孫捍衛(wèi)，張鳳梅，韓磊，張洪財(cái)

(1．武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院，天津 300162;2．黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，黑龍江 哈爾濱 150040)

梔子為茜草科(Rubiaceae)植物梔子(Gardenia jasm inoides Ellis)的干燥成熟果實(shí)，性寒，味苦，歸心、肺、三焦經(jīng)，具有瀉火除煩，清熱利尿，涼血解毒的功效，外用消腫止痛。主治熱病心煩郁悶;濕熱黃疸，熱淋血淋;血熱吐血，尿血;熱毒瘡瘍，跌打腫痛。主產(chǎn)于浙江、福建、江西、湖南、廣東等地。該植物中含有環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物，有機(jī)酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、香豆素類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、皂苷類(lèi)、木脂素類(lèi)及其他類(lèi)化合物，是其活性物質(zhì)基礎(chǔ)。為進(jìn)一步明確該植物的藥理活性部位及其活性部位物質(zhì)基礎(chǔ)，我們對(duì)梔子的化學(xué)成分進(jìn)行研究。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用硅膠柱色譜、ODS、高效液相色譜等方法，從中共分離鑒定出4個(gè)化合物。

1 儀器與材料

Bruke－400型超導(dǎo)核磁共振光譜儀(美國(guó)Bruker公司);Agilent 1100制備型HPLC(美國(guó)Agilent公司);C18制備型色譜柱(ZORBAX SB－C18，9．4mm ×25cm，5μm);柱色譜用硅膠(青島海洋化工廠，140～200目、200～300目);薄層色譜用硅膠板(Silica gel60F254)和TLC Silica gel60 Rp－18 F254s(Rp－18)(德國(guó) Merck公司);柱色譜用反相ODS(ODS－AM，日本YMC公司);化學(xué)試劑為分析純(天津市第一化工有限公司)。

梔子果實(shí)于2011年10月采自浙江，經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定學(xué)教研室鑒定為茜草科植物梔子(Gardenia jasm inoides Ellis)的新鮮果實(shí)，標(biāo)本(20111021)保存于武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院植物標(biāo)本室。

2 提取分離

梔子果實(shí)12kg，用95%的乙醇回流提取3次，每次1．5h，每次乙醇用量10L，過(guò)濾，減壓回收溶劑，得稠浸膏160g。將浸膏混懸于8L水中，分別用等體積的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、水飽和正丁醇梯度萃取，每種溶劑萃取3次，減壓濃縮，得到石油醚萃取物45g，氯仿萃取物34g，乙酸乙酯萃取物60g，正丁醇萃取物30g。乙酸乙酯萃取物經(jīng)反復(fù)正相硅膠柱色譜、ODS、制備 HPLC得到化合物 1(24mg)、2(31mg)、3(36mg)、4(27mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3．1 化合物1

無(wú)色針狀結(jié)晶，易溶于氯仿。HR－ESI－MS m/z:413.2658［M－H］－，推斷化合物的分子式為C29H50O，計(jì)算其不飽和度為5。

1H－NMR(400MHz，CDCl3)高場(chǎng)區(qū)顯示6個(gè)甲基信號(hào) δ 0．67(3H，s，H－18)、0．80(3H，s，H－19)、0．81(3H，d，J=6．3，H－21)、0．85(3H，d，J=6．3，H－26)、0．91(3H，d，J=6．3，H－27)、1．02(3H，d，J=6.7，H－28);δ 5．17(1H，d，J=4．3，H－7)、5．35(1H，m，H－23)處氫質(zhì)子歸屬于雙鍵上質(zhì)子信號(hào)。

在13C－NMR(100 MHz，CDCl3)中可觀察到29個(gè)碳信號(hào)，歸屬如下:

δ 37．4(C－1)、31．5(C－2)、71．7(C－3)、42．2(C－4)、140．6(C－5)、121．6(C－6)、31．8(C－7)、29．0(C－8)、50．0(C－9)、36．4(C－10)、21．0(C－11)、39．7(C－12)、42．2(C－13)、56．1(C－14)、26．1(C－15)、24．2(C－16)、56．7(C－17)、12．1(C－18)、19．3(C－19)、36．1(C－20)、19．7(C－21)、33．8(C－22)、28．2(C－23)、45．7(C－24)、29.2(C－25)、18．7(C－26)、19．1(C－27)、23.0(C－28)、11．7(C－29)。綜合以上信息與文獻(xiàn)［1］對(duì)照推斷該化合物為 β－谷甾醇，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

3．2 化合物2

白色粉末，Molish反應(yīng)呈陽(yáng)性，異羥肟酸鐵反應(yīng)呈陽(yáng)性，HR－ESI－MS m/z:341．0801［M+H］+，分子式 C15H16O9，不飽和度為 8。1H－NMR(400 MHz，CD3OD)δ:6．26(1H，d，J=9．4 Hz，H－3)，7．81(1H，d，J=9．4 Hz，H－4)，7．21(1H，s，H－5)，7.04(1H，s，H－8)，δ 4．96(1H，d，J=7．5)為葡萄糖端基質(zhì)子，δ 3．23－3．95為糖的其他質(zhì)子信號(hào);13C－NMR(100 MHz，CD3OD)δ:163．6(C－2)，114.6(C－3)，145．5(C－4)，113．8(C－5)，150．5(C－6)，149．5(C－7)，105．5(C－8)，103．2(C－1')，74．6(C－2')，77．4(C－3')，71．2(C－4')，78．4(C－5')，62．5(C－6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致［2］，故鑒定化合物2為七葉苷，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

圖1 化合物結(jié)構(gòu)式(1～4)

3．3 化合物3

淺黃色粉末，易溶于甲醇，mp:340～341℃。EI－MS m/z:271［M+H］+。鹽酸鎂粉反應(yīng)呈陽(yáng)性UV(CH3OH)λmax:266，297，337 nm;1H－NMR(500MHz，DMSO－d6)δ(ppm):6．18(1H，d，J=1.4Hz，6－H)，6．45(1H，s，8－H)，6．74(1H，s，3－H)，6．88(2H，d，J=8．4Hz，3，5－H)，7．90(2H，d，J=8．4Hz，2－H，6－H)10．55(2H，brs，7－OH，4－OH)，12．94(1H，s，5－OH);13C－NMR(400MHz，DMSO－d6)δ(ppm):162．1(C－2)，100．7(C－3)，179．6(C－4)，159．4(C－5)，96．7(C－6)，161．5(C－7)，91．8(C－8)，155．4(C－9)，101．4(C－10)，119．5(C－1')，159．3(C－4')，114．0(C－3'，5')，126．3(C－2'，6');以上波譜數(shù)據(jù)經(jīng)與文獻(xiàn)［3］比較，鑒定該化合物為芹菜素，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

3．4 化合物4

為白色粉末，mp:84～6℃;分子式為 C8H10O2，易溶于甲醇，EI－MS m/z:137［M－H］－，表示分子量為138。1H－NMR(400MHz，CD3OD)，δ(ppm):7．01(2H，d，J=8．2Hz，H－2，6)，6．69(2H，d，J=8．2Hz，H－3，5)，2．68(2H，t，J=7．1Hz，H－7)，3．66(2H，t，J=6．5，7．2Hz，H－8)。13C－NMR(100MHz，CD3OD):130．2(C－1)，130．3(C－2，6)，115．1(C－3，5)，155．5(C－4)，38．7(C－7)，63．4(C－8)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］報(bào)道的基本一致，故化合物鑒定為對(duì)羥基苯乙醇，化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

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