李亞潔，謝文鴻，吳麗萍，李 梅

脂肪肝是一種多病因引起的、病變主體在肝小葉、以肝細胞內(nèi)中性脂肪異常沉積為主的臨床綜合征［1］。高脂血癥是形成脂肪肝的基礎，高脂血癥性脂肪肝如果沒有得到及時的治療很可能逐漸發(fā)展為脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化、肝衰竭以及肝癌［2］。動脈粥樣硬化（AS）是危害人類健康的常見病，動脈粥樣硬化引起的心、腦血管疾病如心肌梗死、腦卒中等是導致人類死亡的主要病因。大量實驗與臨床資料證明高脂血癥是動脈粥樣硬化形成的主要危險因素［3］。為有效防治高脂血癥、脂肪肝及動脈粥樣硬化，國內(nèi)外都在積極探索和篩選具有調(diào)節(jié)血脂作用的生物資源［4］。深海魚油含有豐富的多元不飽和脂肪酸－DHA（二十二碳六烯酸）和EPA（二十碳五烯酸），而多元不飽和脂肪酸DHA和EPA與脂類的吸收及代謝有著密切 的 聯(lián) 系［5，6］，具 有 調(diào) 節(jié) 血 脂 的 作用［7，8］。本研究以高脂血癥性脂肪肝及動脈粥樣硬化早期病理學變化的大鼠為動物模型開展實驗研究，觀察深海魚油對其肝組織及胸主動脈的影響。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 深海魚油 系浙江興業(yè)集團有限公司產(chǎn)品，深海魚油膠囊每粒 1000 mg，含EPA 330mg、DHA 220mg。人體推薦量為33．33mg／（kg·d）～66．67 mg／（kg·d）。

1．1．2 實驗動物 Wistar雄性大鼠，清潔級，36只，體重210g～260g，實驗動物質(zhì)量合格證明號：0102299，許可證號：SCXK（粵）2011－0015；動物由南方醫(yī)科大學動物實驗中心提供。

1．1．3 高脂飼料配方和試劑 高脂飼料由膽固醇0．15%、豬油21%、普通飼料78．85%組成。普通飼料由廣東省醫(yī)學實驗動物中心制作，許可證號：SCXK（粵）2008－0002。膽固醇由廣州威佳科技有限公司提供，批號：20111215；豬油由中山市明發(fā)油脂有限公司提供，批號：20120309。

1．2 方法

1．2．1 動物模型的建立 由于深海魚油的人體推薦量為33．33mg／（kg·d）～66．67mg／（kg·d），根據(jù)人及不同種類動物之間藥物劑量的換算，動物與人體的每千克體重劑量折算系數(shù)表［9，10］，計算灌胃深海魚油的劑量為0．21g／kg～0．42g／kg。采用隨機數(shù)字表法將高脂血癥大鼠 36只隨機分為空白對照組（n＝8）、模型對照組（n＝8）、深海魚油組［低劑量組0．21g／kg（n＝10），高劑量組0．42g／kg（n＝10）］。實驗期內(nèi)兩個劑量組給予高脂飼料和不同劑量的深海魚油，模型對照組給予高脂飼料和蒸餾水，空白對照組給予基礎飼料和蒸餾水。每天飼喂大鼠時，以模型對照組大鼠食量為標準，各組給予同等重量的飼料。灌胃深海魚油90d后，取肝臟橫斷面及胸主動脈縱切面，冰凍切片，并進行油紅O染色，觀察大鼠肝組織及胸主動脈病理變化（100倍、400倍）。

1．2．2 肝臟病理學觀察及評分標準［11，12］取肝臟橫斷面，冰凍切片，并進行油紅O染色，觀察肝細胞脂質(zhì)沉積情況。肝臟脂肪變性程度判定：隨機選擇10個低倍鏡視野（100倍），評估肝細胞漿脂肪大泡、小泡樣著色程度，0分為無著色，1分為輕度（＜10% ），2分為中度（10%～25%），3分為重度（26%～50%），4分為極重度（＞50%）。

1．2．3 胸主動脈病理學觀察 取胸主動脈縱切面，冰凍切片，并進行油紅O染色，光鏡下觀察胸主動脈血管結(jié)構(gòu)及細胞形態(tài)，油紅O染色粥樣硬化區(qū)域脂肪呈鮮紅色，細胞核呈藍色，間質(zhì)無色。

1．2．4 統(tǒng)計學分析 圖像分析儀觀察病理切片標本病變程度，結(jié)果以均數(shù)±標準差（±s）來描述。

2 結(jié)果

2．1 大鼠肝臟組織的病理學變化 肝組織冰凍切片油紅O染色后的結(jié)果判斷：脂肪呈紅色，細胞核呈淡藍色?？捎^察到模型對照組肝細胞油紅O染色呈陽性，肝細胞特別是肝血竇周圍細胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量的紅染脂質(zhì)顆粒，證明肝臟存在脂質(zhì)沉積；空白對照組肝血竇周圍細胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)微小紅染脂質(zhì)顆粒，說明空白對照組未出現(xiàn)明顯變化。模型對照組肝細胞漿脂肪大泡、小泡樣著 色程度為（19．10±3．14）%，評分2．00分±0．00分；空白對照組著色程度為（0．60±0．27）%，評分0．40分±0．16分；模型對照組肝組織著色程度、評分顯著高于空白對照組（P＜0．01），說明模型對照組肝組織出現(xiàn)中度脂肪變性。深海魚油低劑量組著色程度為（12．60±2．99）%，評分為1．80分±0．42分，與模型對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。深海魚油高劑量組著色程度為（9．90±1．29）%，評分為1．40分±0．52分，明顯低于模型對照組（P＜0．01）。見圖1。

