度的影響，在微溫時(shí)易揮發(fā)，這樣會(huì)使樣品溶解不全；而高氯酸滴定液易受溫度，濕度的影響，在放置的過(guò)程中受到環(huán)境中溫度、濕度的影響，易使高氯酸滴定液的F值發(fā)生變化，使測(cè)定的結(jié)果出現(xiàn)較大的偏差；在滴定的結(jié)果中的顯色要求達(dá)到純藍(lán)色即可，由于每個(gè)人對(duì)顏色的判斷不同，并且操作的手法不同，都易使測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度降低。2010年《中國(guó)藥典》二部，采用HPLC法對(duì)馬來(lái)酸依那普利的有關(guān)物質(zhì)及其制劑的有關(guān)物質(zhì)和含量進(jìn)行測(cè)定，參照法定標(biāo)準(zhǔn)液采用HPLC法來(lái)測(cè)定馬來(lái)酸依那普利的含量。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定馬來(lái)酸依那普利的含量，簡(jiǎn)便，快速，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性良好。

4.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇取馬來(lái)酸依那普利和馬來(lái)酸依那普利對(duì)照品適量，用水溶解稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛?，照紫?可見(jiàn)分光光度法（中國(guó)藥典2010 年版二部附錄IV A）。在200nm～400nm波長(zhǎng)掃描，對(duì)照品溶液和樣品溶液在215 nm處有最大吸收。再分別將溶劑（水）和流動(dòng)相也在200nm～400nm波長(zhǎng)掃描，溶劑、流動(dòng)相在 215nm處均無(wú)吸收，在此波長(zhǎng)處對(duì)馬來(lái)酸依那普利的測(cè)定沒(méi)有干擾，故選擇215nm作為馬來(lái)酸依那普利含量測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)。

4.4依那普利為堿性物質(zhì)，常與馬來(lái)酸成鹽供臨床應(yīng)用，馬來(lái)酸在紫外-可見(jiàn)分光光度法200nm～400nm波長(zhǎng)掃描的215nm處也有吸收，采用磷酸鹽緩沖液（0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調(diào)pH至2.2）-乙腈（75:25）為流動(dòng)相HPLC法測(cè)定能使馬來(lái)酸與依那普利更好的分離。在依那普利主要降解為依那普利拉和依那普利雙酮哌嗪，依那普利拉為活性二酸代謝物，在堿性物質(zhì)存在及較高溫度下長(zhǎng)時(shí)間干燥會(huì)使依那普利進(jìn)一步降解為依那普利拉和依那普利雙酮哌嗪。依那普利拉和依那普利雙酮的存在會(huì)引起咳嗽這一副作用，所以必須嚴(yán)格的控制這兩者的含量。2010年《中國(guó)藥典》二部中已采用HPLC法對(duì)馬來(lái)酸依那普利的有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，并控制了有關(guān)物質(zhì)的限度，故本法中不在對(duì)其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行研究。

參考文獻(xiàn)

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編輯/哈濤