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        可見分光光度法測定惠州梅菜中亞硝酸鹽含量的方法

        2014-12-11 22:33:02吳云普梁曉文潘錦秀彭少娜鐘程
        天津農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年12期
        關(guān)鍵詞:分光光度法亞硝酸鹽

        吳云普 梁曉文 潘錦秀 彭少娜 鐘程 曾柏榮

        摘 要:通過對國標(biāo)《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》(GB/T 5009.33—2010)第二法進行研究和優(yōu)化,建立了惠州梅菜中亞硝酸鹽的檢測方法。研究表明:亞硝酸鹽含量x(μg)與吸光度A在538 nm處具有良好的線性關(guān)系,在亞硝酸鹽的量為0~10 μg·(50 mL)-1水溶液中,服從Beer定律, y = 46.708x-0.024,相關(guān)系數(shù)為0.999 9。蛋白質(zhì)沉淀劑的使用量對惠州梅菜中亞硝酸鹽含量測定有一定影響,添加量為2~3.5 mL時,回收率在98.8%~103%之間,回收效率較理想。沉淀劑添加量為2.5 mL時,進行方法加標(biāo)回收試驗,平均加標(biāo)回收率在98.8%~98.9%之間,RSD在1.03%~4.70%之間。

        關(guān)鍵詞:惠州梅菜;亞硝酸鹽;分光光度法

        中圖分類號:S636.9 文獻標(biāo)識碼:A DOI 編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2014.12.004

        梅菜是惠州市八大特色產(chǎn)品之一,在惠州已有近400年的種植歷史,歷史上作為宮廷食品而被稱為“惠州貢菜”。目前惠州市有近30個鄉(xiāng)鎮(zhèn)種植梅菜,總產(chǎn)量大于75 000 t,年產(chǎn)值已達2億元。梅菜更成為惠州多個鄉(xiāng)鎮(zhèn)如矮陂鎮(zhèn)的“一鎮(zhèn)一業(yè)”的特色品種。惠州梅菜是一種著名的廣東傳統(tǒng)腌制蔬菜食品,蔬菜易富集硝酸鹽,在腌制過程中,由于有害微生物及硝酸還原酶的作用,硝酸鹽會轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽,人攝入后,亞硝酸能和人胃中的含氮化合物(仲胺、叔胺、酰胺及氨基酸)結(jié)合成具致癌性的亞硝基化合物[1]。

        目前,食品中亞硝酸鹽的檢測方法主要有分光光度法[2-5]、熒光光度法[6]、動力學(xué)光度法[7]、離子色譜法[8]、高效液相色譜法[9]等。在這幾種方法中,分光光度法因儀器設(shè)備簡單、價廉、操作簡單,而被許多試驗采用。通常以GB/T 5009.33—2010《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》第二法作為參考進行測定,利用亞硝酸鹽重氮化后與鹽酸萘乙二胺生成紫紅色偶氮染料,顏色的深淺與亞硝酸含量成正比(符合朗伯比爾定律),可用分光光度計直接進行比色測定。本試驗對分光光度法測定惠州梅菜中亞硝酸鹽的含量進行了優(yōu)化研究。

        1 材料和方法

        1.1 原材料

        測定用梅菜樣品購自惠州本地市場。

        1.2 試驗試劑

        200 μg·mL-1亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液,5 μg·mL-1亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用溶液,106 g·L-1亞鐵氰化鉀溶液,220 g·L-1乙酸鋅溶液,50 g·L-1飽和硼酸溶液,4 g·L-1對氨基苯磺酸溶液,2 g·L-1鹽酸萘乙二胺溶液。

        1.3 儀器設(shè)備

        紫外/可見分光光度計,上海美譜達儀器有限公司;TE412-L電子天平,賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司。

