梁奇峰，吳適濤

（嘉應學院化學與環(huán)境學院，廣東梅州514015）

維生素 C（VC）又名抗壞血酸（ascorbic acid），是一種重要的營養(yǎng)物質和藥物，具有防止壞血病、預防心血管病等生理功能。VC廣泛存在于新鮮水果、蔬菜中，測定VC的含量具有實際意義。目前，VC含量的測定方法較多，主要有碘量法[1-2]、分光光度法[3-5]、電位滴定法[6]、高效液相色譜法[7]等。

本文利用Fe（Ⅲ）-磺基水楊酸體系褪色光度法，測定了梅縣沙田柚果肉中VC的含量。該法的測定原理是磺基水楊酸與Fe3+在pH為2～3生成1∶1的紫紅色的穩(wěn)定配合物，加入VC后，將Fe3+還原成Fe2+，使溶液中Fe3+的濃度減少，紫紅色配合物的濃度隨之減少，溶液褪色，用分光光度計測定溶液反應前后吸光度分別記為A0、A，其吸光度變化為ΔA=A0-A，吸光度差ΔA與VC濃度在一定的濃度范圍內呈良好的線性關系，據(jù)此可以進行樣品中VC含量的測定[5]。該法操作方便，測定靈敏度高，測定結果與碘量法接近，可以推廣應用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

722sp型可見分光光度計：上海棱光技術有限公司；AE系列電子天平：梅特勒-托利多儀器上海有限公司；800B離心機：上海安亭科學儀器廠制造。

抗壞血酸：天津市福晨化學試劑工廠；磺基水楊酸、高氯酸：廣州化學試劑廠；鐵銨礬[NH4Fe（SO4）2·12H2O]：廣東光華化學有限公司；以上試劑均為分析純。

抗壞血酸標準溶液（500μg/mL）：準確稱取0.0500 g抗壞血酸于50 mL燒杯中，用12 mL 10%的鹽酸溶液溶解，再轉移到100 mL棕色容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻備用。Fe3+標準溶液（0.01 mol/L)：準確稱取1. 2055 g鐵銨礬[NH4Fe（SO4）2.12H2O]于 50 mL 的燒杯中，加入10.00 mL 6 mol/L的鹽酸，水浴加熱溶解，轉移到250 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，搖勻備用?；腔畻钏崛芤海?.01 mol/L)：準確稱取1. 0910 g磺基水楊酸于50 mL的燒杯中，加適量蒸餾水溶解，轉移至500 mL的容量瓶中，搖勻備用。高氯酸溶液（0.1 mol/L）：準確量取2.10 mL高氯酸于250 mL容量瓶中，用蒸餾水定容至，搖勻備用。

1.2 樣品來源及樣品溶液的配制

1.2.1 樣品來源

實驗所用梅縣沙田柚均直接購自當?shù)厮l(fā)市場。

1.2.2 樣品溶液的配制

選擇保存較好的沙田柚，剝皮去核，將果肉混勻，稱取適量果肉樣品（質量25 g左右）于研缽中，加入10 mL 10%的鹽酸，迅速研磨成漿，用蒸餾水洗滌研缽，將漿狀樣品和洗滌液一并移入250 mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，充分混合后離心15 min，取上清液作測定用。

1.3 測定方法

分別取Fe3+標準溶液1.00 mL，磺基水楊酸溶液5.00 mL，高氯酸溶液2.00 mL于2個50 mL容量瓶中，其中一個容量瓶再準確加入一定體積的抗壞血酸標準溶液或柚肉樣品溶液，定容，搖勻。20 min后，以二次蒸餾水為空白，用1 cm比色皿，在502 nm波長下測定兩份溶液的吸光度分別為A0和A，吸光度差ΔA=A0－A，繪制ΔA與加入的抗壞血酸的濃度標準工作曲線，并測定出沙田柚果肉中VC的含量。

2 結果與討論

2.1 測定波長的選擇

按照1.3方法，測定Fe（Ⅲ）－磺基水楊酸體系在400 nm～750 nm范圍的吸收曲線，如圖1所示，確定最大吸收波長為502 nm，故選擇該波長為測定波長。

2.2 酸度的選擇

圖1 Fe（Ⅲ）－磺基水楊酸體系吸收曲線Fig.1 Absorption curve of Iron（Ⅲ）-sulfosalicylic acid system

磺基水楊酸-鐵（Ⅲ）體系在強酸性條件下呈紫紅色，在pH為2～3的溶液中，F(xiàn)e3+離子與磺基水楊酸發(fā)生顯色反應，生成的1∶1的紫紅色穩(wěn)定配合物；pH為4～9時，生成1∶2的紅色螯合物；pH為9～11.5時，生成1∶3的黃色螯合物；pH大于12時，有色螯合物將被破壞而生成Fe（OH）3沉淀[5]。同時VC在中性或者堿性條件下易被氧化分解。為了保證顯色體系較高的靈敏性和實驗的準確性，溶液保持強酸性，故用0.1 mol/L高氯酸溶液調節(jié)溶液pH為2～3。

