金傳山，張 偉，桂雙英，彭代銀，吳德玲，黃 力，李保明

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽省現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥 230031;2.亳州職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，安徽亳州 236800;3.安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司，安徽亳州 236800)

桔梗為桔?？浦参锝酃?Platycodon grandiflorum)的干燥根［1］，味苦、辛，性平，歸肺經(jīng)，可宣肺利咽，祛痰排膿，臨床上主要用于治療咳嗽痰多，胸悶不暢，咽痛聲啞，肺癰吐膿。桔梗作為藥食兩用植物在全國(guó)各地廣泛分布，是部分省區(qū)的重要經(jīng)濟(jì)植物，在內(nèi)蒙赤峰，安徽太和、亳州，山東淄博等地廣泛栽培。桔梗的化學(xué)成分研究始于20世紀(jì)初，主要包括五環(huán)三萜類的多糖苷［2］和菊糖型多聚糖類［3］等成分。目前，《中國(guó)藥典》2010版中僅以桔梗皂苷D含量高低作為判斷桔梗藥材質(zhì)量的優(yōu)劣標(biāo)準(zhǔn)，而中藥的療效是多種成分協(xié)同作用的結(jié)果，因此選擇一種活性成分進(jìn)行含量分析不足以全面、客觀、真實(shí)地反映藥材質(zhì)量。本研究參照2010年版《中國(guó)藥典》的標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)結(jié)合桔梗多糖的含量測(cè)定［4］，在進(jìn)行桔梗主產(chǎn)區(qū)調(diào)查的基礎(chǔ)上，對(duì)目前不同主產(chǎn)區(qū)的桔梗質(zhì)量進(jìn)行分析。

1 儀器、試藥與實(shí)驗(yàn)藥材

1.1 儀器 島津LC-15C型高效液相色譜(LC-15C泵、SPD-15C紫外檢測(cè)器、DT-230A型柱溫箱、LC Solution-15C色譜工作站)，WL-100型打粉機(jī)(威力制藥機(jī)械廠)，UV-757CRT紫外可見分光光度計(jì)(上海精科);CP225D型十萬分之一電子天平(德國(guó)Sartorius公司);HHS111-2型電熱恒溫水浴鍋(北京長(zhǎng)安科學(xué)儀器廠);R-205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申勝生物科技有限公司)等。

1.2 試藥 甲醇(色譜純，天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)、乙腈(色譜純，F(xiàn)isher公司);水為Milli-Q超純水;濃硫酸(上海蘇懿化學(xué)試劑有限公司);鹽酸，香草醛(北京化學(xué)試劑有限公司)、磷酸二氫鉀、磷酸(上海市試劑一廠綜合經(jīng)營(yíng)公司)等均為分析純。桔梗皂苷D(成都普思生物科技有限公司，批號(hào):20080723)。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥材 藥材采集后清洗去除泥沙，用玻璃片刮去根皮后攤曬，晾曬至一定程度后切圓片，曬干，即得桔梗樣品，藥材經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與利用教研室劉守金教授鑒定為桔?？浦参锝酃latycodon grandiflorum。樣品信息見表1。

表1 桔梗樣品來源

2 方法與結(jié)果

2.1 桔梗皂苷D的含量測(cè)定［5］

2.1.1 色譜條件 采用 Alltima C18(4.6 mm ×250 mm，5 μm)色譜柱，流動(dòng)相為乙腈—0.02 mol·L－1磷酸二氫鉀緩沖溶液(用磷酸調(diào) pH為3.0，30∶70)，流速 0.7 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng) 210 nm，柱溫35℃，進(jìn)樣量 20 μL 。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在五氧化二磷減壓干燥器中干燥36 h的桔梗皂苷 D對(duì)照品2.60 mg，置10 mL量瓶中，用不加緩沖鹽和磷酸的流動(dòng)相溶解并定容至刻度，以0.22 μm微孔濾膜濾過即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取各桔梗樣品粉末(過80目篩)約0.5 g，精密稱定，置25 mL量瓶中，加入不含緩沖鹽和磷酸的流動(dòng)相至近刻度，在功率500 W下超聲30 min，放冷，用流動(dòng)相定容至刻度，搖勻，過微孔濾膜(0.22 μm)，取續(xù)濾液，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取上述桔梗皂苷D對(duì)照品溶液 4、8、12、16、20 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣，以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為:Y=294 001X+160 319，r=0.999 6。結(jié)果表明桔梗中桔梗皂苷D在1.44 ～7.20 μg范圍內(nèi)線性范圍良好。

2.1.5 樣品含量測(cè)定 取“2.1.3”項(xiàng)下方法制成的樣品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液和樣品溶液各20 μL，按上述色譜條件測(cè)定，外標(biāo)一點(diǎn)法，以干燥品計(jì)算樣品中的桔梗皂苷 D含量，結(jié)果見表2，圖1。

