陳 靜，馮 波，王 成，林菁艷（. 川北醫(yī)學(xué)院，四川 南充693；. 川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院麻醉學(xué)系，四川 南充693）

糖尿病是一種慢性?xún)?nèi)分泌代謝紊亂性疾病，隨著病程的發(fā)展，常累及多器官病變、功能衰竭致死。隨著糖尿病發(fā)病率逐年增加，糖尿病已經(jīng)成為危害人類(lèi)健康的一個(gè)重大疾病，但糖尿病的發(fā)病機(jī)制卻仍然未能十分明晰。為了進(jìn)一步明確其發(fā)病機(jī)制，需要建立簡(jiǎn)易快速、經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定、高血糖維持時(shí)間長(zhǎng)且比較切合臨床的動(dòng)物模型，為研究糖尿病發(fā)病機(jī)制及治療藥物開(kāi)發(fā)提供重要手段。而國(guó)內(nèi)外探討影響成功構(gòu)建動(dòng)物模型的因素較多，自1960 年開(kāi)始利用鏈脲佐菌素（streptozotocin，STZ）誘導(dǎo)動(dòng)物糖尿病以來(lái)[1]，STZ 注射已成為目前廣泛采用的糖尿病動(dòng)物模型化學(xué)誘導(dǎo)劑，特別是一次性大劑量STZ 注射導(dǎo)致速發(fā)型糖尿病模型，現(xiàn)已成為研究1 型糖尿病及其并發(fā)癥的常用模型，但在造模過(guò)程中，影響因素較多，大鼠的成模率較低，不利于糖尿病的后續(xù)研究。因此，提高成模率和存活率是非常有必要的。本研究旨在比較大鼠不同體質(zhì)量對(duì)1 型糖尿病造模成功率的影響，為提高糖尿病大鼠造模成功率提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選擇7～9 周齡雄性清潔級(jí)健康SD 大鼠35 只，體質(zhì)量180～270 g，根據(jù)體質(zhì)量分為A、B、C 三組：A 組體質(zhì)量180～210 g，11 只；B 組 體 質(zhì) 量 大 于210～240 g，12 只；C 組 體 質(zhì) 量 大 于240～270 g，12 只。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 所有動(dòng)物單籠喂養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水，晝夜交替（12 h/12 h）適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后禁食12 h，經(jīng)腹腔注射6%STZ 60 mg/kg[2-4]，72 h 后采用微量血糖儀測(cè)空腹血糖（fasting plasma glucose，F(xiàn)PG），注射STZ 7 d 后，以FPG≥11.1 mmol/L 為1 型糖尿病造模成功[5-6]。實(shí)驗(yàn)室溫度25～26 ℃，相對(duì)濕度50%～60%，每天記錄其癥狀、體征、飲食飲水量及死亡情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS11.5 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，造模成功率及死亡率采用秩和檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

A、B、C 三組大鼠成模率分別為81.8%、66.7%和41.7%，A、B兩組成模率明顯高于C 組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；A 組與B 組之間成模率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但大鼠死亡數(shù)增加。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠成模情況比較

3 討 論

造模后大多數(shù)動(dòng)物在24 h 內(nèi)表現(xiàn)為弓腰駝背、步履不穩(wěn)、活動(dòng)較差、毛皮粗糙、蜷臥少動(dòng)，少數(shù)大鼠死亡，72 h 趨于穩(wěn)定，尾靜脈取血測(cè)血糖，大鼠FPG≥11.1 mmol/L，造成糖尿病模型[7-8]。造模成功后的大鼠出現(xiàn)顯著的多飲、多尿、多食癥狀，血糖升高明顯，抓起時(shí)明顯排便反應(yīng)，與正常大鼠相比，呼吸略加深，且毛色無(wú)光澤，皮毛差、色黃，精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，夜間活動(dòng)顯著減少； 造模未成功大鼠體形適中，精神狀況良好，反應(yīng)靈敏，毛發(fā)光澤， 飲食、飲水正常。

對(duì)死亡大鼠進(jìn)行檢查時(shí)，未發(fā)現(xiàn)創(chuàng)傷、感染等現(xiàn)象，解剖時(shí)也未發(fā)現(xiàn)內(nèi)臟器官、血管損傷，死亡原因可能是因?yàn)镾TZ 破壞胰島β 細(xì)胞，導(dǎo)致大量胰島素入血[9]；同時(shí)，也可能由于進(jìn)食不足、血糖過(guò)低引起供能不足所致。STZ 致動(dòng)物血糖升高，主要是選擇性地?fù)p傷胰島β 細(xì)胞，導(dǎo)致體內(nèi)胰島素分泌絕對(duì)不足。引起血糖水平改變，其改變分為3 個(gè)時(shí)相[5]，早期高血糖，持續(xù)約1～2 h，繼而胰島β 細(xì)胞破壞，大量胰島素釋放引起低血糖，持續(xù)約6～10 h，24 h 后開(kāi)始出現(xiàn)持久穩(wěn)定的高血糖狀態(tài)。因此，多選擇注射STZ 72 h 后測(cè)定FPG，此時(shí)FPG 已基本穩(wěn)定。

本研究結(jié)果顯示，隨著體質(zhì)量的增加，成模率降低，死亡率也開(kāi)始增大。7～9 周齡180～240 g 的SD 大鼠此時(shí)的新陳代謝最為旺盛，胰島β 細(xì)胞受體的敏感程度較高，而這個(gè)年齡階段的SD大鼠剛好成年，因此，成模率較高，隨著鼠齡的增長(zhǎng)成模率會(huì)降低，死亡率會(huì)增大。