2.3 高氯酸溶液用量的選擇

按照1.3方法，改變高氯酸溶液的體積，測定反應體系的吸光度變化值ΔA，繪制ΔA～V（高氯酸）的吸收曲線如圖2。

圖2 高氯酸溶液用量的選擇Fig.2 Choice of perchloric acid volume

從圖2可知，當加入2.00 mL高氯酸溶液時ΔA達到最大值，故高氯酸溶液用量為2.00 mL。

2.4 Fe（Ⅲ）標準溶液用量的選擇

按照1.3方法，改變Fe3+標準溶液體積，測定反應體系的吸光度變化值ΔA，繪制ΔA～V（Fe3+溶液）的吸收曲線如圖3所示。

從圖3可知，當加入1.00 mL Fe3+標準溶液時ΔA最大，隨后ΔA隨Fe3+溶液體積增加變化不大，故Fe3+標準溶液用量為1.00 mL。

2.5 磺基水楊酸溶液用量的選擇

按照1.3方法，改變磺基水楊酸溶液的體積，測定反應體系的吸光度變化值ΔA，繪制ΔA～V（磺基水楊酸）的吸收曲線如圖4所示。

圖3 Fe（Ⅲ）標準溶液用量的選擇Fig.3 Choice of Fe（Ⅲ）volume

圖4 磺基水楊酸溶液用量的選擇Fig.4 Choice of sulfosalicylic acid volume

從圖4可知，當加入5.00 mL磺基水楊酸時ΔA值較大，隨著磺基水楊酸的量的增加ΔA變化不大，故磺基水楊酸溶液的用量為5.00 mL。

2.6 穩(wěn)定性

按照實驗方法，在室溫下測定反應體系在不同時間的吸光度變化值ΔA與反應時間t的關系如圖5所示。

圖5 反應時間的選擇Fig.5 Choice of reaction time

由圖5可知，體系在30 min～60 min內ΔA基本不變，故本實驗選擇反應時間為30 min即可。

2.7 標準工作曲線

按照實驗方法，在Fe（Ⅲ）－磺基水楊酸體系中準確加入不同體積的抗壞血酸標準溶液，測定反應前后吸光度變化值ΔA，并繪制ΔA～CVc標準工作曲線如圖6所示。

圖6 標準工作曲線Fig.6 Standard working curve

從圖 6 可知，在質量濃度為 4 μg/mL～37 μg/mL 范圍內，吸光度之差ΔA（y）與抗壞血酸濃度CVc（x）呈較好的線性關系，其線性回歸方程為y=0. 0182x+0. 0271，相關系數(shù) r=0. 9996。

連續(xù)測定空白溶液吸光度11次，測定相對標準偏差σ=0.005。取置信系數(shù)k=3，按上述線性回歸方程，其斜率S=0. 0182 mL/μg，則該方法檢出限D為0.824 μg/mL（D=kσ/S）。

2.8 沙田柚果肉中VC含量的測定

準確移取5.00 mL沙田柚果肉樣品溶液于25 mL容量瓶中，按照實驗方法，測定體系吸光度的變化值ΔA，從標準曲線中求出相對應的VC含量，計算出沙田柚果肉中VC的含量。平行測定5次，結果與碘量法對比見表1。

分別準確移取處理好的沙田柚果肉樣品溶液5.00 mL于5個25 mL容量瓶中，加入1.00 mL抗壞血酸標準溶液后，按照上述實驗方法，測定加標回收率，結果見表1。

表1 梅縣沙田柚果肉中VC含量的測定（n=5）Table 1 Determination results of Vitermin C in Shatian pomelo pulp and recoveries of the method（n=5）

3 結論

對Fe（Ⅲ）-磺基水楊酸體系褪色光度法測定VC含量的實驗條件進行了優(yōu)化，利用該法測得梅縣沙田柚果肉VC的含量為97.92 mg/100 g，測定相對標準偏差為1.1%，測定回收率為95.6%～98.9%（n=5）。該法方法簡單易行，測定結果與碘量法相近。

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