圖1 顯微鏡下肝臟組織的病理學變化（400倍）

2．2 大鼠胸主動脈的病理學變化 空白對照組大鼠血管壁三層結(jié)構(gòu)明顯，內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮下無脂質(zhì)沉積；中膜可見明顯數(shù)層彈力膜，外膜存在；內(nèi)膜、中膜和外膜分界清楚，管腔面由單層內(nèi)皮細胞覆蓋，細胞完整。低劑量組、高劑量組、模型對照組大鼠血管壁三層結(jié)構(gòu)可見，內(nèi)膜多見增厚，可見泡沫細胞，中膜彈力膜清晰，平滑肌排列紊亂，可見大小不等、形態(tài)不規(guī)則泡沫細胞，胞質(zhì)顯多個空泡，內(nèi)皮下無脂質(zhì)沉積。見圖2。

3 討論

脂肪性肝病是由遺傳－環(huán)境－代謝應激相關因素所致的以肝細胞脂肪變性為主的臨床病理綜合征［13］。高脂血癥也是動脈粥樣硬化進程中的重要獨立危險因素，研究發(fā)現(xiàn)，因高脂肪飲食攝入引起的高血脂狀態(tài)通過誘導局部炎癥反應、氧化應激損傷、損害血管內(nèi)皮細胞代謝等諸多作用，增進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展［14，15］。高脂血癥引起脂肪肝及動脈粥樣硬化與長期過食脂肪、高膽固醇、低蛋白飲食、體重增加過快、內(nèi)分泌失調(diào)及代謝疾病相關［16］。隨著生活水平的提高，高血脂、高膽固醇、脂肪肝、動脈粥樣硬化人群越來越多，目前降血脂、預防脂肪肝及動脈粥樣硬化的藥物大多成本較高、價格昂貴，且副反應大，尋找安全有效的保健食品顯得尤為重要［17］，并且防治高脂血癥具有很大的醫(yī)學和社會意義，國內(nèi)外都在積極探索和篩選具有調(diào)節(jié)血脂作用的生物資源。

自上世紀，有學者發(fā)現(xiàn)格陵蘭島愛斯基摩人和日本人因膳食中富含ω－3多不飽和脂肪酸的海產(chǎn)品，其心肌梗死、慢性炎癥、自身免疫病的發(fā)病率都很低以來，關于魚油的研究迅速發(fā)展［18］。深海魚油是一類具有很高應用價值的天然保健品，多元不飽和脂肪酸EPA和DHA是其成分中的特征性脂肪酸。EPA和DHA屬于ω－3型多元不飽和脂肪酸，是人體不能合成、需由食物提供的必需脂肪酸［19］。

本實驗結(jié)果表明，飼喂高脂飼料90 d，模型對照組大鼠肝臟組織存在脂質(zhì)沉積，出現(xiàn)中度彌漫性肝細胞脂肪變性。低劑量組（0．21g／kg）大鼠出現(xiàn)中度彌漫性肝細胞脂肪變性，推測灌胃深海魚油量不足未能減輕肝臟內(nèi)脂肪的沉積。高劑量組（0．42g／kg）大鼠出現(xiàn)輕度肝細胞脂肪變性，說明0．42g／kg劑量的深海魚油能使肝組織的脂肪變性程度減輕，而脂肪肝的發(fā)生、發(fā)展與體內(nèi)血脂水平、脂質(zhì)過氧化程度有關［20］，可能是由于深海魚油的生物活性有調(diào)節(jié)血脂、抗炎［21］、抗氧化［22］等作用有關，至于其確切機制尚需進一步證實。模型對照組大鼠胸主動脈血管壁結(jié)構(gòu)顯示，內(nèi)膜多見增厚，中膜彈力膜清晰，平滑肌排列紊亂，內(nèi)皮細胞腫脹，內(nèi)皮細胞損傷、炎性細胞浸潤、平滑肌細胞排列紊亂，可見大小不等、形態(tài)不規(guī)則泡沫細胞，局部增殖，符合動脈粥樣硬化早期病理學變化［23］。低劑量組（0．21g／kg）、高劑量組（0．42g／kg）大鼠胸主動脈也出現(xiàn)了動脈粥樣硬化早期病變，本實驗研究尚未發(fā)現(xiàn)深海魚油具有減輕胸主動脈病變的作用。而深海魚油具有顯著降低總膽固醇（TC）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL－C）的作用［24］，血清中總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇異常升高是導致動脈粥樣硬化的重要因素［25］。推測本實驗灌胃深海魚油時間可能較短，對深海魚油是否具有預防動脈粥樣硬化的作用，尚需進一步證實。近年來，隨著人們生活方式及膳食結(jié)構(gòu)的改變，由肥胖等因素所致的高脂血癥性脂肪肝的發(fā)病率日益增加，并有可能發(fā)展成脂肪性肝炎、脂肪性肝硬化。據(jù)統(tǒng)計，脂肪肝的發(fā)病率占平均人口的10%，肥胖者的50%，并且肥胖者脂肪肝和高脂血癥常合并存在［26］。脂質(zhì)代謝紊亂是導致高脂血癥的直接原因，高脂血癥是動脈粥樣硬化的主要原因［27］，高脂血癥和動脈粥樣硬化是誘發(fā)各種心腦血管疾病的危險因素，嚴重威脅著人們的健康和生活質(zhì)量。對于脂肪肝病人或心血管疾病高危人群，護理人員對其進行健康教育時，關于保健食品方面根據(jù)本實驗研究結(jié)果可提供理論依據(jù)，為有效防治脂肪肝形成或延緩心血管疾病發(fā)生具有一定的醫(yī)學和社會意義。

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