田艷芹

【摘要】 目的 探討單核細胞趨化因子（MCP-1）、環(huán)氧合酶-2（COX-2）、過氧化物酶增殖物激活受體y（PPARy）、人類乳頭瘤病毒（HPV）在宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）中的應用。方法 用原位雜交技術檢測HPV（主要是HR-HPV）及免疫組化法檢測MPC-1、COX-2、PPARy在27例宮頸癌（CC）、36例低級別上皮內(nèi)瘤變（LSIL）、46例高級別上皮內(nèi)瘤變（HSIL）、 40例對照組（AA）陽性表達情況。結果 ①MCP-1在AA、LSIL、HSIL中陽性率分別為77.50%、30.56%、6.52%， 相互間差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；②COX-2、PPARy在AA、LSIL、HSIL、CC中陽性率分別為0、47.22%、84.78%、92.59%和0、47.22%、60.87%、77.78%；HR-HPV在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為0、 44.44%、76.09%、92.59%。對照組與各組間陽性表達差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。結論 MCP-1、COX-2、PPARy 在宮頸早期病變的發(fā)生發(fā)展中起重要作用， MCP-1、COX-2、PPARy聯(lián)合HPV檢測可作為準確診斷CIN的指標。

【關鍵詞】 免疫組化；單核細胞趨化因子；環(huán)氧合酶-2；過氧化物酶增殖物激活受體y；原位雜交；人類乳頭瘤病毒；宮頸上皮內(nèi)瘤變

【Abstract】 Objective To explore the application of monocyte chemotactic protein （MCP-1）， cyclooxygenase 2 （COX-2）， peroxisome proliferator activated receptor y （PPARy）， and human papillomavirus （HPV） in cervical intraepithelial neoplasia （CIN）. Methods In-situ hybridization technique and immunohistochemical method were applied to detect the positive expressions of HPV （mainly HR-HPV）， MCP-1， COX-2， and PPARy in 27 cervical cancer （CC） cases， 36 low-grade squamous intraepithelial lesion （LSIL） cases， 46 high-grade squamous intraepithelial lesion， and 40 cases of control group （AA）. Results ① The positive rates of MCP-1 in AA， LSIL， and HSIL were 77.50%， 30.56%， and 6.52% respectively， and the differences between them had statistical significance （P<0.01）. ② The positive rates of COX-2 in AA， LSIL， HSIL， and CC were 0， 47.22%， 84.78%， and 92.59%. The positive rates of PPARy in AA， LSIL， HSIL， and CC were 0， 47.22%， 60.87%， and 77.78%. The positive rates of HR-HPV in AA， LSIL， HSIL， and CC were 0， 44.44%， 76.09%， 92.59%. There were statistically significant differences of the positive expressions between the control group and other groups （P<0.01）. Conclusion MCP-1， COX-2， and PPARy play important roles in the occurrence and development of early cervical lesions， and the combination detection of MCP-1， COX-2， PPARy， and HPV can be applied as a precise indicator for diagnosing CIN.

【Key words】 Immunohistochemistry； Monocyte chemotactic protein； Cyclooxygenase 2； Peroxisome proliferator activated receptor y； In-situ hybridization； HPV； Cervical intraepithelial neoplasia

宮頸癌是一種常見的婦科腫瘤， 全世界每年約有50萬新發(fā)病例， 20多萬人死亡。據(jù)統(tǒng)計浸潤性宮頸癌5年的生存率僅為67%， 早期宮頸癌為90%， LSIL少部分可消退， 只有極少數(shù)沒有積極治療才發(fā)展為癌， 以上階段屬于可逆轉期。HSIL必須立即手術治療， 此期屬不可逆轉的。本研究采用免疫組織化學和原位雜交分別檢測宮頸組織中MCP-1、COX-2、PPARy 蛋白表達水平和 HR-HPV 感染情況， 并探討各指標間的相關性， 以期為SIL的預防和靶向治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集棗莊礦業(yè)集團棗莊醫(yī)院病理科2010年6月～2014年6月宮頸癌27例、LSIL36例、HSIL46例， 對照組40例， 所有病例均為非孕期有性生活女性， 年齡21～77歲， 平均年齡49歲。病理及臨床資料完整。一般資料比較， 差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）， 具有可比性。endprint

1. 2 方法

1. 2. 1 標本切片的制備及診斷 所有標本均用10%甲醛固定、脫水、石蠟包埋后制片， 最終有兩名資歷深厚的醫(yī)師判斷結果。

1. 2. 2 免疫組織 MCP-1、COX-2為兔抗人單克隆抗體， PPARy兔抗人多克隆抗體；SP染色試劑盒均購自邁新生物技術公司， 操作嚴格按照說明進行。HR- HPV均用相應編號的探針及通用型檢測試劑盒， 均購自美國Digene公司。

1. 3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS20.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2. 1 MCP-1在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為77.50%、30.56%、6.52%、0， MCP-1在CC癌腫內(nèi)部雖未見陽性表達， 但在癌細胞間質中可見陽性表達。MCP-1在AA、LSIL、HSIL中的表達差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。

2. 2 COX-2在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為0、47.22%、84.78%、92.59%。COX-2在CC中的表達與HSIL相比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；HSIL與LSIL差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。

2. 3 PPARy在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為0、47.22%、60.87%、77.78%。PPARy在LSIL、HSIL及CC組均有較強陽性表達， 陽性表達部位主要定位于細胞核， 但表達強度不同。此外， PPARy在HSIL和CC周邊部可見到染色程度比癌細胞更明顯的間質表達， PPARy陽性細胞在子宮頸癌中呈彌散分布， 在細胞外基質中呈灶狀分布。

