楚青惠 汪官保 曾勇慶＊＊ 張 哲 趙 勇 張建梅 武慕達(dá) 謝偉仕

(1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，泰安 271018;2.山東寶來利來生物工程股份有限公司，泰安 271000;3.山東銀寶食品有限公司養(yǎng)豬場，肥城 271611)

在現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)中，母豬的繁殖性能和健康狀況直接影響豬場的經(jīng)濟(jì)效益，而在規(guī)模化、集約化的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件下，母豬繁殖障礙等問題日趨嚴(yán)重，不少母豬處于亞健康狀態(tài)，特別是抗生素引起的腸道的亞健康。廣譜抗生素和化學(xué)藥物等添加劑的濫用，不僅殺滅了致病菌，同時(shí)也殺死了益生菌，破壞了腸道微生物平衡，導(dǎo)致菌群生長失調(diào)［1-2］。為解決上述問題，以乳酸菌為主的高品質(zhì)微生態(tài)制劑已經(jīng)成為打造安全、高效養(yǎng)殖的首選添加劑［3-4］。

乳酸菌是一種安全、優(yōu)質(zhì)、高效的益生菌，是形態(tài)、生理學(xué)特性和代謝性能不完全相同的無芽孢、革蘭氏陽性細(xì)菌的總稱。天然乳酸菌飼料添加劑是通過微生物發(fā)酵，真空冷凍干燥，再經(jīng)配制而成的活菌凍干菌粉制劑。大量研究表明，乳酸菌可起到防治消化道疾病和促進(jìn)生長的雙重作用［5］，還能提高機(jī)體特異性免疫水平，通過加強(qiáng)宿主對有害菌非特異性免疫來提高機(jī)體抗病力［6］。本試驗(yàn)以母豬及哺乳仔豬為試驗(yàn)對象，系統(tǒng)研究添加不同劑量乳酸菌對母豬繁殖性能及哺乳仔豬生長性能的影響及其作用機(jī)理，以確定乳酸菌的適宜添加量，為乳酸菌制劑在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物與分組

試驗(yàn)豬選自山東銀寶食品有限公司養(yǎng)豬場，選擇第4胎次、體重和體況相近、健康無病、妊娠后期(81～85 d)的長大(長白×大白)二元母豬40頭，隨機(jī)分成4組，每組10頭，飼養(yǎng)于妊娠舍，預(yù)產(chǎn)期前7天母豬由妊娠舍轉(zhuǎn)入產(chǎn)仔舍，舍內(nèi)利用產(chǎn)床網(wǎng)上飼養(yǎng)，哺乳期21 d。各組試驗(yàn)豬進(jìn)行1周的預(yù)試驗(yàn)后進(jìn)入正試期，試驗(yàn)期間，基礎(chǔ)飼糧采用玉米-豆粕型，參照NRC(1998)豬飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配合而成，4%預(yù)混料和大料均不含任何抗生素和藥物，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。對照組及3個(gè)試驗(yàn)組母豬分別通過飲水每天每頭飼喂0、200、250、300 mL的乳酸菌液，試驗(yàn)期80 d;各組哺乳仔豬通過飲水每天每頭飼喂0、5、10、15 mL的乳酸菌液，試驗(yàn)期7 d，其他飼養(yǎng)管理按常規(guī)方法進(jìn)行并保持一致。

乳酸菌液由山東寶來利來生物工程股份有限公司研發(fā)的乳酸菌自動發(fā)酵罐發(fā)酵制備，使用的菌種主要為植物乳桿菌與戊糖片球菌，發(fā)酵液活乳酸菌濃度≥1×109CFU/mL，乳酸含量≥30 mg/mL，pH 在 3.5～4.5 之間。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成與營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

1.2 母豬繁殖性能及哺乳仔豬生長性能的測定

母豬繁殖性能:分別記錄每頭母豬的總產(chǎn)仔數(shù)、活仔數(shù)、弱仔數(shù)(初生重小于0.9 kg)、初生個(gè)體重和窩重。弱仔率為弱仔數(shù)占活仔數(shù)的比例，活仔率為活仔數(shù)占總產(chǎn)仔數(shù)的比例。根據(jù)母豬的產(chǎn)活仔數(shù)和乳房發(fā)育情況調(diào)整母豬帶仔數(shù)，使母豬實(shí)際帶仔數(shù)為10頭左右，記錄每頭母豬的實(shí)際帶仔數(shù);育成率為母豬帶仔數(shù)與斷奶仔豬數(shù)的比例。

