西安交通大學醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院老年心血管科干二病區(qū)（西安710004）

高 潔 盛 嬰△ 金愛萍 葉 莎

目前動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）相關疾病是人群死亡的首位原因，在我國發(fā)病率、致殘率和病死率呈逐年上升趨勢。藥理研究證實：丹參多酚酸鹽具有改善內皮功能、促進血管生成、抑制低密度脂蛋白的氧化修飾、抗炎、抑制金屬蛋白酶的表達等作用［1］。本研究以AS易感動物，遺傳性高脂血癥兔（Watanabe heritable hyperlipidemic rabbit，WHHL兔）為研究對象，給予高膽固醇飲食建立動脈粥樣硬化模型后觀察丹參多酚酸鹽對兔主動脈動脈粥樣硬化程度的影響，為此類藥物用于人類動脈粥樣硬化的預防和治療提供研究基礎。

材料與方法

1 動物與藥品 選擇新西蘭兔24只，雄性，1月齡，體重1．2～1．6kg，購自西安交通大學實驗動物中心。實驗室適應性喂養(yǎng)普通飼料1周后，稱重，隨機分為3組：正常對照組8只，飼喂正常飼料120g／d；高膽固醇飲食組8只，飼喂高膽固醇飼料120g／d；高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組8只，高膽固醇飼料120g／d＋丹參多酚酸鹽120mg／kg·d腹腔內注射（由上海綠谷制藥有限公司），喂養(yǎng)8周后處死每組動物。高膽固醇飼料按照西方飲食飼料配方：膽固醇2%，蛋黃粉5%，豬油8%，基礎飼料85%。

2 試劑及儀器 二甲苯溶液，100%乙醇，95%乙醇，80%乙醇，70%乙醇，50%乙醇，蒸餾水，蘇木素，鹽酸酒精，1%氨水，1%伊紅，中性樹膠由西安交通大學醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院病理科提供；Masson復合染色液，1%亮綠SF，1%磷鉬酸，0．2%醋酸購自北京益利精細化學品有限公司；光學顯微鏡（BX-51型）購于日本Olympus公司；病理圖文分析系統(tǒng)PIPS2000購于重慶天海醫(yī)療設備有限公司；酒精燈，試管，試劑杯，量筒，鑷子，量杯，毛筆，金屬架，防脫載玻片，蓋玻片，操作臺均由西安交通大學醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院病理科提供。

3 標本取材及留取 各組實驗動物分別在預定實驗終點給予耳緣靜脈注射3%戊巴比妥鈉30mg／kg全身麻醉后左心室取血5ml并注入空氣20ml空氣栓塞處死動物。立即開胸并剪開右心房，自左心室灌注福爾馬林固定主動脈；分離主動脈，取出從近主動脈弓部到髂動脈分叉處全部主動脈，清除血管外組織，生理鹽水沖洗，置于中性甲醛緩沖液中固定。

4 HE染色及Masson染色鏡下觀察 HE染色鏡下觀察病理切片形態(tài)，泡沫細胞數(shù)量及形態(tài)，纖維帽形成，膠原纖維增殖及融合，病灶深部可見壞死崩潰物等情況，從HE染色片上隨機選取5個視野，利用朗珈PAS9000病理分析系統(tǒng)對主動脈內膜，中膜厚度及內膜／中膜（IMT）進行測量。通過 Masson染色觀察動脈硬化分級：0級：正常血管；1級：少于50%的外膜受累，內膜增生占管腔不超過20%；2級：50%～100%的外膜受累輕度纖維化，內膜增生不超過管腔的20%；3級：100%外膜受累，中度纖維化，內膜增生占管腔的20%～50%；4級：100%外膜受累，重度纖維化，內膜增生達管腔的50%～80%；5級：全部管腔閉鎖。

5 圖像采集及統(tǒng)計分析 采用德國Leica公司QWin550CW圖像系統(tǒng)進行采集與分析。本組數(shù)據(jù)采用SPSS17．0軟件進行統(tǒng)計分析，對正態(tài)分布且方差齊同資料采用單因素方差分析檢驗，各組之間兩兩比較用LSD-T法。以P＜0．05為有顯著性差異，P＜0．01為有極顯著性差異。

結 果

1 動脈壁及AS斑塊肉眼觀察 見圖1。正常對照組WHHL兔主動脈內膜光滑，未見明顯異常；高膽固醇飲食組WHHL兔主動脈內膜形成明顯粥樣斑塊，融合成片，呈瓷白色，斑塊布滿主動脈全程，胸主動脈及腹主動脈的各動脈分支入口處可見明顯斑塊形成；高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組WHHL兔主動脈內膜不光滑，內膜散在不規(guī)則隆起的斑塊，顏色為淺黃色，由主動脈弓至腹主動脈斑塊逐漸減少，各動脈分支入口處可見少量斑塊形成。

