劉玠++++++曲海影++++++張迪

[摘要] 目的 建立抗宮炎凝膠劑定性鑒別的研究方法，為制訂其質(zhì)量標準提供基礎(chǔ)。 方法 采用高效液相色譜法對處方中的廣東紫珠進行定性鑒別。采用薄層色譜法對處方中的烏藥、益母草進行定性鑒別。烏藥鑒別中以甲苯-乙酸乙酯（15∶1）為展開劑；益母草鑒別中以丙酮-無水乙醇-鹽酸（10∶6∶1）為展開劑。 結(jié)果 高效液相色譜中廣東紫珠在供試品色譜中呈現(xiàn)出與對照品色譜中保留時間相同的金石蠶苷色譜峰（t = 5.51 min）。薄層色譜中可檢出烏藥、益母草，且陰性對照無干擾。 結(jié)論 本研究所采用的抗宮炎凝膠劑的定性鑒別方法簡便可靠，可用于抗宮炎凝膠劑質(zhì)量標準的研究。

[關(guān)鍵詞] 抗宮炎凝膠劑；薄層色譜法；高效液相色譜法；定性鑒別

[中圖分類號] R284.2 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）12（a）-0089-04

抗宮炎凝膠劑由廣東紫珠、益母草、烏藥三味中藥組成[1]，是在抗宮炎片的基礎(chǔ)上研制的現(xiàn)代中成藥[2]，抗宮炎片現(xiàn)收錄于《中國藥典》2010年版一部[3]，用于慢性宮頸炎引起的濕熱下注、赤白帶下、宮頸糜爛、出血癥等[4]。慢性宮頸炎是女性生殖系統(tǒng)最為常見的炎癥性疾病，多由急性宮頸炎治療不徹底轉(zhuǎn)化而來[5]，該病在已婚或有性生活的婦女中發(fā)病率高達50%以上，且是宮頸癌發(fā)病的高危因素之一[6]，其治療方法有物理療法、手術(shù)療法和藥物療法[7]，其中藥物療法因?qū)俜莿?chuàng)傷性治療，操作簡單，對患者要求低而應(yīng)用廣泛[8]。在藥物治療中，與抗宮炎片相比，抗宮炎凝膠劑直接作用于病灶[9]，不需要通過肝臟首過作用和胃腸道生理關(guān)卡效應(yīng)[10]，因而不會降低其病灶部位的有效濃度，也不會延長其起效時間及降低藥物的療效[11]。而且抗宮炎凝膠劑與陰道黏膜具有良好的偶合和水合作用，可較長時間與病灶部位黏附緊密，能充盈整個陰道[12]，有較好的生物相容性，有利于藥物的釋放，能更好地發(fā)揮療效[13-14]，在中藥新藥研制中，幾乎所有的新藥都必須提供定性鑒別的分析。薄層色譜技術(shù)和高效液相色譜技術(shù)在中藥成藥的定性鑒別中均是最常用的方法，均具有良好的專屬性、可比性及較高的靈敏度，依據(jù)高效液相色譜中色譜峰的位置以及薄層色譜板上斑點的有無、顏色、位置來判定中成藥所含原料藥物的真?zhèn)?，同時其斑點的大小、顏色的深淺亦可在一定程度上直接反映出所用原料藥材的優(yōu)劣。采用高效液相色譜分析技術(shù)和薄層色譜分析與其他色譜分析相比，二者顯著不同的是得到的圖譜是直觀性很強的圖像。為此，本研究決定改變原制劑的給藥途徑，將抗宮炎片改為抗宮炎凝膠劑，從新藥研究角度出發(fā)，參照《中國藥典》2010年版一部抗宮炎片下的規(guī)定，采用高效液相色譜法（HPLC）和薄層色譜法（TLC）對抗宮炎凝膠劑處方中主要藥味進行定性鑒別，旨在為制訂其質(zhì)量標準奠定基礎(chǔ)，為慢性宮頸炎及宮頸糜爛的臨床治療提供更多的基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（Waters 1525-2489）；METTLER AE 200電子天平（梅特勒托利多儀器公司）；AB204-N電子分析天平（梅特勒托利多儀器公司）；指針式電熱恒溫水浴鍋（上海躍進醫(yī)療器械廠）；KQ-500DB超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

