徐天嬌 何寧 周麗 洪博 李曉明

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥科學(xué)研究中心 黑龍江齊齊哈爾 161006)

莪術(shù)(curcuma)為蓬莪術(shù)、溫莪術(shù)或廣西莪術(shù)的根莖,莪術(shù)醇是中藥莪術(shù)的提取物莪術(shù)油中的主要成分,具有抗腫瘤、抗病毒、抗血栓等作用。研究發(fā)現(xiàn),莪術(shù)醇在體外可明顯抑制人胃癌細(xì)胞SGC-7901細(xì)胞,宮頸癌HeLa細(xì)胞,肝癌HepG2細(xì)胞等。本研究意在探討莪術(shù)醇對人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖及凋亡作用的影響。

1 材料

(1)細(xì)胞株。人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞株購于中國科學(xué)院細(xì)胞庫。(2)藥物與試劑。莪術(shù)醇標(biāo)準(zhǔn)品購于上海純優(yōu)科技有限公司,MTT、二甲基亞砜購于sigma公司,胎牛血清購于HYCLONE公司,AnnexinV-FITC細(xì)胞凋亡試劑盒購于南京凱基生物科技發(fā)展有限公司。

2 方法

圖1 MTT檢測莪術(shù)醇對U251細(xì)胞增殖的影響

圖2 莪術(shù)醇對U251細(xì)胞凋亡的影響

(1)細(xì)胞培養(yǎng)。U251接種于50ml培養(yǎng)瓶內(nèi),在含10%FCS DMEM培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng),待細(xì)胞長到80%后,常規(guī)消化細(xì)胞,1:4傳遞,取對數(shù)生長期細(xì)胞進(jìn)行實驗。(2)MTT法檢測對U251細(xì)胞增殖的影響。將U251接種于96孔板待貼壁后加入莪術(shù)醇使終濃度分別為12.5、25、50、100μg/ml,同時設(shè)空白對照和調(diào)零孔,繼續(xù)培養(yǎng)24h后,加入MTT(5mg/ml)20μl/孔,繼續(xù)培養(yǎng)4h,棄去培養(yǎng)液,加入150μl DMSO,混勻,10min后在酶聯(lián)免疫檢測儀波長490nm處讀數(shù)。(3)流式細(xì)胞術(shù)檢測對U251細(xì)胞凋亡的影響。將U251接種于6孔板待細(xì)胞貼壁后,加入莪術(shù)醇使終濃度分別為12.5、25、50、100μg/ml,對照組不加藥。培養(yǎng)24h后用不含EDTA的胰酶消化收集,PBS 洗滌2次,收集細(xì)胞,加入500μl Binding Buffer重懸細(xì)胞,然后先后避光加入5μL Annexin V-FITC和5μL Propidium Iodide,混勻,避光反應(yīng)10min,流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。(4)統(tǒng)計學(xué)分析。所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,采用SPSS 13.0專用數(shù)理統(tǒng)計分析軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析極顯著性檢驗(P＜0.05)。

3 結(jié)果

3.1 莪術(shù)醇對U251細(xì)胞增殖的影響

用MTT法檢測莪術(shù)醇對U251細(xì)胞增殖的影響,結(jié)果顯示,不同濃度的莪術(shù)醇(12.5、25、50、100μg/ml)與對照組相比較均有顯著性差異(P＜0.05),表明莪術(shù)醇對U251細(xì)胞具有不同程度的抑制作用,并成濃度依賴性。(見圖1)

3.2 莪術(shù)醇對U251細(xì)胞凋亡的影響

用流式細(xì)胞儀檢測莪術(shù)醇對U251細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果顯示,不同濃度的莪術(shù)醇(12.5、25、50、100μg/ml)凋亡率較對照組明顯升高,具有顯著性差異(P＜0.05),表明莪術(shù)醇能夠誘導(dǎo)U251細(xì)胞凋亡。(見圖2)

4 討論

膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)原發(fā)性腫瘤,發(fā)病率約占顱內(nèi)原發(fā)腫瘤的50%,其中以腦惡性膠質(zhì)瘤最為突出,生存率不到10%。由于其具有多質(zhì)性和浸潤性,臨床上手術(shù)、放療、化療等綜合治療只能延長患者生命并不能徹底根治,臨床迫切需要尋找新的治療方法。

莪術(shù)醇是中藥莪術(shù)的提取物莪術(shù)油中的主要成分,具有抗腫瘤、抗病毒、抗血栓、抑制細(xì)胞的增殖、促進(jìn)細(xì)胞的凋亡;抑制血管生成;抑制細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移等。近來研究表明莪術(shù)醇對胃癌、白血病、婦科腫瘤、肝癌和肺癌等均具有作用。

本研究利用MTT法和流式細(xì)胞檢測法檢測莪術(shù)醇對人腦膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的增殖及凋亡作用的影響,結(jié)果顯示,莪術(shù)醇具有抑制U251細(xì)胞增殖和促進(jìn)U251細(xì)胞凋亡的作用,為研制有效的治療膠質(zhì)瘤的藥物提供了實驗基礎(chǔ)。