哺乳仔豬生長性能:測定哺乳仔豬21日齡的斷奶個(gè)體重和窩重，分別計(jì)算4組仔豬在哺乳期間的增重速度。

1.3 母豬及哺乳仔豬的健康體況

試驗(yàn)期間記錄各組母豬分娩滯產(chǎn)數(shù)、早產(chǎn)數(shù)、母豬三聯(lián)征(MMA)(乳房炎、子宮炎、無乳綜合征)發(fā)病數(shù)，以及哺乳仔豬腹瀉狀況。

滯產(chǎn)率為母豬從開產(chǎn)到產(chǎn)完仔豬總時(shí)間超過6 h的數(shù)量占總母豬數(shù)的比例;早產(chǎn)率為產(chǎn)仔日期比預(yù)產(chǎn)期提前的母豬數(shù)量占總母豬數(shù)的比例。

母豬體況評分［7］:在母豬斷奶時(shí)，由3名工作人員按1～5分對母豬的膘況進(jìn)行評定，1分=極度消瘦，2分=消瘦，3分=適度，4分=肥胖，5分=過肥。

仔豬腹瀉狀況評定［8］:觀察并記錄試驗(yàn)期間每頭試驗(yàn)豬每天的腹瀉情況;腹瀉率=觀察記錄仔豬腹瀉個(gè)數(shù)總和∕觀察總天數(shù)。

仔豬皮毛發(fā)育狀況評定［8］:在仔豬斷奶前1天，由3名工作人員按1～5分對試驗(yàn)豬的皮毛發(fā)育狀況進(jìn)行評定，1分=皮毛非常粗糙，2分=皮毛粗糙，3分=皮毛較光滑，4分=皮毛光滑，5分=皮毛非常光滑并有光澤。

1.4 母豬再繁殖性能的測定

測定并分別統(tǒng)計(jì)4組母豬斷奶至再發(fā)情的時(shí)間間隔，斷奶后1～7 d、8～14 d內(nèi)母豬發(fā)情數(shù)、未正常發(fā)情數(shù)，分析情期受胎率(母豬配種后25 d，用B超診斷母豬是否受胎)、情期返情率的差異。

1.5 母豬泌乳力、初乳成分及初乳免疫球蛋白G(IgG)含量的測定

以同窩存活仔豬哺乳至21日齡時(shí)的全窩增重代表母豬的泌乳力，包括寄養(yǎng)進(jìn)來的仔豬在內(nèi)，但寄出仔豬的體重不計(jì)在內(nèi);日泌乳力=［(斷奶窩重-初生窩重)×3］/21［9］。

采集每頭母豬的初乳(開產(chǎn)3 h以內(nèi))放入滅菌的離心管中，-20℃保存?zhèn)溆?。用福斯乳汁分析儀測定初乳成分;初乳抗體G蛋白用豬IgG酶聯(lián)免疫檢測試劑盒檢測，測定OD450nm值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品IgG含量，每個(gè)樣品2個(gè)平行。

1.6 母豬血清抗氧化指標(biāo)的測定

母豬妊娠110 d時(shí)08:00，每組隨機(jī)挑選4頭母豬(共16頭)用真空采血管耳緣靜脈采血10 mL，將分離的血清放入滅菌的離心管，-20℃保存?zhèn)溆?。總超氧化物歧化?T-SOD)活性、總抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)含量分別采用南京建成生物工程研究所試劑盒檢測，根據(jù)對應(yīng) OD550nm、OD520nm、OD532nm值計(jì)算。

1.7 母豬糞便微生物數(shù)量的測定

在母豬哺乳期5、10和15 d的09:00，于母豬飼喂前采集其糞便，-20℃保存?zhèn)溆茫?0-11］;將每頭母豬3次糞樣等量混勻，取樣用平板菌落計(jì)數(shù)法測定糞便微生物數(shù)量。大腸桿菌采用伊紅美蘭培養(yǎng)基，乳酸菌采用MRS培養(yǎng)基，總菌采用LB培養(yǎng)基，分別于37℃培養(yǎng)48 h后，記錄菌落數(shù)，并換算成每克內(nèi)容物所含菌落數(shù)。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan氏法多重比較檢驗(yàn)，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬繁殖性能的影響