2. 4 HR-HPV在AA、LSIL、HSIL和CC中的陽性率分別為0、 44.44%、76.09%、92.59%。HR-HPV在LSIL、HSIL和CC陽性率隨著級別升高陽性表達率升高（P<0.01）。

3 討論

CIN是一組與浸潤性宮頸癌密切相關的癌前期病變的統(tǒng)稱， 病因學研究顯示， 人類乳頭瘤病毒HPV感染， 尤其是HR- HPV持續(xù)感染是CIN發(fā)生發(fā)展的必要條件[1]，未感染HR-HPV者幾乎不會發(fā)生宮頸癌[2]。由于CIN發(fā)展形成CC的病程較長， 且各類CIN臨床處理方法不一， LSIL患者一般采取定期隨訪， HSIL患者一般采取Leep術。多年來， 雖說CIN似乎有明確的組織學分級， 但僅根據(jù)HE切片對LSIL及HSIL作出明確分級， 不同病理醫(yī)師在診斷時常存在爭議。隨著分子學的發(fā)展， 證明有些病毒感染的假象容易誤診， 導致CIN診斷不足及過診斷， 因此尋找相對準確診斷CIN的新指標是近年分子學研究熱點之一。

近年來的研究表明MCP-1、COX-2、PPARy在CIN發(fā)生及發(fā)展中起著非常重要的作用。

3. 1 COX- 2 為誘導型表達基因。HR- HPV原癌蛋白與細胞內(nèi)腫瘤抑制蛋白 P53 結合， 導致 P53 降解和失活， P53的降解和失活可增強細胞 COX- 2 基因表達 [3]。促使體內(nèi)c-myb基因表達增加， 從而進一步促進COX-2基因高表達[4]。本研究發(fā)現(xiàn) COX- 2 在LSIL相對AA組中的高表達 ， 說明 COX-2增高可能是上皮內(nèi)瘤變過程中的早期事件。

3. 2 PPARy屬于Ⅱ型核激素受體， 通過增加體內(nèi)15-脂氧和酶活性促進脂肪酸轉變?yōu)轭愂轭愇镔|， 進而提高PPARy介導的轉錄激活作用[5]， PPARy當其被配體激活后， 激動劑可促進P53的表達， 抑制細胞增殖， 導致腫瘤細胞發(fā)生凋亡和分化。PPARy過表達在宮頸病變的早期事件中就已經(jīng)體現(xiàn)， LSIL主要在細胞漿；HSIL部分在細胞漿， 少量在細胞核；CC表達主要體現(xiàn)在細胞核， 同時對CC周邊細胞外基質進行了觀察， 發(fā)現(xiàn)細胞外基質中的PPARy的表達要比正常對照組中的表達高的多（P<0.01）。臨床上檢測PPARy有助于SIL診斷。

3. 3 MCP-1是體內(nèi)免疫、炎癥調節(jié)因子， 在HR-HPV感染導致的宮頸病變中起著重要的作用， 機體上皮細胞感染HR-HPV后， 抑癌基因P53功能受到抑制， 病毒DNA發(fā)生某種形式的斷裂， 細胞向惡性轉化。Hacke等[6]用原位雜交法表明下調MCP-1基因表達， 可引起宮頸上皮細胞免疫耐受， 從而導致宮頸癌發(fā)生。由研究可見MCP-1對宮頸癌的早期診斷有一定的作用。

MCP-1、COX-2、PPARy在CIN中的相互作用。COX-2、MCP-1在宮頸病變的表達中呈負相關； COX-2 和PPARy在宮頸病變中具有協(xié)同作用， COX-2是PPARy天然配體合成過程中的重要限速酶。COX-2在子宮頸癌的表達中起一定的作用， 尤其在宮頸早期病變起重要作用。機體感染HR-HPV后， 可致COX-2、PPARy陽性表達升高， MCP-1表達降低。因此， 由HR-HPV感染可警惕宮頸惡性潛能的提示， 由HR-HPV感染加COX-2、PPARy免疫表型可以準確診斷CIN， 因為MCP-1與COX-2、PPARy、HR-HPV在宮頸病變中的表達呈負相關， MCP-1陽性分析可以明確宮頸早期病變的程度， 準確區(qū)分LSIL、HSIL， 從而指導臨床采取有效治療措施， 防止過診斷及診斷不足， 為臨床提供準確的靶向治療。

參考文獻

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[2] 李亞里. HPV感染與宮頸癌前病變的臨床研究進展.武警醫(yī)院， 2012，23（2）：93-96.

[3] Haensen G， Krause U， Becker A， et al. Tumor hypoxia， p53， and prog- nosis in cervical cancers. Int J Radiation Oncology Biol Phys， 2001， 50（4）：865-872.

[4] Ip SM， Huang TG， Yeung SWB， et al. PRb- expressing adenovirus Ad5-Rb attenuates the p53-induced apoptosis in cervical cancer cell lines. European J Cancer， 2001， 37（18）：2475-2483.

[5] Willson TM，Wahli W. Peroxisome proliferators-activate receptor agonists. Curr Opin Chen Biol，1997（1）：235-241.

[6] Hacke K， Rincon-Orozco B， Buchwalter G， et al. Regulation of MCP-1chemokine transcription by P53. Mol Cancer， 2010（20）：69-82.

[收稿日期：2014-08-26]endprint