        1.4 試驗方法

        1.4.1 樣品預(yù)處理 用組織搗碎機把梅菜制成勻漿備用。

        1.4.2 提取凈化 稱取5 g(精確到0.01 g)制成勻漿的試樣,置于50 mL燒杯中,加入12.5 mL飽和硼砂溶液,攪拌均勻,用約250 mL的70 ℃水將試樣吸入500 mL的容量瓶中,放置10 min提取,然后振蕩上述溶液,加入一定量的亞鐵氰化鉀溶液、搖勻,再加入相同量的乙酸鋅溶液,以沉淀蛋白質(zhì),加水至刻度后搖勻、放置30 min,用濾紙過濾,棄去初濾液30 mL,濾液備用。

        1.4.3 亞硝酸鹽的測定 吸取40.0 mL上述濾液于50 mL帶塞比色管中,另吸取0.00,0.08,0.16, 0.24,0.32,0.64,1.0,1.5,2.0 mL亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0.0,0.4,0.8,1.2,1.6,3.2,5.0,7.5, 10.0 μg亞硝酸鈉),分別置于50 mL帶塞比色管中。于標(biāo)準(zhǔn)管與試樣管中分別加入2 mL對氨基苯磺酸溶液混勻,靜置3~5 min后各加入1 mL鹽酸萘乙二胺溶液,加水至50 mL刻度線,混勻,靜置15 min。用1 cm比色杯,以零管調(diào)節(jié)零點,于波長538 nm處測吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線比較、定量。同時做試劑空白。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)曲線

        亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液所測得的吸光度如表1。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)亞硝酸鈉含量及吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,從圖1可以看出,亞硝酸鈉含量與吸光度的線性關(guān)系很好,相關(guān)系數(shù)達到了0.999 9,直線方程為y = 46.708x-0.024,其中x為亞硝酸鹽的量(μg),y為吸光度A。

        2.2 樣品測定條件的選擇

        GB 5009.33—2010方法中加入蛋白質(zhì)沉淀劑為:5 mL亞鐵氰化鉀溶液和5 mL乙酸鋅溶液。本試驗對蛋白質(zhì)沉淀劑的加入量進行優(yōu)化,分別以蛋白質(zhì)沉淀劑的量為0,1,2,2.5,3.5,5 mL進行平行及加標(biāo)回收試驗,測定的亞硝酸鹽含量如表2。

        由表2可見,加入不同量的蛋白質(zhì)沉淀劑,所測得的亞硝酸鹽的含量不同,樣品中測得值都小于檢出限1 mg·kg-1,添加回收率結(jié)果也不同,添加量為2~3.5 mL時,回收率在98.8%~103%之間,回收效率比較理想。沉淀劑的量增加到5 mL時,回收率反而下降。

        2.3 方法加標(biāo)回收試驗

        按照1.4.2介紹的試驗方法,蛋白質(zhì)沉淀劑的量為2.5 mL,為進一步驗證方法的可靠性,進行加標(biāo)回收試驗,選取3個濃度,分別為1.0、10.0、20.0 mg·kg-1,按相同的方法和條件平行測定10次。由表3可知,3個濃度點的加標(biāo)平均回收率在98.8%~98.9%之間,RSD在1.03%~4.70%之間,這說明方法具有較好的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性。

        2.4 惠州梅菜中亞硝酸鹽含量測定

        按照1.4.2介紹的試驗方法,蛋白質(zhì)沉淀劑的量為2.5 mL,對惠州梅菜樣品進行平行測定3次,取得算術(shù)平均值。以我國國標(biāo)食品中污染物限量中規(guī)定腌制蔬菜中亞硝酸鹽的含量(以NaNO2)不得超過20 mg·kg-1 [10]計,由表4可知,本實驗室所收集的10份惠州梅菜樣品均未超標(biāo),可以放心食用。

