謝愛民，胡建明，陳 艱，孫黃濤，林 慶，陳美芳，陳梅花

江西省人民醫(yī)院心胸外科南昌330000

△男，1970年12月生，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向:心胸外科臨床，E-mail:xieaimin1998@126.com

肺癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一［1］。過去人們普遍認為，肺癌起源于支氣管上皮和肺泡上皮，但是，腫瘤干細胞理論卻提出:肺癌干細胞是肺癌發(fā)生的根源，肺癌的復發(fā)、侵襲、轉(zhuǎn)移、耐放化療、抗輻射等惡性表型特征均與之密切相關(guān)。肺癌干細胞具有自我更新和無限增殖的能力［2-3］，另外還具有很強的成瘤和耐受鉑類化療藥物的能力［4］。Wnt/β-catenin 信號通路的紊亂與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)［5］，在許多腫瘤組織中都發(fā)現(xiàn)了該通路的異常表達;最近研究還發(fā)現(xiàn)，其在維持腫瘤干細胞的特性如腫瘤干細胞的數(shù)量、耐藥性、克隆形成能力、體內(nèi)成瘤性等方面也有著重要作用［6］。SOX2 作為全能性或多能性干細胞標記物，是維持干細胞未分化狀態(tài)、增殖、不均分裂等的關(guān)鍵因子之一。近年來的文獻［7-8］報道，SOX 基因的異常表達與許多疾病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)系，尤其與許多人類腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。作者通過檢測肺癌組織中干細胞因子SOX2 及β-catenin 蛋白的表達，探討SOX2 及Wnt/β-catenin信號通路在肺癌發(fā)生中的作用機制。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取江西省人民醫(yī)院心胸外科2008年2月至2011年9月經(jīng)手術(shù)切除并經(jīng)由病理確診的肺癌患者86例，其中男52例，女34例，年齡38～75(56.7±4.5)歲。以正常開胸取得的其他疾病患者的肺正常組織20例作對照?；颊咝g(shù)前均未接受過放療和化療，肝腎功能正常，排除孕婦、哺乳期婦女、精神病患者等。標本取出后立即經(jīng)體積分數(shù)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋后封存。

1.2 主要試劑 小鼠抗人SOX2 多克隆抗體購自Santa Cruz 公司，兔抗鼠β-catenin 抗體購自上海信然生物技術(shù)有限公司;小鼠超敏免疫組化檢測試劑盒(PV-9000)購自伊萊瑞特生物科技有限公司;胎牛血清、DAB 顯色劑購自武漢御和生物技術(shù)有限公司。

1.3 標本中SOX2、β-catenin 蛋白的檢測 無菌條件下取組織蠟塊連續(xù)切片，片厚4 μm，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，體積分數(shù)3%過氧化氫溶液阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS 緩沖液洗片，以EDTA 抗原修復液高壓修復抗原，冷卻，分別滴加SOX2 一抗(稀釋度為1 ∶100)、β-catenin 一抗(稀釋度為1 ∶1 600)，37℃孵育30 min 后4℃過夜，滴加兔抗小鼠二抗，采用小鼠超敏免疫組化檢測試劑盒，室溫孵育2 h，PBS 沖洗，DAB 顯色。以PBS 代替一抗作空白對照，采用試劑公司提供的陽性組織切片作陽性對照。

1.4 結(jié)果判定 細胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒即定為陽性細胞。每張切片選取具有代表性的腫瘤區(qū)域在高倍鏡下選擇5 個以上視野，計數(shù)1 000 個腫瘤細胞，計算陽性細胞百分率，壞死區(qū)和血管內(nèi)皮細胞不計算在內(nèi)。

1.5 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0 進行統(tǒng)計分析，2組間SOX2 和β-catenin 蛋白陽性表達率的比較采用精確概率法或χ2檢驗，肺癌組織中兩種蛋白表達的關(guān)聯(lián)性用列聯(lián)系數(shù)來評估，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 肺癌及正常肺組織中SOX2 及β-catenin 蛋白的表達 SOX2 蛋白在肺癌組織中呈陽性表達，多數(shù)在細胞核表達，細胞質(zhì)也有表達;正常肺組織中未見陽性表達。β-catenin 蛋白大量表達于肺癌組織的細胞核，在正常肺組織細胞核中少量表達。見圖1、表1。

2.2 肺癌組織中SOX2 與β-catenin 蛋白表達的關(guān)聯(lián)性 肺癌組織中SOX2 與β-catenin 蛋白的表達無關(guān)聯(lián)性，見表2。

表1 2 種肺組織中SOX2、β-catenin 蛋白的表達例(%)

表2 肺癌組織中SOX2 與β-catenin 蛋白表達的關(guān)系

圖1 肺癌及正常肺組織中SOX2、β-catenin 蛋白的表達(免疫組化染色法，×400)

3 討論

Wnt/β-catenin 信號通路參與了胚胎發(fā)育、細胞增殖、細胞分化等正常生理過程［9］。Wnt 信號通路被異常激活與許多人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，包括膠質(zhì)瘤、結(jié)腸癌、乳癌、肝癌等，Wnt 信號在干細胞自我更新和增殖分化功能的保持中有著舉足輕重的作用，該信號途徑各組件突變的終點是干細胞區(qū)域的不適當擴增和其分化的子代的增殖，最終在獲得其他變異的情況下導致惡性事件的發(fā)生，形成侵襲性腫瘤細胞，是多種惡性腫瘤發(fā)生的重要原因［10］。SOX 基因是經(jīng)典Wnt 信號通路的調(diào)控因子，SOX2是SOX 家族成員之一，在維持干細胞的多能性、增殖、保持不分化狀態(tài)、細胞不均等分裂和決定細胞命運方面發(fā)揮重要作用，同時Wnt/β-catenin 信號通路還能反作用于SOX 基因［11］。

該實驗結(jié)果顯示，SOX2、β-catenin 蛋白均主要表達于細胞核。正常肺組織中無SOX2 蛋白陽性表達，而肺癌組織中SOX2 蛋白陽性表達率達95.4%，提示干細胞因子SOX2 在肺癌的發(fā)生中起重要作用。同時，β-catenin 在正常肺組織中有少量(30.0%)陽性表達，在肺癌組織中陽性表達率(75.6%)亦明顯高于正常肺組織，提示肺癌組織中Wnt/β-catenin 信號通路處于異常激活狀態(tài)，其異常表達與肺癌的發(fā)生有密切關(guān)系。結(jié)果還顯示，肺癌組織中SOX2 與β-catenin 的表達并未表現(xiàn)出明顯的關(guān)聯(lián)。這可能是因為實驗僅測定了肺癌組織中SOX2 與β-catenin 蛋白表達的情況，尚未進行mRNA 表達的檢測，二者mRNA 表達水平是否有相關(guān)性尚需要研究;另外由于影響肺癌發(fā)生的基因、蛋白及信號通路十分復雜，Wnt/β-catenin 信號通路是否通過其他基因或通路作用于SOX2 基因，從而參與肺癌的發(fā)生發(fā)展，將是下一步研究的目標。

綜上所述，SOX2 和Wnt/β-catenin 信號通路在肺癌的發(fā)生過程中發(fā)揮了重要作用，該結(jié)果為肺癌的臨床治療提供了新的研究方向。

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