肖 剛 陳 壯 黎為能 (右江民族醫(yī)學院臨床學院，廣西 百色 533000)

人口衰老與老年疾病發(fā)生有直接相關(guān)性，大多數(shù)老年人同時患有一種以上的疾病，由于老年病的遷延性和難愈性，使其對醫(yī)學資源連續(xù)消耗，龐大的醫(yī)療費用已經(jīng)成為國家、社會和家庭的沉重負擔〔1〕。如何解決這些老年人包括一部分中老年人受衰老的困擾，是一個擺在我們面前的十分嚴峻的課題。羅漢果是廣西特產(chǎn)中藥，性涼、味甘、無毒，歸肺、大腸經(jīng)，有潤肺止咳、涼血滑腸之功效，常用于治療肺火燥咳、咽痛失音、腸燥便秘等?，F(xiàn)代藥學研究發(fā)現(xiàn)其有止咳祛痰、保肝、降血糖、增強免疫、抗癌等多種藥理作用〔2〕。但羅漢果抗衰老的作用還未見有報道，本實驗研究羅漢果甜苷(Mog)的抗衰老作用。

1 材料與方法

1.1 試劑 超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號:20080708;丙二醛(MDA)測定試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號:20080708。

1.2 藥物 Mog桂林興達制藥有限責任公司，批號:081022。

1.3 動物 清潔SPF級昆明種小白鼠，18～22 g，雌雄兼用，由廣西醫(yī)科大學實驗動物中心提供，許可證號:SCXK桂2009-0002。小鼠分性別飼養(yǎng)于空調(diào)室內(nèi)，室溫(22±2)℃，濕度(70±5)%，標準顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水和攝食。

1.4 儀器 萬分之一克電子天平:德國賽多利斯生產(chǎn);微量加樣器:德國;液體快速混合器:江西醫(yī)療器械廠;超聲細胞粉碎機:寧波新芝科器研究所;高速低溫離心機:德國Biofuge Stoucctos;CHEM-300型半自動生化分析儀，德國Bio-Asia公司生產(chǎn)，高壓蒸汽滅菌器，上海醫(yī)用核子儀器廠。

1.5 動物實驗方法

1.5.1 實驗分組、造模、給藥 昆明種小鼠隨機分成六組:正常組、模型組、維生素E組、Mog高、中、低三個劑量組，每組10只。正常組每天皮下注射等體積生理鹽水(1 ml/kg)，模型組、維生素E組、Mog高、中、低劑量組每天皮下注射 D-半乳糖(0.05 g/kg)。連續(xù)6 w后，模型組小鼠行動遲緩、毛發(fā)無光或脫落、反應(yīng)遲鈍，呈現(xiàn)明顯衰老體征。造模同時對正常組、模型組灌胃等量生理鹽水;維生素 E組每天灌胃維生素E 0.05 g/kg;Mog高、中、低劑量每天灌胃Mog劑量依次為1.5、0.75、0.38 g/kg〔3〕。

1.5.2 樣本采集 血清樣本采集:實驗結(jié)束摘眼球取血。取血前禁食不禁水12 h，全血靜置2～3 h，見有血清析出后離心(4 000 r/min)分離血清，按試劑盒說明檢測血清SOD、MDA。腦組織采集:腦組織勻漿的制備 各組小鼠處死，取出腦組織，吸干，稱0.2 g左右的腦組織，冰浴下按腦組織(g):生理鹽水(ml)為1∶9比例稀釋，超聲細胞粉碎機勻漿(3 500 r/min、工作10 s間歇20 s)，所得勻漿液低溫離心(4 000 r/min)取腦組織勻漿上清按試劑盒說明測定SOD、MDA。

1.6 果蠅壽命實驗 實驗動物采用黑腹果蠅，美國野生型Oregon K品系。制備培養(yǎng)基，對照組用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，Mog高、中、低劑量組培養(yǎng)基分別含Mog 20%、10%、5%。取24 h內(nèi)羽化成蟲果蠅隨機分成對照組和Mog高、中、低三個劑量組，每組雌、雄果蠅數(shù)各100只，雌雄分裝。每4天更換培養(yǎng)基1次。每天定時統(tǒng)計死亡果蠅數(shù)，每組中半數(shù)果蠅死亡天數(shù)的算術(shù)平均數(shù)為該組的半數(shù)死亡期;每組全部果蠅死亡天數(shù)的算術(shù)平均數(shù)為該組的平均壽命;最后死亡的10只果蠅的生存天數(shù)的算術(shù)平均數(shù)為該組的最高壽命。

1.7 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0軟件行t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 Mog對衰老小鼠腦組織中SOD和MDA的影響 正常組SOD、MDA水平與模型組比較(P＜0.01)說明造模成功;Mog各劑量與模型組比較，腦組織 MDA水平均明顯低于模型組(P＜0.01)，Mog高、中劑量對腦組織SOD有明顯升高作用，與模型組比較，差異顯著(P＜0.05)。見表1。

2.2 各組小鼠血清中SOD和MDA的變化 正常組SOD、MDA水平與模型比較差異顯著(P＜0.01)，說明造模成功;Mog高、中劑量組與模型組比較SOD水平明顯高于模型組(P＜0.01)，MDA 水平明顯低于模型組(P＜0.01)。見表2。

2.3 Mog對果蠅壽命的影響 統(tǒng)計結(jié)果顯示，Mog高、中、低劑量組能明顯延長果蠅平均壽命和最高壽命與對照組比較(P＜0.01)。見表3、表 4。

表1 D-半乳糖衰老模型小鼠腦組織SOD和MDA生化指標比較(s，n=10)

