【摘要】目的：建立茯苓酸的含量測定方法。方法：反相高效液相色譜法、保留時間定性和外標(biāo)兩點法定量。結(jié)果：茯苓酸的最佳提取方法為為把茯苓粉末過60目篩后用甲醇超聲提取1小時。結(jié)論：該提取方法穩(wěn)定可行，適用于茯苓酸的提取。

茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos （Schw.） Wolf的干燥菌核。其味甘、淡、平、歸肺、胃、腎經(jīng)。具有利水滲濕，健脾寧心的功效。用于水腫尿少，痰飲眩悸，脾虛食少，便溏泄瀉，心神不安，驚悸失眠[1]。茯苓酸為四環(huán)三萜酸，是茯苓中的主要活性成分之一[2～3]，具有增強人體免疫力、抗癌、增強胰島素的分化誘導(dǎo)及止吐等作用。本文采用高效液相色譜法，建立其含量測定方法，為茯苓的質(zhì)量評價提供依據(jù)。

1、儀器與材料

1.1儀器與試藥

1.1.1儀器 LC200高效液相色譜儀（美國PE）；PL-203電子天平（瑞士）；HUMANpowerl（Scholar） 純水/超純水系統(tǒng)（韓國）；SK-18TC超聲波清洗器。

1.1.2試劑 試劑乙腈為色譜，純水為自制高純水，其他試劑均為AR。茯苓酸對照品。

2、高效液相色譜條件的選擇

用十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑（DiamonsilC18，4.6×250nm，5um）；柱溫25℃；乙腈-0.4%乙酸（85：15）為流動相；流速1mLmin-1；206nm檢測。此條件下，茯苓酸和樣品中的其它物質(zhì)可以達(dá)到良好的分離。

3、方法與結(jié)果

3.1對照品溶液制備

精密稱取茯苓酸對照品4.9mg，用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶中，搖勻。即配制得0.49mg/mL的茯苓酸對照品溶液。

3.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

在上述色譜條件下分別精密吸取對照品溶液（0.49mg/mL）2ul、4ul、6ul、8ul、10ul注入高效液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積為橫坐標(biāo)茯苓酸進(jìn)樣質(zhì)量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。茯苓酸質(zhì)量在0.49ug-5.88ug范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為：Y=2.059×10-6X-0.121146，相關(guān)系數(shù)r=0.9997。

3.3提取條件的考察[4～6]

3.3.1提取溶劑的考察

取茯苓藥材粉末（60目）約2g共5份，精密稱定，分別加入甲醇、無水乙醇、乙醚、氯仿、丙酮20mL，超聲提取30min（中途補充損失的溶劑），取出，放冷，過濾；用微孔濾膜（0.45ul）濾過，各進(jìn)樣20ul進(jìn)行液相色譜分析。不同溶劑對測定結(jié)果的影響結(jié)果見表1-1。

表1-1 提取溶劑對測定結(jié)果的影響（n=3）

溶劑甲醇 無水乙醇乙醚氯仿丙酮

茯苓酸含量（%）0.0625 0.0562 0.0525 0.0447 0.0395

以上結(jié)果表明，甲醇作為提取溶劑，得到的茯苓酸的含量最高，故選擇甲醇作為供試品溶液制備的的提取溶劑。

3.3.2提取方法的考察

取茯苓藥材粉末（60目）約2g，精密稱定，置100mL三角瓶中，共3 份，分別加入20mL甲醇，稱定重量，采用超聲45min、熱回流3h、冷浸24h的提取方法；取出，放冷，用甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45ul）濾過，各進(jìn)樣20ul進(jìn)行液相色譜分析。結(jié)果表明，超聲法提取含量最高，故選擇超聲處理法作為供試品溶液制備的提取方法。

3.3.3提取時間的考察

取茯苓藥材粉末（過60目篩）約2g，精密稱定，置100mL三角瓶中，共6份，分別加入20mL甲醇，稱定重量，超聲提取15min、30min、45min、60min、90min、120min，取出，放冷，用甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45ul）濾過，各進(jìn)樣20ul進(jìn)行液相色譜分析。對提取時間進(jìn)行考察結(jié)果見表1-2。

表1-2 提取時間對測定結(jié)果的影響（n=3）

時間（min）1530456090120

茯苓酸含量（%）0.05610.05790.05960.06190.06370.0612

以上結(jié)果表明，超聲處理90分鐘提取含量最高，故確定提取時間為90分鐘，供試品溶液采用超聲處理90分鐘。

3.3.4粉碎粒度的選擇

分別取茯苓藥材粉末20目、40目、60目、80目約2g，精密稱定，置100mL三角瓶中，加入20mL甲醇，稱定重量，超聲提取90分鐘，取出，放冷，用甲醇補足損失的重量，搖勻，濾過。取續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45ul）濾過，各進(jìn)樣20ul進(jìn)行液相色譜分析。結(jié)果表明，藥材粉碎粒度為60目時，提取的茯苓酸含量最高，故確定藥材粉碎過60目篩。

4、討論

本研究篩選出茯苓酸提取條件為把茯苓粉末過60目篩后用甲醇超聲提取1小時。該提取方法穩(wěn)定可行。超聲提取方法簡便，提取率高，比常規(guī)提取方法的操作時間縮短10一20倍。超聲提取天然藥物有效成分具有周期短、成本低、不破壞活性成分等顯著優(yōu)點，用于茯苓酸的提取可以節(jié)約成本，提高效率。

參考文獻(xiàn)

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作者簡介

馬巾媛，（1981～）女，碩士，助教，主要從事中草藥鑒定方面的研究。