鹽酸水蘇堿對照品（批號：110712-201111，中國藥品生物制品檢定所）；烏藥醚內(nèi)酯對照品（批號：111568-200603，中國藥品生物制品檢定所）；金石蠶苷對照品（批號：111812-201001，中國藥品生物制品檢定所）；烏藥對照藥材（批號：121096-201004，中國藥品生物制品檢驗所）；抗宮炎凝膠劑（自制，批號：20110901、20110902、20110903）。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC鑒別

2.1.1 益母草TLC鑒別

取抗宮炎凝膠劑1支（5.00 g），加入甲醇溶液50 mL使藥物溶解，將溶解的藥物溶液超聲處理30 min，將超聲處理后的溶液全部濾過，濾液蒸干，所得的殘渣加入乙醇溶液1 mL使其溶解，即可以得到抗宮炎凝膠劑供試品溶液。另取適量的鹽酸水蘇堿對照品，加適量乙醇溶液制成1 mL含2 mg的溶液，即可作為益母草對照品溶液。按照上述的處方比例，使用相同的方法制成益母草陰性對照品溶液，照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗，吸取抗宮炎凝膠劑供試品溶液和益母草陰性對照品溶液各2 μL以及益母草對照品溶液4 μL，后分別點于同一硅膠 G薄層板上，以丙酮-無水乙醇-鹽酸（10∶6∶1）為本品所用的展開劑，將薄層色譜板放入展開缸內(nèi)完全展開后取出，晾干，先噴以10%硫酸乙醇溶液，再噴以新配制的稀碘化鉍鉀試液-碘化鉀碘試液（1∶1）混合液，后冷風吹干，結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，且陰性對照無干擾，見圖1。

2.1.2 烏藥TLC鑒別

取抗宮炎凝膠劑1支（5.00 g），加入甲醇溶液25 mL使藥物溶解，所得的甲醇溶液水浴加熱回流30 min后將溶液濾過，濾液蒸干，將得到的藥物殘渣加蒸餾水20 mL，所得藥物溶液加熱使溶解，用三氯甲烷溶液連續(xù)振搖提取2次，每次均用20 mL的三氯甲烷溶液，合并三氯甲烷提取液，將提取液蒸干，所得殘渣加乙酸乙酯1 mL使其溶解，即可得到抗宮炎凝膠劑供試品溶液。另精密量取烏藥對照藥材2 g，加入蒸餾水50 mL，煎煮30 min，所得的全部溶液濾過，濾液離心，取得到的上清液濃縮至20 mL，用三氯甲烷溶液振搖提取2次，每次均用20 mL的三氯甲烷溶液，合并三氯甲烷提取液，將提取液蒸干，所得的殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解，制成烏藥對照藥材溶液。另精密量取烏藥醚內(nèi)酯對照品，加乙酸乙酯溶液適量制成每1毫升含2 mg的溶液，作為烏藥對照品溶液，按照原處方比例，同法制成烏藥陰性對照品溶液。照薄層色譜法（附錄Ⅵ B）試驗，分別吸取抗宮炎凝膠劑供試品溶液16 μL、烏藥對照藥材溶液4 μL、烏藥對照品溶液1 μL，以及烏藥陰性對照品溶液1 μL后分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（15∶1）為展開劑，將薄層色譜板放入展開缸內(nèi)完全展開后取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸試液，用冷風吹干。日光檢視，在供試品色譜中，分別在與對照藥材、對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，見圖2。

2.2 HPLC定性鑒別

2.2.1 色譜條件

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：乙腈-0.5%磷酸（18∶82）；檢測波長：332 nm；流速：1.0 mL/min；理論板數(shù)按金石蠶苷峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2.2 溶液的制備

2.2.2.1 供試品制備方法的考察 ①超聲：稱取抗宮炎凝膠劑供試品5.00 g，將藥物置于圓底燒瓶中，精密吸取50%甲醇溶液50 mL，將溶液超聲處理60 min后所得溶液轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，用適量50%甲醇溶液洗滌錐形瓶，洗液并入容量瓶，用50%甲醇溶液定容，搖勻，過濾，取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，作為抗宮炎凝膠劑的供試品溶液。②水浴回流：稱取抗宮炎凝膠劑供試品5.00 g，置圓底燒瓶中，精密加入50%甲醇溶液50 mL后，精密稱定溶液重量，水浴加熱回流1 h后，所得溶液放冷，再精密稱定溶液重量，用50%甲醇溶液補足減失溶液的重量，搖勻，溶液過濾，取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45 μm）將其濾過，即可以得到抗宮炎凝膠劑供試品溶液。③測定法：分別精密吸取金石蠶苷對照品溶液10 μL與上述兩種抗宮炎凝膠劑供試品溶液各5 μL，注入液相色譜儀，測定、記錄色譜圖。結(jié)果顯示，加熱回流提取的效果明顯優(yōu)于超聲提取，故本實驗選用加熱回流提取方法。見表1。

