【摘 要】建立反相高效液相色譜法測定牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的含量。方法：采用奧泰公司 C18 色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35），檢測波長為284nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。鹽酸黃柏堿在8～80μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。鹽酸黃柏堿平均回收率分別為99.5%。結(jié)論：本法簡便、準(zhǔn)確，可用于牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的含量測定。

【關(guān)鍵詞】牛黃益金片；含量；測定

牛黃益金片為淺黃色至棕黃色的片。牛黃益金片由黃柏、硼砂、玄明粉、牛黃、薄荷腦、薄荷油組成。牛黃益金片具有清熱利咽，消腫止痛的功效。牛黃益金片常用于急、慢性咽炎。黃柏為蕓香科植物黃皮樹或黃檗的干燥樹皮。《本草圖經(jīng)》記載：“檗木，黃檗也，今處處有之，以蜀中者為佳。五月六月采皮，去皺粗暴干用。其根名檀桓?！秉S柏有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡之功效。黃柏具有降血壓、抗菌、抗炎、抗癌、抗?jié)?、抗氧化、解熱作用、抗痛風(fēng)、抗病毒等作用[1-5]。黃柏常用于濕熱痢疾、泄瀉、淋濁、帶下、盜汗、癰疽瘡毒、皮膚濕疹等。本文采用高效液相色譜法對(duì)牛黃益金片劑中的鹽酸黃柏堿的進(jìn)行了含量測定。

1.儀器與試藥

1.1儀器

SLGH超深度高精度恒溫槽（南京順流儀器有限公司）；Molchem化工行業(yè)用超純水設(shè)備（上海摩勒科學(xué)儀器有限公司）；MicroSmart高速微量離心機(jī)（北京昊諾斯科技有限公司）；CC-100分析型色譜柱溫箱（成都納杰科技有限公司）；RE-3000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海嘉鵬科技有限公司）；US6180DH數(shù)顯型超聲波清洗器（北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司）； SP-756P紫外可見分光光度計(jì)（上海光譜儀器有限公司）；Smartline 高效液相色譜系統(tǒng)（北京創(chuàng)新通恒科技有限公司）；BSA124S電子分析天平（東莞康潤儀器設(shè)備有限公司）。

1.2色譜柱

奧泰公司C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）。

1.3對(duì)照品

鹽酸黃柏堿 購自中國藥品生物制品檢定所。

1.4試劑

甲醇（廣州博氧化工有限公司）、乙腈（廈門潤科化工科技有限公司）、磷酸（廣州太三憶化工有限公司）、十二烷基磺酸鈉（濟(jì)南鑫諾化工有限公司）、三乙胺（濟(jì)南鑫諾化工有限公司）。

1.5試藥

牛黃益金片劑。

2.測定方法確定

2.1色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下[6-7]。流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35），檢測波長：284nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：35℃。理論板數(shù)按鹽酸黃柏堿峰計(jì)算應(yīng)不得低于3000。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸黃柏堿對(duì)照品適量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含20ug的溶液，即得。

2.3提取方法確定

2.3.1提取溶媒的選擇

在供試品溶液制備中，分別選用了75%甲醇、乙醇、甲醇進(jìn)行熱回流提取，結(jié)果表明甲醇分離效果、峰形及含量為最好，所以選擇甲醇進(jìn)行熱回流提取。

2.3.2提取時(shí)間的選擇

取供試品適量，用甲醇提取，熱回流提取分別提取30、60、90分鐘，制備供試品溶液，含量結(jié)果表明：三種提取時(shí)間結(jié)果無明顯差異，為保證提取完全并縮短處理時(shí)間，采用熱回流提取30分鐘。

2.3.3供試品溶液的制備

取牛黃益金片，研細(xì)，精密稱定，加入甲醇60mL，熱回流提取30分鐘，過濾，水浴蒸干，殘?jiān)?ml流動(dòng)相溶解，濾過。取續(xù)濾液，即得。

2.4專屬性試驗(yàn)

依照處方取硼砂、玄明粉、牛黃、薄荷腦、薄荷油，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，照2.3.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成陰性液，依色譜條件測定，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒有干擾，表明本方法專屬性良好。

2.5精密度試驗(yàn)

精密稱取鹽酸黃柏堿對(duì)照品適量，加甲醇使溶解，制成濃度為20ug·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.76%，表明本方法精密度良好。

2.6對(duì)照品的線性考察

精密稱取鹽酸黃柏堿對(duì)照品10.0mg，置25ml容量瓶中，加入甲醇溶液使溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.2、0.4、0.6、1.2、1.6、2.0mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。結(jié)果表明，鹽酸黃柏堿在8～80μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的牛黃益金片劑樣品6份，按測定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.85%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8準(zhǔn)確度試驗(yàn)

精密稱取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的鹽酸黃柏堿對(duì)照品，上述方法進(jìn)行測定，計(jì)算回收率，平均回收率分別為99.5%，RSD為0.53%。

2.9樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批牛黃益金片劑樣品，按2.3.3項(xiàng)下的供試品制備方法制備供試品，將供試品置室溫下放置，分別于第0、2、4、6、8、10小時(shí)，精密吸取供試品溶液10μl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。測定牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的RSD=0.65%。結(jié)果表明供試品10小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.10樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定牛黃益金片劑三批樣品中鹽酸黃柏堿的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為0.17mg/g、0.16mg/g、0.16mg/g。

3.討論

分別考察，乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶30：40），甲醇-水-冰醋酸（13∶86∶1），乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35），甲醇-水-冰醋酸（34∶65∶1）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用，乙腈-0.1%磷酸水溶液-0.01%十二烷基磺酸鈉水溶液（30∶35：35）為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)表明此方法可用于牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的含量測定。牛黃益金片劑中鹽酸黃柏堿的含量為每片不低于0.15mg/g。

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