        3 結(jié) 論

        本試驗通過對國標(biāo)《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》(GB/T 5009.33—2010)第二法進行優(yōu)化發(fā)現(xiàn),加入不同量的蛋白質(zhì)沉淀劑對梅菜中亞硝酸鹽的檢測結(jié)果有一定影響,蛋白質(zhì)沉淀劑添加量為2.5 mL時,回收率在98.8%~98.9%之間,RSD在1.03%~4.70%之間,方法的加標(biāo)回收試驗效果較好。本試驗確立了惠州梅菜中亞硝酸鹽含量的檢測方法,該方法操作簡單、快速、精密度好,樣品處理簡單易行,可在惠州地區(qū)對梅菜中亞硝酸鹽含量測定中推廣應(yīng)用。

        參考文獻:

        [1] 彭衛(wèi)芳,凌志明,王學(xué)濤,等.亞硝酸鹽測定方法的研究進展[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2007,17(8):1535-1536.

        [2] 郝桂霞,楊曉斌.潮州醬腌菜中硝酸鹽及亞硝酸鹽含量的測定[J].現(xiàn)代食品科技,2007,23(7):86-88.

        [3] 鄭澤璇,鄭澤紅,陳樹干,等. 深圳市羅湖區(qū)市售鹽腌菜中亞硝酸鹽含量分析[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2006,33(6):987-988.

        [4] 劉廣福,王碩,孫蕊,等. 分光光度法同時測定肉制品中的硝酸鹽和亞硝酸鹽[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,41(20):8 706-8 707,8 781.

        [5] 周秀清,黃明華. 蛋白質(zhì)沉淀劑用量對亞硝酸鹽含量測定的影響[J]. 鹽業(yè)與化工,2013,42(4):9-11.

        [6] 黃克靖,孫俊永,吳瑩瑩.熒光光度法結(jié)合固相萃取測定亞硝酸鹽[J].信陽師范學(xué)院學(xué)報:自然科學(xué)版,2012 ,25(1):99-102.

        [7] 邢建華,信建豪,張守仁,等.催化動力學(xué)光度法測定肉制品中痕量亞硝酸鹽[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,52 (21):5311-5313.

        [8] 王碩,劉廣福,孫蕊,等.離子色譜法測定肉制品中的硝酸鹽和亞硝酸鹽[J].食品科技,2014,19(2):302-305.

        [9] 張秋菊,崔世勇,姜麗華,等.反相高效液相色譜法同時測定醬腌菜中亞硝酸鹽和硝酸鹽[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2008,18(7):1304-1305,1323.

        [10] 中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2762—2012 食品中污染物限量[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2012.

        [11] 中華人民共和國衛(wèi)生部.GB/T 5009.33—2010 食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2010.

        3 結(jié) 論

        本試驗通過對國標(biāo)《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》(GB/T 5009.33—2010)第二法進行優(yōu)化發(fā)現(xiàn),加入不同量的蛋白質(zhì)沉淀劑對梅菜中亞硝酸鹽的檢測結(jié)果有一定影響,蛋白質(zhì)沉淀劑添加量為2.5 mL時,回收率在98.8%~98.9%之間,RSD在1.03%~4.70%之間,方法的加標(biāo)回收試驗效果較好。本試驗確立了惠州梅菜中亞硝酸鹽含量的檢測方法,該方法操作簡單、快速、精密度好,樣品處理簡單易行,可在惠州地區(qū)對梅菜中亞硝酸鹽含量測定中推廣應(yīng)用。

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        3 結(jié) 論

        本試驗通過對國標(biāo)《食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定》(GB/T 5009.33—2010)第二法進行優(yōu)化發(fā)現(xiàn),加入不同量的蛋白質(zhì)沉淀劑對梅菜中亞硝酸鹽的檢測結(jié)果有一定影響,蛋白質(zhì)沉淀劑添加量為2.5 mL時,回收率在98.8%~98.9%之間,RSD在1.03%~4.70%之間,方法的加標(biāo)回收試驗效果較好。本試驗確立了惠州梅菜中亞硝酸鹽含量的檢測方法,該方法操作簡單、快速、精密度好,樣品處理簡單易行,可在惠州地區(qū)對梅菜中亞硝酸鹽含量測定中推廣應(yīng)用。

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