摘要：目的 運(yùn)用多種檢測(cè)方法對(duì)兒童患者常見(jiàn)呼吸道非典型病原體進(jìn)行檢測(cè)與分析，為提高臨床兒童呼吸道感染患者預(yù)后，提供相關(guān)疾病病因診斷依據(jù)。方法 應(yīng)用間接免疫熒光法（IFA法）以及聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR法）對(duì)兒童常見(jiàn)9種呼吸道病原體的IgM抗體，同時(shí)應(yīng)用膠體金免疫層析法（GICA法）對(duì)流感病毒抗原、快速培養(yǎng)法對(duì)肺炎支原體（MP）進(jìn)行檢測(cè)，并分析比較檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果 448例樣本中，9種IgM抗體共檢測(cè)出89例，陽(yáng)性率達(dá)19.9%。其中應(yīng)用GICA法檢測(cè)Flu A和Flu B抗原與IFA法檢測(cè)抗體總體一致率分別達(dá)99.1%和99.6%（Kappa值>0.75，一致性滿意），培養(yǎng)法檢測(cè)MP與PCR法總體一致率達(dá)98.2%（Kappa值>0.75，一致性滿意）。結(jié)論 非典型病原體是兒童呼吸道感染的重要病原體，應(yīng)用IFA抗體檢測(cè)、流感病毒GICA抗原檢測(cè)、MP快速培養(yǎng)法能夠?yàn)榕R床提供早期診斷和正確治療的依據(jù)。

關(guān)鍵詞：兒童；呼吸道感染；非典型病原體；肺炎支原體

現(xiàn)今呼吸道感染是兒童的常見(jiàn)疾病[1]，引起呼吸道感染的這些病原體有著變異快，傳播廣，由于不易形成長(zhǎng)期免疫力而難以防治與控制[2]。筆者采用IFA法以及PCR法對(duì)兒童常見(jiàn)9種呼吸道病原體的IgM抗體，GICA法對(duì)流感病毒抗原、快速培養(yǎng)法對(duì)MP進(jìn)行檢測(cè)，并分析比較檢測(cè)結(jié)果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集我院自2010年3月～2012年12月收治的患有呼吸道疾病的兒童患者450例子為研究對(duì)象。其中男236例，女214例。年齡6d～13歲。病種包括：急性上呼吸道感染、急性支氣管炎、肺炎、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺癌、胸膜炎、發(fā)熱待查等。

1.2檢測(cè)方法 采用無(wú)菌靜脈采血，血清樣本采集后應(yīng)及時(shí)冷藏，在血清收集好的8h內(nèi)對(duì)嗜肺軍團(tuán)菌血清1型（LP1）、MP、QP、CP、腺病毒（ADP）、呼吸道合胞病毒（RSV）、Flu A、Flu B和副流感病毒1、2、3型（PIVs）9種病原體的IgM檢測(cè)。用無(wú)菌棉簽或者8號(hào)橡膠管將鼻咽部分分泌物收集[3]，并應(yīng)立即對(duì)其進(jìn)行MP、Flu A、Flu B進(jìn)行檢測(cè)。

間接免疫熒光法（IFA法）。應(yīng)用間接免疫熒光法檢測(cè)9種呼吸道感染病原體IgM抗體，試劑是由西班牙Vircell公司生產(chǎn)，從鄭州安圖生物公司購(gòu)得。檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行，并在熒光顯微鏡下觀察，每次試驗(yàn)都應(yīng)設(shè)有陰陽(yáng)對(duì)照。

膠體金免疫層析法（GICA法）。所用流感病毒快速檢測(cè)試劑盒（膠體金法）均購(gòu)自北京阿斯可來(lái)生物工程有限公司，F(xiàn)lu A型（國(guó)藥準(zhǔn)字S20063095），F(xiàn)lu B型（國(guó)藥準(zhǔn)字S20063135），有效期內(nèi)依據(jù)說(shuō)明書使用。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR法）。選購(gòu)北京師范大學(xué)生物研究院的診斷試劑盒。首先選取MP中相對(duì)保守的基因設(shè)計(jì)引物，然后將血清、PCR混合液、引物混合放入PCR管中。經(jīng)歷了DNA變性、退火、延伸后，將擴(kuò)增產(chǎn)物于2%瓊脂糖凝膠中電泳，紫外燈下觀察結(jié)果，并設(shè)置陰陽(yáng)對(duì)照，出現(xiàn)目的區(qū)帶150bp的為陽(yáng)性。

肺炎支原體快速培養(yǎng)法。選購(gòu)河北微拉生物科技有限公司的支原體營(yíng)養(yǎng)和增菌組合培養(yǎng)基，根據(jù)說(shuō)明書使用方法在有效期內(nèi)使用。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0軟件建立數(shù)據(jù)庫(kù)，并進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1由IFA法測(cè)得9項(xiàng)呼吸道病原體IgM檢出情況分析 448例樣本中，9種IgM抗體共檢測(cè)出89例，陽(yáng)性率達(dá)19.9%（見(jiàn)表1）。

2.2GICA法測(cè)Flu與FIA法檢測(cè)結(jié)果的比較 GICA法檢測(cè)Flu A與FIA法檢測(cè)相比較結(jié)果如表2所示，其中陽(yáng)性一致率為91.3%，陰性一致率為99.5%，總體一致率為99.1%，算Kappa=0.87>0.75，兩種方法檢測(cè)所得結(jié)果一致性滿意，經(jīng)McNemar χ2檢驗(yàn)得出，在α=0.05時(shí)，χ2=0，P>0.05，因此認(rèn)為兩種檢測(cè)方法間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由同樣的方法可得知，GICA法測(cè)Flu B與FIA法比較結(jié)果。GICA法對(duì)Flu B與FIA法檢測(cè)比較結(jié)果，陽(yáng)性一致率、隱形一致率、總體一致率分別為90.9%、99.8%、99.6%，算Kappa=0.89>0.75，兩種方法檢測(cè)所得結(jié)果一致性滿意，經(jīng)McNemar χ2檢驗(yàn)得出，在α=0.05時(shí)，χ2=0.5，P>0.05，因此認(rèn)為兩種檢測(cè)方法間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表2）。

3 結(jié)論

IFA法是一種高效的、靈敏度高、便于臨床使用、成本低廉的檢測(cè)多種呼吸道病毒和非典型病原的方法。應(yīng)用IFA抗體檢測(cè)、流感病毒GICA抗原檢測(cè)、MP快速培養(yǎng)法以及PCR法均為現(xiàn)今檢測(cè)非典型病原體常用的方法，可根據(jù)環(huán)境條件的不同選擇合適的檢測(cè)方法，相信一定為臨床提供早期診斷和正確治療的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1]張泉，付光宇，李曉霞，等.呼吸道聯(lián)檢試劑在兒童不典型呼吸道感染中的應(yīng)用研究[J].醫(yī)藥論壇雜志，2010，31（20）：171-173.

[2]劉國(guó)英，樊冒.反轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)聯(lián)合間接免疫熒光法對(duì)兒童下呼吸道非典型病原體感染早期診斷的意義[J].實(shí)用兒科臨床雜志，2010，04（25）：269-270.

[3]吳澤剛，李艷，祝成亮，等.湖北地區(qū)兒童急性呼吸道感染病原體研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，10（21）：2129-2131.編輯/劉小燕