從表2可以看出，各組試驗(yàn)豬的死胎數(shù)、母豬帶仔數(shù)、斷奶仔豬數(shù)、仔豬初生重、初生窩重均差異不顯著(P＞0.05)，其中，300 mL 組死胎數(shù)最少、活仔率最高，分別比對照組降低了63.16%、提高了8.00個(gè)百分點(diǎn)，仔豬初生重和初生窩重最高，分別比對照組提高了 7.09%、21.77%。與對照組相比，試驗(yàn)組仔豬斷奶育成率分別提高了7.64、6.05和8.89個(gè)百分點(diǎn)。

2.2 飼喂不同劑量乳酸菌對哺乳仔豬生長性能的影響

從表3可以看出，與對照組相比，試驗(yàn)組仔豬斷奶重、平均日增重均極顯著提高(P＜0.01)，仔豬斷奶重分別提高了22.70%、16.24%、23.48%，平均日增重分別提高了 30.54%、21.84%、29.76%。

2.3 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬及哺乳仔豬健康體況的影響

從表4可以看出，試驗(yàn)組母豬哺乳期MMA發(fā)病率分別為 10.00%、0.00%、0.00%，而對照組的發(fā)病率為30.00%;與對照組相比，3個(gè)試驗(yàn)組斷奶母豬體況評分分別顯著或極顯著提高了25.00%、37.50%和 29.17%(P＜0.05 或 P＜0.01)。與對照組相比，3個(gè)試驗(yàn)組哺乳仔豬腹瀉率分別降低了5.62、5.79、6.84 個(gè)百分點(diǎn);而斷奶前 1 天仔豬皮毛發(fā)育狀況評分則極顯著提高(P＜0.01)，分別提高了35.48%、25.81%、45.16%。

表2 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬繁殖性能的影響Table 2 Effects of different Lactobacillus feeding amounts on reproduction performance of sows

表3 飼喂不同劑量乳酸菌對哺乳仔豬生長性能的影響Table 3 Effects of different Lactobacillus feeding amounts on growth performance of suckling piglets

表4 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬及哺乳仔豬健康體況的影響Table 4 Effects of different Lactobacillus feeding amounts on sow and suckling piglet healthy state

2.4 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬再繁殖性能的影響

從表5可以看出，試驗(yàn)組母豬斷奶后1～14 d內(nèi)均正常發(fā)情，且情期受胎率為100.00%;而對照組未正常發(fā)情率為 30.00%，情期返情率為10.00%，情期受胎率只有 60.00%。

表5 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬再繁殖性能的影響Table 5 Effects of different Lactobacillus feeding amounts on next reproduction performance of sows

2.5 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬泌乳力、初乳成分及IgG含量的影響

從表6可以看出，飼喂乳酸菌液對母豬初乳IgG含量具有顯著影響(P＜0.05)，與對照組相比，試驗(yàn)組分別提高了7.96%、9.24%、11.31%。同時(shí)，飼喂乳酸菌液對母豬日泌乳力、乳蛋白、乳脂含量也有提高趨勢，與對照組相比，3個(gè)試驗(yàn)組母豬日泌乳力分別提高了15.45%、10.94%、23.18%，乳蛋白含量分別提高了15.29%、0.40%、4.14%，乳脂含量分別提高了 3.18%、23.25%、47.77%。

表6 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬泌乳力、初乳成分及IgG含量的影響Table 6 Effects of different Lactobacillus feeding amounts on the lactescence，colostrum ingredients and IgG content of sows

2.6 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

從表7可以看出，飼喂乳酸菌液對母豬血清抗氧化指標(biāo)有提高趨勢，表現(xiàn)為T-SOD活性和T-AOC升高，MDA含量有下降趨勢，其中，300 mL組的T-SOD活性、T-AOC最高，比對照組分別提高了13.74%、1.00%，而 MDA 含量最低，比對照組降低了 5.25%。