本實(shí)驗(yàn)測(cè)試FPG 升高后，作者推測(cè)影響大鼠存活率的原因主要有兩點(diǎn)：（1）血糖過(guò)高引起酮癥酸中毒或高滲性昏迷；（2）采血等侵入性操作及多尿引起的腹腔、尿道感染。值得說(shuō)明的是，在選用STZ 造模時(shí)，有研究指出，大劑量一次性注射，成模率雖然很高，但死亡率也很高[10]。作者認(rèn)為，要保證存活率與大鼠的護(hù)理是密切相關(guān)的。為減少大鼠的死亡，提高成模率，在STZ 的注射、護(hù)理方面本研究采取了以下針對(duì)性措施。（1）腹腔注射時(shí)，對(duì)枸櫞酸鈉滅菌緩沖液配液進(jìn)行消毒滅菌即可[11]，如進(jìn)行高壓蒸汽滅菌2 h。（2）在進(jìn)行腹腔注射時(shí)，抓住大鼠使頭朝下、腹腔朝上，使內(nèi)臟移向上腹，要提起腹壁約30°進(jìn)針，避免STZ 注入其他臟器內(nèi)，以免損傷重要臟器，進(jìn)針后注射前先回抽觀察有無(wú)回血或液體是否渾濁，如有回血說(shuō)明進(jìn)入大血管或重要臟器，回液渾濁說(shuō)明進(jìn)入腸內(nèi)，應(yīng)立即停止注射，拔針后用紗布按壓注射部位。（3）在注射STZ后3 h，為防止低血糖可能引起的昏迷，給大鼠喂?jié)舛葹?%的葡萄糖水。在注射STZ 后26 h，當(dāng)血糖高于30 mmol/L 時(shí)，給予甘精胰島素10 U/kg 皮下注射，同時(shí)給予短效胰島素10 U/kg 皮下注射。血糖在次日降到20 mmol/L 左右。（4）勤換墊料并消毒預(yù)防感染。糖尿病大鼠尿量多，墊料潮濕，所以糖尿病大鼠較其他大鼠容易出現(xiàn)感染，特別是泌尿道感染和腹腔感染。因此，在1～2 d 內(nèi)視情況更換墊料。腹腔注射、皮下注射及采血測(cè)血糖等侵入性操作前后，要注意消毒工作。如每次采血測(cè)血糖后可用四環(huán)素（或紅霉素眼膏）局部涂抹處理傷口預(yù)防感染，泌尿道感染流膿可先用聚維酮碘消毒，再用抗生素消炎，每天3 次?？傊?，對(duì)于造模成功后大鼠的護(hù)理監(jiān)測(cè)并控制血糖、勤換墊料、衛(wèi)生消毒防止感染最為關(guān)鍵。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，鼠齡7 周齡、體質(zhì)量180～240 g的SD 大鼠成模率較高。通過(guò)對(duì)影響1 型糖尿病造模成模率和存活因素的探討，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究的進(jìn)行提供了更豐富的材料，減少了動(dòng)物的死亡率，提高了利用率。同時(shí)，培養(yǎng)了參與者的科研意識(shí)，克服了造模過(guò)程中的問(wèn)題，鍛煉了科研思維，也為其他造模研究提供了參考依據(jù)。

[1] Rakieten N，Rakieten ML，Nadkarni MV.Studies on the diabetogenic action of streptozotocin（NSC-37917）[J]. Cancer Chemother Rep，1963，29：91-98.

[2] 虞冬輝，程紅科，李勇，等. 禁食時(shí)間對(duì)鏈脲佐菌素誘導(dǎo)1 型糖尿病小鼠模型的影響[J]. 中國(guó)臨床醫(yī)學(xué)，2013，20（4）：472-476.

[3] 文曉紅，張仁東，趙圓宇，等.STZ 致大鼠Ⅰ型糖尿病模型穩(wěn)定性探討[J]. 西部醫(yī)學(xué)，2012，24（3）：434-436.

[4] 李楊，蔣宏偉.STZ 誘導(dǎo)雌性高糖大鼠模型劑量摸索[J]. 醫(yī)學(xué)信息：西安，2009，22（11）：2574-2575.

[5] 徐叔云，卞如濂，陳修，等. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3 版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：1516-1520.

[6] 王洪敏，鐘志勇，吳慶洲，等. 大鼠糖尿病模型早期病理觀察指標(biāo)的篩選[J]. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，27（1）：86-90.

[7] 農(nóng)慧，盛慶壽，梁健，等.STZ 誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型的研究[J].廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，27（1）：69-72.

[8] 李聰然，游雪甫，蔣建東. 糖尿病動(dòng)物模型及研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2005，15（1）：59-63.

[9] 金苗苗，母義明，牛曉紅. 高脂喂養(yǎng)聯(lián)合低劑量鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病大鼠模型建立及其代謝特征分析[J]. 長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，26（3）：167-170.

[10] 陳楓，程錦楠，唐小平，等. 大鼠品系及藥物劑量對(duì)糖尿病大鼠模型的影響[J].瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，34（2）：156-158.

[11] 劉長(zhǎng)青，宋立江，郭金銘，等. 不同溶劑和體重在鏈脲佐菌素血糖模型的作用比較[J].衛(wèi)生研究，2008，37（3）：276-277.