圖1 各組動物胸主動脈內膜肉眼觀

2 AS斑塊HE染色 見圖2。正常對照組WHHL兔動脈內膜結構完整，內皮下無脂質沉積或斑塊形成。高膽固醇飲食組WHHL兔主動脈內皮細胞明顯減少，內膜顯著增厚，內膜下的脂質沉積明顯，脂質斑塊及纖維帽形成，纖維帽下可見大量壞死崩解物質，斑塊底部少量肉芽組織，少量淋巴細胞及泡沫細胞，血管平滑肌排列紊亂，中膜因斑塊壓迫、平滑肌細胞萎縮，彈力纖維破壞變薄。高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組WHHL兔主動脈板塊表面大量平滑肌細胞和細胞外基質構成的纖維帽，其下可見數(shù)量不等的泡沫細胞及炎細胞，內皮細胞輕度減少．內膜增厚，內膜下有脂質沉積，可見血管平滑肌細胞增生，排列較規(guī)整，核略腫脹，彈力纖維、膠原纖維輕度增生。

圖2 各組動物動脈壁及AS斑塊HE染色（×100）

3 AS斑塊Masson染色 見圖3。正常對照組WHHL兔主動脈硬化為0級，高膽固醇飲食組WHHL兔主動脈硬化4級以上，高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組WHHL兔主動脈硬化3～4級。

圖3 動脈壁及AS斑塊Masson染色（×100）

4 各組內膜厚度、內膜／中膜厚度比比較 見附表。高膽固醇飲食組、高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組WHHL兔內膜厚度、內膜／中膜厚度比均高于正常對照組（P＜0．01）；高膽固醇飲食組 WHHL兔內膜厚度、內膜／中膜厚度比高于高膽固醇飲食加丹參多酚酸鹽組 WHHL兔（P＜0．01）。

附表 各組內膜厚度、內膜／中膜厚度比比較（±s）

附表 各組內膜厚度、內膜／中膜厚度比比較（±s）

注：★與正常對照組比較，P＜0．05；☆與高膽固醇飲食＋丹參多酚酸鹽組比較，P＜0．05

丹參多酚酸鹽組內膜厚度（μm） 0．00±0．00 76．83±11．42★☆ 59．20±11．28項 目 正常對照組 高脂飲食組 高膽固醇飲食＋★內膜／中膜厚度比（%）0．00±0．00 116．28±12．54★☆ 53．35±4．83★

討 論

動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展屬于多重危險因素導致的綜合臨床表現(xiàn)，疾病發(fā)生過程即是血管結構和功能的損傷與修復的過程。最早表現(xiàn)為內皮功能障礙以及由內皮功能障礙所導致的一系列所謂的生物炎癥性瀑布反應，最終導致斑塊的形成、破裂、鈣化、出血及血栓形成等。丹參多酚酸鹽是用中藥丹參提取的有效活性成分制成的一種凍干粉針劑，主要成分為丹參乙酸鎂。隨著對其化學成分及作用機制的深入研究，發(fā)現(xiàn)注射用丹參多酚酸鹽是通過多個機制、多種途徑來產生對抗冠狀動脈粥樣硬化的。相關研究提示：丹參多酚酸鹽具有改善血液循環(huán)、抗菌、抗炎、抗凝血、抗血栓形成、抗氧化、調血脂等作用［2，3］。鄭建文等研究發(fā)現(xiàn)：丹參多酚酸鹽具有較強的清除自由基的作用及抑制血小板聚集具和抑制血栓烷A2合成的作用，從而對動脈粥樣硬化的發(fā)展具有抑制作用［4］。此外，丹參多酚酸鹽可促進內皮細胞遷移，促進血管生成，具有活血化瘀通脈的作用，對心血管系統(tǒng)有良好的保護作用［5］。

本研究以遺傳性高脂血癥兔為研究對象，建立動脈粥樣硬化模型后給予丹參多酚酸鹽干預治療，研究顯示：丹參多酚酸鹽可在一定程度上減輕主動脈硬化程度，這為中藥用于動脈粥樣硬化性疾病的治療提供了新的思路，有望成為治療心血管疾病的新一代藥物。

［1］ Ho JH，Hong CY．Salvianolic acids：small compounds with multiple mechanisms for cardiovascular protection［J］．J Bio med Sci，2011，18（1）：30-34．

［2］ 葉 勇．丹參有效成分分離的研究進展［J］．藥品評價，2005，2（2）：146-149．

［3］ 談世進，郭慧峰，陸 燕．丹參多酚酸鹽對老年不穩(wěn)定型心絞痛患者內皮功能的影響［J］．實用老年醫(yī)學，2009，23（2）：87-89．

［4］ 鄭建文．注射用丹參多酚酸鹽治療冠心病45例［J］．中西醫(yī)結合心腦血管雜志，2006，8（4）：1039-1040．

［5］ 吳燕燕，孫 煜，王 易．丹參多酚酸鹽活血化瘀作用的多元化藥理作用［J］．中國現(xiàn)代應用藥學，2010，27（11）：975-979．