2.7 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬糞便微生物數(shù)量的影響

從表8可以看出，與對照組相比，試驗(yàn)組母豬糞便中大腸桿菌數(shù)量分別降低了25.76%、25.62%、47.25%，其中，300 mL 組差異達(dá)顯著水平(P＜0.05);3個(gè)試驗(yàn)組糞便中沙門氏菌數(shù)量與對照組差異顯著(P＜0.05)，尤其是 300 mL組的降低較為明顯;3個(gè)試驗(yàn)組糞便中乳酸菌數(shù)量均有顯著提高(P＜0.05)，分別是對照組的 3.99、4.19、4.70 倍。

表7 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬血清抗氧化指標(biāo)的影響Table 7 Effects of different Lactobacillus feeding amounts on serum antioxidative indexes of sows

表8 飼喂不同劑量乳酸菌對母豬糞微生物數(shù)量的影響Table 8 Effects of different Lactobacillus feeding amounts on the number of fecal microorganisms of sows 106 CFU/g

3 討論

3.1 飼喂乳酸菌對母豬繁殖性能的影響

繁殖母豬是養(yǎng)豬場的核心，而隨著集約化水平的提高，母豬超負(fù)荷生產(chǎn)，造成母豬繁殖障礙等問題日趨嚴(yán)重，使得豬群異常淘汰的比例劇增。因此，探討高效益生菌在繁殖母豬及仔豬上的應(yīng)用具有重要意義。本試驗(yàn)研究表明，給妊娠及泌乳母豬飼喂乳酸菌液能夠提高繁殖性能，其中飼喂300 mL組的仔豬初生重、初生窩重以及仔豬斷奶育成率最高;母豬哺乳期MMA發(fā)病率有所降低，母豬的泌乳力得到提高，為哺乳仔豬的生長發(fā)育提供了保障，也保證了斷奶母豬具有良好的體況，從而縮短了斷奶至再發(fā)情的時(shí)間間隔，并提高了試驗(yàn)組母豬的發(fā)情率和情期受胎率。

母豬飼糧中添加乳酸菌液能降低母豬腸道pH，調(diào)節(jié)母豬腸道內(nèi)環(huán)境平衡，提高了營養(yǎng)物質(zhì)的代謝和吸收［12］，提高采食量和消化率，并能直接或間接地促進(jìn)與泌乳有關(guān)激素的分泌，從而提高了哺乳母豬的泌乳性能;同時(shí)，減少母豬因泌乳造成體重大幅下降，防止母豬斷奶至發(fā)情間隔延長、下一胎次產(chǎn)仔數(shù)減少等問題。

Otero等［13］研究表明，牛陰道乳酸菌作為益生菌可以通過抑制子宮內(nèi)有害菌的生長來預(yù)防牛子宮炎癥。乳酸菌在代謝過程中能夠合成一類具有抑菌活性的小肽、多肽和多肽前體復(fù)合物即乳酸菌素，其可在致病菌細(xì)胞膜上形成親水孔道，使胞內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)外泄，胞外水分子流入，從而達(dá)到抑制和殺死病原菌的目的［14］，有效地阻止了腐敗性細(xì)菌的異常增殖，抑制有害物質(zhì)的產(chǎn)生，促進(jìn)子宮復(fù)原，并且在一定程度上有利于母豬產(chǎn)后體質(zhì)的恢復(fù)，降低母豬的生產(chǎn)應(yīng)激［15］。

3.2 飼喂乳酸菌對哺乳仔豬生長性能的影響

本試驗(yàn)研究表明，哺乳仔豬添加乳酸菌液15 mL組提高斷奶窩重幅度最大，試驗(yàn)組仔豬平均日增重與李國友等［16］報(bào)道的直接給仔豬灌服乳酸菌液對仔豬的增重效果較為一致，試驗(yàn)組仔豬腹瀉率也有非常明顯的改善。由于泌乳母豬和哺乳仔豬同時(shí)飼喂乳酸菌，一方面可以通過改善母豬泌乳性能，為仔豬提供充足的乳汁營養(yǎng)［15］;另一方面可以改善哺乳仔豬腸道的微生態(tài)環(huán)境，從而有效促進(jìn)了哺乳仔豬的生長發(fā)育和健康狀況。

仔豬剛出生時(shí)的腸道是無菌的，出生以后隨著仔豬哺乳以及與產(chǎn)床等環(huán)境的接觸，外來菌群逐漸進(jìn)入腸道，經(jīng)過黏附和定植，建立自身的腸道菌群，維持著腸道的微生態(tài)平衡。因而對于初生仔豬，灌服一定劑量黏附性好的乳酸菌，可使乳酸菌較早地占據(jù)腸道有效位點(diǎn)，從而在生態(tài)位上競爭性地抑制其他病原菌的黏附，有效地阻止了有害菌的入侵［17-18］，有利于降低仔豬腹瀉等發(fā)病率。

