摘要：目的

關(guān)鍵詞：姜油；Cyp3a11；Cyp2e1

由合用藥物而引起的藥物不良反應(yīng)（Adverse Drug Reaction，ADR）在臨床用藥當(dāng)中已并不罕見，其原因多數(shù)與人體中的藥物代謝酶或轉(zhuǎn)運(yùn)體被抑制或誘導(dǎo)有關(guān)。CYPs酶系（如CYP3A4、CYP2E1等）在許多化合物的轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起著至關(guān)重要的作用。有研究報(bào)告稱，葡萄柚通過抑制腸道CYP3A活性能顯著增加非洛地平的口服生物利用度，從而引起嚴(yán)重的副反應(yīng)。

近年來，藥物不良反應(yīng)的研究不僅僅局限在化學(xué)藥物對代謝酶的影響，天然產(chǎn)物如食物、水果等同樣也能影響代謝酶的活性。生姜是姜科植物姜 （Zingiber Officinale Roscoe） 的新鮮根莖，既是調(diào)味佳品，更是常用的中藥材，目前生姜做為調(diào)味品和中藥，在生活和臨床中有著廣泛的應(yīng)用，然而當(dāng)生姜與其他處方藥物配伍使用時(shí)，是否發(fā)生代謝性藥物相互作用尚未可知。因此本研究測定姜的主要成分姜油和對小鼠肝臟CYP3a及CYP2e的影響，進(jìn)而判斷其是否影響其他藥物在人體內(nèi)的吸收代謝，為臨床合理用藥提供參考。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1動(dòng)物 SPF級NIH小鼠，體重 18～26 g [廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號 SCXK（粵2008-0020）]。

1.1.2試劑 姜油（由CO2超臨界提取，含20% 6-姜酚，廣州中醫(yī)藥大學(xué)科技園提供）；利福平（Rifampin，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號091103）；酮康唑（Ketoconazole，南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司，批號090102）；NADPH（Sigma）；羧甲基纖維素鈉（sodium carboxymethylcellulose，CMC，批號F20091021，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；Folin-酚蛋白定量試劑盒（北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號07T001100）；其他試劑均為市售分析純。

1.2儀器 Himac CR22G高速冷凍離心機(jī)（日立制作所）；G7-953T型組織勻漿機(jī)（As One，HOM，日本）；T6新世紀(jì)型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）； Multipette plus手動(dòng)連續(xù)分液器（Eppendorf，German）。

1.3方法

1.3.1分組與給藥 將70只小鼠隨機(jī)分為7組，10只/組，雌雄各半。CMC溶媒組（0.5%CMC溶液，10 mL/Kg）、酮康唑組（1.8 mg/Kg）、利福平組（40 mg/Kg）、姜油高、中、低、常劑量組（給藥劑量分別為30 mg/Kg、15 mg/Kg、3 mg/Kg、0.6 mg/Kg）。灌胃給藥2次/d，連續(xù)灌服5 d。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日，投予供試物后60 min斷頭采血，并迅速摘取肝臟。

1.3.2微粒體的制備 小鼠肝腸微粒體的分離參考文獻(xiàn)方法進(jìn)行進(jìn)行[7-8]。方法如下：在冰上迅速取出肝臟。然后置于磷酸緩沖液（PBS）pH 7.4中，用組織勻漿機(jī)以920 rpm的速度進(jìn)行勻漿操作。經(jīng)梯度離心后，用適量的PBS緩沖液重懸所得微粒體，然后按1.2 mL/管分裝后，于-80℃貯存?zhèn)溆谩Ｒ訤olin-酚法進(jìn)行蛋白定量，以小牛血清作標(biāo)準(zhǔn)蛋白，按試劑盒說明書進(jìn)行定量。

2結(jié)果

2.1小鼠肝微粒體Cyp3a活性測定結(jié)果 小鼠肝微粒體Cyp3a活性測定，見圖1、圖2，不論以氨基比林為底物還是以紅霉素為底物，利福平、姜油高、中劑量組的活性顯著高于對照組小鼠（P<0.05），而姜油其他劑量組與對照組相比無顯著性差異（P>0.05）。

圖1 小鼠肝臟Cyp3a活性測定結(jié)果（以紅霉素為底物）（x±s，n=10）

注：與CMC對照組相比，*P<0.05，**P<0.01。

圖2 小鼠肝臟Cyp3a活性測定結(jié)果（以氨基比林為底物）（x±s，n=10）

注：與CMC對照組相比，*P<0.05，**P<0.01。

2.2小鼠肝微粒體中Cyp2e1活性測定結(jié)果 肝微粒體中Cyp2e1活性測定，見圖3，姜油高、中劑量組中的Cyp2e1活性明顯低于對照組（P<0.05），而其他劑量組與對照組相比并無明顯差異 （P>0.05）。

圖3 肝臟Cyp2e1活性測定結(jié)果（x±s，n=10）

注：與CMC對照組相比，*P<0.05，**P<0.01。

3討論

CYP450系統(tǒng)的抑制或誘導(dǎo)是產(chǎn)生代謝性藥物-藥物相互作用的主要原因之一。CYP3A4人類最重要的CYP亞族，約占肝臟P450代謝酶的40%左右，50%以上的結(jié)構(gòu)各異、性質(zhì)不同的臨床藥物可由它代謝，如撲熱息痛、安定、維拉帕米、硝苯地平等。CYP2E1也是肝臟中CYPs酶系的重要成員之一，約占肝臟中CYPs含量的7%，參與多種藥物及毒物的代謝，如乙醇、丙酮、四氯化碳、苯胺等前致癌物。為更好的保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，本研究以紅霉素和氨基吡啉兩種底物，分別測定其代謝產(chǎn)物甲醛的生成量來反映Cyp3a的活性；以苯胺為特異性底物，測定代謝產(chǎn)物對氨基酚的生成量來反映小鼠肝臟Cyp2e1的活性。本研究中Cyp3a和Cyp2e1活性測定結(jié)果顯示，不論以氨基吡啉還是以紅霉素為底物測定Cyp3a活性，姜油高、中劑量時(shí)對小鼠肝微粒體中Cyp3a的活性具有一定的誘導(dǎo)作用，而對Cyp2e1的活性具有一定的抑制作用。

綜上，姜油對藥物在肝臟的代謝有影響。在臨床用藥中，同服姜可促進(jìn)某些藥物在體內(nèi)的代謝，有助于某些有毒藥物從肝臟代謝，對人體有較好的保健作用。

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