孫 弢，姚宇鋒，龔建平，秦建偉，唐金海

(1.滁州市第一人民醫(yī)院普外科，安徽 滁州239000;2.江蘇省腫瘤醫(yī)院普外科，江蘇 南京210009)

E-鈣黏蛋白(E-cadherin，E-cad)是一種細(xì)胞黏附分子，具有維持組織結(jié)構(gòu)的完整性等作用，其在乳腺癌組織中表達(dá)降低甚至缺失［1］，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用［2］，作者回顧性分析本院經(jīng)手術(shù)病理確診的147 例三陰性乳腺癌(triple negative breast cancer，TNBC)患者的臨床病理資料，探討E-cad 在TNBC 組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇我院2006年1月至2010年12月收治的TNBC 患者147 例，均為女性，中位年齡49(22 ～73)歲。所有患者均為初診可手術(shù)患者并經(jīng)術(shù)后病理確診為浸潤性乳腺癌，免疫組化檢測確診為ER、PR 和HER-2 的表達(dá)均為陰性。其中浸潤性導(dǎo)管癌127 例，浸潤性小葉癌12 例，其他類型8 例。術(shù)后病理學(xué)分期:I期81 例，Ⅱ期40 例，Ⅲ期26 例。所有病例術(shù)后均參照NCCN 指南進(jìn)行規(guī)范化的化療、放療等綜合治療。

1.2 免疫組化染色 采用Envision 兩步法完成免疫組化染色，檢測ER、PR、HER-2 和E-cad 的表達(dá)情況。組織經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%甲醛固定、石蠟包埋，4 μm 連續(xù)切片，0.01 mmol·L-1枸櫞酸鹽(pH 6.0)抗原修復(fù)液中微波修復(fù)15 min，按試劑盒要求步驟進(jìn)行操作。用已知陽性標(biāo)本作為陽性對照，以PBS 代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 ER、PR 陽性定位于細(xì)胞核，E-cad、HER-2 陽性定位于細(xì)胞膜。陽性百分率采用計(jì)數(shù)估計(jì)半定量判斷標(biāo)準(zhǔn)，即選取5 個(gè)不同高倍鏡視野，計(jì)數(shù)500 個(gè)細(xì)胞，計(jì)算出其中陽性細(xì)胞數(shù)的百分率。ER、PR、E-cad 陽性細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性，＜10%為陰性;HER-2 陽性細(xì)胞數(shù)＜10% 為(- )，10% ～25% 為(+)，26% ～50%為(++)，＞50%為(+++)，(-)和(+)為陰性，(++)和(+++)為陽性。

1.4 隨訪 所有患者接受定期隨訪復(fù)查，復(fù)查包括臨床體檢、腫瘤標(biāo)志物檢測、影像學(xué)檢查等，隨訪至患者死亡或截至2011年12月，隨訪時(shí)間以月為單位?；颊邿o病生存時(shí)間為手術(shù)日期至首次局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移確診日期，總生存時(shí)間為手術(shù)日期至患者死亡日期。1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不同E-cad 表達(dá)組間臨床病理資料比較采用χ2檢驗(yàn)，生存曲線用壽命表法繪制，生存率間差異的比較用Wilcoxon 檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 E-cad 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 147 例TNBC 中，E-cad 陽性表達(dá)率32%(47/147)，陰性表達(dá)率68%(100/147)。E-cad 表達(dá)與患者年齡、絕經(jīng)狀態(tài)、病理類型等因素?zé)o關(guān)(P ＞0.05)，而與腫塊大小、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P ＜0.05)。見表1。

2.2 E-cad 表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 所有病例均完成定期隨訪復(fù)查，截至2011年12月，中位隨訪時(shí)間為45(5 ～70)個(gè)月。壽命表法繪制生存曲線顯示E-cad陰性表達(dá)組的5 a 無病生存率和5 a 總生存率分別為27%、61%，陽性表達(dá)組分別為65%、89%，2 組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＜0.05)。見圖1、2。

3 討論

TNBC 是ER、PR、HER-2 均陰性表達(dá)的乳腺癌亞型，在所有乳腺癌中占15% ～26%［3-4］。由于TNBC分化差、組織學(xué)分級高，因此臨床上容易發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，預(yù)后不良［5］。目前TNBC 尚缺乏特異性的治療靶點(diǎn)，不能從內(nèi)分泌治療及分子靶向治療中獲益，因此尋找有效的治療靶點(diǎn)是TNBC 治療的關(guān)鍵。

表1 E-cad 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

圖1 不同E-cad 表達(dá)TNBC 患者5 a 總生存曲線

E-cad 是一種細(xì)胞與細(xì)胞之間的鈣調(diào)節(jié)黏附分子，在維持細(xì)胞上皮的正常結(jié)構(gòu)、細(xì)胞增殖和侵襲中發(fā)揮重要的作用。既往研究［1-2］發(fā)現(xiàn)在約70%的原發(fā)性乳腺腫瘤中存在E-cad 的表達(dá)減少甚至缺失，E-cad下調(diào)是上皮間質(zhì)化的標(biāo)志，正是由于E-cad 的功能缺失導(dǎo)致細(xì)胞與細(xì)胞之間的黏附力下降，促使上皮間質(zhì)化的發(fā)生，進(jìn)而引起腫瘤轉(zhuǎn)移。本文結(jié)果顯示:在TNBC 組織中E-cad 的陽性表達(dá)率為32%(47/147)，陰性表達(dá)率68%(100/147)，存在較高的缺失表達(dá)，與文獻(xiàn)［6-7］相符，說明E-cad 缺失在TNBC 的發(fā)展過程中具有重要作用。

圖2 不同E-cad 表達(dá)TNBC 患者5 a 無病生存曲線

既往研究［8］發(fā)現(xiàn)，E-cad 水平的下降與乳腺癌的不良預(yù)后有關(guān)，但是其在TNBC 中的研究數(shù)據(jù)很少，且存在不同的結(jié)論。Kashiwagi 等［7］雖然沒有發(fā)現(xiàn)E-cad的表達(dá)與TNBC 的臨床病理特征之間關(guān)系，但是隨訪顯示E-cad 缺失表達(dá)的患者具有較低的總生存率和較短的無病生存時(shí)間。作者發(fā)現(xiàn)在TNBC 中，E-cad 的缺失與不良預(yù)后相關(guān)因素有關(guān)，包括較大的腫瘤體積、較高的組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等。在5 a 隨訪時(shí)間內(nèi)，E-cad 陰性表達(dá)組的總生存率與無病生存率也顯著低于E-cad 陽性表達(dá)組。

正是由于E-cad 在乳腺癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中的重要作用，重新恢復(fù)E-cad 的表達(dá)能夠抑制腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。目前尚無針對E-cad 通路的特異性藥物來誘導(dǎo)E-cad基因的表達(dá)，但是許多抗腫瘤藥物能夠通過各種機(jī)制上調(diào)E-cad 的表達(dá)，研究［9-10］顯示阿霉素能夠誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞中E-cad 的表達(dá)，術(shù)前化療也能增加E-cad的表達(dá)。雌激素受體拮抗劑三苯氧胺能上調(diào)E-cad 的表達(dá)，而雌二醇能下調(diào)E-cad 的表達(dá)［11-12］。因此在TNBC 中系統(tǒng)深入的研究E-cad 通路，研制特異性上調(diào)E-cad 表達(dá)的藥物具有積極的意義。

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