2.2 桔梗多糖的含量測(cè)定［6］

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精確稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品12.91 mg，置于100 mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得葡萄糖 0.129 1 g·L－1的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

圖1 桔梗HPLC色譜圖

2.2.2 供試樣品的制備 稱取各樣品約0.5 g，精密稱定，放入置圓底燒瓶中，精密加蒸餾水50 mL，稱定重量，靜置30 min，沸水浴回流1 h，放冷稱定，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液10 mL蒸干，加2 mL水分次溶解，加10 mL無水乙醇放置24 h，抽濾，沉淀用85%乙醇洗滌3次，沉淀用水溶解定容至50 mL量瓶，搖勻，即得各個(gè)不同產(chǎn)地的供試品溶液。

2.2.3 線性關(guān)系的考察 分別精確移取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL 于具塞試管中，再分別依次加入 0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3 mL蒸餾水，每管加入5%苯酚溶液1 mL，迅速滴加濃硫酸5 mL，立即搖勻，放置5 min，置沸水浴中加熱10 min，迅速冷卻至室溫，同法以1 mL蒸餾水作空白對(duì)照，于486 nm處測(cè)吸光度。以吸光度(A)對(duì)葡萄糖質(zhì)量濃度(C)作回歸處理，得回歸方程Y=0.079 1C －0.007 7，r=0.999 2。結(jié)果表明桔梗中桔梗多糖在0.025 82 ～0.090 37 μg 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.4 樣品含量測(cè)定 取2.2.2”項(xiàng)下方法法制成的樣品溶液，分別精密吸取樣品溶液和葡萄糖對(duì)照品液于10 mL具塞試管中，各補(bǔ)加蒸餾水至1 mL，加5%苯酚1 mL，濃硫酸5 mL，搖勻，放置5 min后水浴加熱10 min，放冷后測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品多糖含量，結(jié)果見表2，圖2。

表2 不同產(chǎn)地桔梗桔梗皂苷D和桔梗多糖的含量測(cè)定結(jié)果

圖2 紫外掃描圖

3 討論與分析

各主產(chǎn)地桔梗藥材中桔梗皂苷D含量均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。山東產(chǎn)桔梗在總皂苷含量上高于內(nèi)蒙和安徽產(chǎn)桔梗，而內(nèi)蒙產(chǎn)桔梗在多糖含量上則在整體上優(yōu)于安徽和山東產(chǎn)桔梗，不同產(chǎn)地桔梗中的分布趨勢(shì)顯示出桔梗皂苷D含量高，多糖含量低，而當(dāng)總皂苷含量低時(shí)，多糖含量則升高。

現(xiàn)代藥理研究表明，桔梗皂苷D為桔梗中鎮(zhèn)咳活性成分之一［7］，桔梗多糖對(duì)特異性和非特異性免疫都具有一定的調(diào)節(jié)作用。桔梗中主要成分與其藥效相關(guān)性研究并不多，如何用成分來有效控制桔梗藥材及其加工品的質(zhì)量仍是需待解決的問題，若采用單一指標(biāo)進(jìn)行藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)，則會(huì)產(chǎn)生偏頗，而通過多指標(biāo)評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地的桔梗藥材質(zhì)量，可以為桔梗藥材的選用提供依據(jù)。

不同產(chǎn)區(qū)的桔梗外觀形狀差異明顯，在樣品處理過程中發(fā)現(xiàn)，內(nèi)蒙產(chǎn)桔梗主根順直切片干燥后片型美觀，且碎屑較少，而產(chǎn)于安徽和山東的桔梗藥材由于主根分叉較多，切片后細(xì)小側(cè)根干燥形成大量碎屑，影響藥材品相，因此在商品規(guī)格上內(nèi)蒙產(chǎn)桔梗優(yōu)于其他產(chǎn)地。

致謝:本研究得到美國(guó)許氏基金會(huì)的支持。

［1］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:259－260.

［2］ 李喜鳳，杜云鋒，謝新年，等.不同產(chǎn)地桔梗藥材HPLC指紋圖譜及桔梗皂苷D 含量測(cè)定研究［J］.中成藥，2010，32(4):529－532.

［3］ 賈 林，陸金健，盧德趙，等.桔梗多糖的分離純化與含量測(cè)定［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2011，27(17):83 －86.

［4］ 金傳山，黃 力，李素亮.桔梗雙飛片產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)工藝研究［J］.中藥材，2011，34(6):968 －971.

［5］ 黃 力，金傳山，吳德玲.不同干燥方法對(duì)桔梗中桔梗皂苷 D含量的影響［J］.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，29(3):69 －71.

［6］ 黃 力.桔梗雙飛片工藝及質(zhì)量研究［D］.合肥:安徽中醫(yī)學(xué)院，2010:30－35.

［7］ 張艷艷，王舉濤，桂雙英.桔梗邊角料中桔?？傇碥仗崛」に囇芯浚跩］.安徽醫(yī)藥，2012，16(4):442 －443.