2.2.2.2 提取時間的選擇 取抗宮炎凝膠劑5.00 g 3份，精密稱定藥物的重量，3份藥物分別置圓底燒瓶中，精密加入50%甲醇溶液50 mL，精密稱定溶液重量，將3份藥物溶液分別用水浴加熱回流提取0.5、1、1.5 h后放冷，再精密稱定溶液重量，用50%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，作為抗宮炎凝膠劑供試品溶液。并按擬定的色譜條件測定。通過比較超聲與加熱回流提取方法與選擇提取時間的試驗，優(yōu)化了供試品制備的條件，確定了樣品處理方法：精密稱取供試品5.00 g，將藥物置于圓底燒瓶中，精密加入50%甲醇溶液50 mL，稱定溶液重量，用水浴加熱回流1 h后放冷，再稱定溶液重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，作為供試品溶液。見表1。

2.2.2.3 溶液的制備 ①對照品溶液的制備：精密稱取適量的金石蠶苷對照品，加入50%色譜甲醇溶液制成每1毫升含金石蠶苷約0.156 mg的對照品溶液。②供試品溶液的制備：取抗宮炎凝膠劑樣品5.00 g，精密稱定其重量，將藥物置于錐形瓶中，精密加入50%甲醇溶液50 mL，稱定溶液重量，水浴加熱回流1 h，放冷，再稱定溶液重量，用50%甲醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，作為供試品溶液。

2.2.3 測定法

分別精密吸取對照品溶液10 μL與供試品溶液5 μL注入液相色譜儀，測定和記錄色譜圖，結(jié)果廣東紫珠在供試品色譜中呈現(xiàn)出與對照品色譜中保留時間相同的金石蠶苷色譜峰（t = 5.51 min），見圖3、4。

3 討論

3.1 薄層色譜定性鑒別研究

本實驗探討了抗宮炎凝膠劑成品中主要成分烏藥、益母草的薄層色譜定性鑒別研究，結(jié)果表明，薄層色譜中具有益母草和烏藥的顯著鑒別特征，各檢出成分不受處方中其他藥的干擾，方法穩(wěn)定，斑點清晰，可作為抗宮炎凝膠劑的有效定性鑒別方法。

3.2 高效液相定性鑒別研究

3.2.1 供試品制備方法考察

本實驗探討了超聲提取法和加熱回流提取法兩種方法，根據(jù)結(jié)果顯示加熱回流提取的效果明顯優(yōu)于超聲提取，故本實驗選用加熱回流提取方法。

3.2.2 提取時間的選擇

本實驗分別考察了加熱回流提取0.5、1、1.5 h，結(jié)果表明提取時間為1 h時，樣品的含量最高，故本實驗采取回流1 h的提取時間，最終確定樣品的最佳提取工藝為加熱回流1 h。

3.3 研究意義

抗宮炎凝膠劑作為治療慢性宮頸炎外用藥新劑型[15]，是近幾年局部用藥的研究熱點[16]，應(yīng)用于陰道給藥的凝膠主要為水溶性凝膠[17-18]，具有與吸附處的黏膜緊密結(jié)合，具有制備工藝簡單、形狀美觀、易于涂布使用、易清洗、不污染衣物、穩(wěn)定性較好等特點[19-20]，因患者使用無異物感，順應(yīng)性強，能充盈整個陰道[21]，是陰道給藥治療宮頸疾病的一種理想劑型。所以抗宮炎凝膠劑臨床療效好，尤其與物理治療、手術(shù)治療相結(jié)合使用時，對慢性宮頸炎的治愈率更高，本研究為治療婦科疾病臨床用藥的劑型發(fā)展開辟了新道路。

綜上所述，本研究對抗宮炎凝膠劑成品中的主要成分廣東紫珠進行的高效液相定性鑒別研究，結(jié)果表明，廣東紫珠在供試品色譜中呈現(xiàn)出與對照品色譜中保留時間相同的色譜峰，所以本方法可作為抗宮炎凝膠劑的有效鑒別方法。

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（收稿日期：2014-09-03 本文編輯：衛(wèi) 軻）

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（收稿日期：2014-09-03 本文編輯：衛(wèi) 軻）