3.3 飼喂乳酸菌對母豬繁殖性能和哺乳仔豬生長性能影響的作用機(jī)理

本試驗(yàn)研究表明，飼喂乳酸菌對提升母豬初乳中IgG含量的影響顯著，對乳蛋白、乳脂含量也具有一定的影響，IgG是母豬初乳中的主要免疫球蛋白，能活化補(bǔ)體、清除病原體、增強(qiáng)仔豬免疫力［19］。初乳營養(yǎng)水平的高低尤為重要，初乳不僅提供了仔豬營養(yǎng)，還富含免疫球蛋白，能提供被動免疫，還有大量的肽、激素和酶等，這些生物活性物質(zhì)能促進(jìn)仔豬消化系統(tǒng)的發(fā)育及成熟，形成正常的腸道微生物區(qū)系，誘導(dǎo)腸道內(nèi)正常消化液的分泌［20］。初乳營養(yǎng)水平及泌乳量直接影響仔豬生長性能及后期健康狀況。初乳蛋白主要包含酪蛋白和乳清蛋白，乳清蛋白主要提供免疫球蛋白，而酪蛋白為氨基酸的主要來源［21］，母乳中所含的蛋白質(zhì)在仔豬體內(nèi)消化率極高。Mcnamara等［22］指出，在產(chǎn)前2周增加一定量的脂肪攝入量能提高所產(chǎn)仔豬的活力［23］，同時(shí)提高母乳中的脂肪含量。

飼喂乳酸菌對母豬血清抗氧化指標(biāo)有提高趨勢，并且其抗氧化性能是隨乳酸菌飼喂劑量的增大而提高，說明添加較高劑量的乳酸菌更有利于提升母豬的抗氧化性能。母豬在分娩和泌乳過程中，生理調(diào)節(jié)發(fā)生了巨大的變化，機(jī)體消耗大量的能量和氧，可產(chǎn)生超氧陰離子(O2-)、羥自由基(·OH)等活性氧自由基(ROS)，如不及時(shí)清除，細(xì)胞內(nèi)大分子物質(zhì)就會受到氧化損傷，影響母豬生產(chǎn)性能，產(chǎn)生一些代謝性疾病和乳腺疾?。?4-25］。乳酸菌的菌體、由菌體破碎離心得到的無細(xì)胞提取物、胞外分泌物對O2-和·OH等ROS有較高的清除能力［26］。因此，給母豬飼喂乳酸菌液，可以在提高其生長性能的同時(shí)提高抗氧化酶和抗氧化物質(zhì)等活性，從而清除過量的自由基，保護(hù)機(jī)體組織免受氧化損傷［27-28］。

另外，飼喂乳酸菌能夠降低母豬糞便中大腸桿菌和沙門氏菌的數(shù)量，提高乳酸菌的數(shù)量，并且其效果是隨乳酸菌飼喂劑量的提高而增大，這同樣說明添加較高劑量的乳酸菌更有利于改善母豬的腸道微生態(tài)。Muralidhara等［29］研究發(fā)現(xiàn)，飼喂乳酸菌能顯著降低仔豬腸道組織及糞便中大腸桿菌、沙門氏菌等有害菌的數(shù)量，增加乳酸菌菌群數(shù)量。腸道內(nèi)的有益微生物增加而使?jié)撛诘闹虏⌒晕⑸餃p少，因而表現(xiàn)為排泄物中的有益微生物數(shù)量增加，致病性微生物數(shù)量減少。

4 結(jié)論

綜上，對于妊娠后期和泌乳期母豬來說，每天每頭飼喂 250～300 mL乳酸菌液即 2.5×1011～3.0×1011個(gè)乳酸菌菌落數(shù)對其生長性能、健康狀況、血清抗氧化指標(biāo)、糞便微生物數(shù)量等改善的效果最好;對于哺乳仔豬來說，每天每頭飼喂10～15 mL乳酸菌液即 1.0×1010～1.5×1010個(gè)乳酸菌菌落數(shù)對其生長性能的改善效果最好。

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