表1 D-半乳糖衰老模型小鼠腦組織SOD和MDA生化指標比較(s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01

組別 SOD(U/mg)MDA(nmol/mg)正常組 7.46±1.922) 4.32± 3.132)模型組 3.74±1.30 13.81±1.75維生素 E 組 6.99±2.142) 8.70±1.002)Mog 高劑量組 5.48± 1.751) 9.33 ± 0.822)Mog中劑量組 5.00±1.301) 10.57±1.502)Mog低劑量組 3.89±1.55 10.72±4.212)

表2 D-半乳糖衰老模型小鼠血清中SOD和MDA生化指標比較(s，n=10)

表2 D-半乳糖衰老模型小鼠血清中SOD和MDA生化指標比較(s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.01

組別 SOD(U/mg)MDA(nmol/mg)正常組 62.50±5.731) 3.62±1.721)模型組 51.07±3.23 7.84±1.70維生素 E 組 68.91±8.901) 5.58±1.21)Mog高劑量組 69.82±6.391) 5.98±1.251)Mog中劑量組 69.53±4.501) 6.20±1.651)Mog低劑量組 52.53±3.39 7.07±1.66

表3 Mog對雌性果蠅壽命的影響(s)

表3 Mog對雌性果蠅壽命的影響(s)

與對照組比較:1)P＜0.01，下表同

組別 n 劑量(%)平均壽命(d)最高壽命(d)對照組 85 - 35.6±4.5 54.5±7.5 Mog 高劑量組 88 20 45.2±5.61) 66.8±6.41)Mog 中劑量組 79 10 46.8±5.81) 65.4±6.81)Mog 低劑量組 86 5 45.5±6.21) 66.1±6.51)

表4 Mog對雄性果蠅壽命的影響(s)

表4 Mog對雄性果蠅壽命的影響(s)

組別 n 劑量(%)平均壽命(d)最高壽命(d)對照組 88 - 30.6±4.1 48.2±6.5 Mog 高劑量組 90 20 42.2±4.61) 60.5±5.81)Mog 中劑量組 85 10 40.5±6.01) 61.6±6.21)Mog 低劑量組 89 5 41.5±5.81) 60.7±5.51)

3 討論

D-半乳糖衰老模型是近10年來中藥研究中普遍采用的衰老模型，能表現(xiàn)出與16～24月齡衰老鼠相似的學習記憶能力下降，自由基產(chǎn)生增加，免疫功能退化等自然衰老過程中的變化;且其造模時間短，成模容易，重復性好〔4〕。D-半乳糖是目前廣泛采用的一種研究體內(nèi)抗氧化衰老作用的方法。長期連續(xù)大劑量皮下注射D-半乳糖會導致小鼠細胞代謝紊亂，免疫應(yīng)答能力下降，抗氧化酶的活性降低，誘發(fā)氧化應(yīng)激，引起脂質(zhì)過氧化作用的鏈式反應(yīng)。氧化應(yīng)激是機體在遭受各種有害刺激時，體內(nèi)高活性分子如超氧陰離子自由基、羥自由基和過氧化氫等活性氧自由基(ROS)產(chǎn)生過多，打破了體內(nèi)氧化與抗氧化體系之間的平衡關(guān)系，而導致組織損傷，引起衰老和多種疾病〔5〕。SOD作為體內(nèi)重要的抗氧化酶，它能使超氧化陰離子自由基變?yōu)檫^氧化氫和氧離子，從而減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，使機體組織和細胞免受損害〔6〕。MDA是體內(nèi)自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物之一，其含量可間接用以判斷機體脂質(zhì)過氧化損傷以及衰老的程度〔7〕;它在腦組織和血清中的含量間接地反映了自由基的反應(yīng)時組織的破壞程度〔8〕。MDA既是評價衰老的重要指標之一，又可反映組織氧化的程度。腦組織SOD、MDA可以反映腦組織自由基產(chǎn)生和老化的程度，從而反映腦組織的功能狀態(tài)。SOD的合成是誘導性的，少量自由基可以誘導SOD的合成，而大量的自由基則可以消耗掉機體的SOD。隨年齡增長，自由基生成增多，SOD合成和活性逐漸下降，造成自由基損害的連鎖反應(yīng)，提高衰老機體的SOD水平對于抗衰延壽有著重要價值〔9〕。

果蠅是一種真核多細胞生物，具有壽命短、繁殖力強高度純種、飼養(yǎng)簡便等優(yōu)點，其代謝、生理狀況等同哺乳動物基本相似〔10〕，英國科學家還發(fā)現(xiàn)果蠅有類似人類的衰老基因，因此常被用于衰老實驗研究。

本實驗發(fā)現(xiàn)Mog可提高衰老小鼠腦組織和血清中的SOD的活性，降低了血清中和腦組織中MDA的含量。Mog可顯著延長果蠅平均壽命和最高壽命，提示其有延緩衰老的作用，其抗衰老機制與提高機體抗氧化酶活性，清除機體過量自由基，維持自由基代謝的平衡，減少自由基引起的生物膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護機體的正常新陳代謝有關(guān)。

1 周坤福，管 雋.中醫(yī)藥對衰老主要相關(guān)基因影響的探討〔J〕.河南中醫(yī)，2006;26(12):80-2.

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5 劉春紅，金鐘斗，韓寶瑞.平貝母多糖對D-半乳糖誘導衰老模型小鼠的抗氧化作用〔J〕.食品科學，2011;32(23):285-8.

6 龐俊偉，翟春濤.逍遙散對衰老模型小鼠血清中SOD、MDA含量影響的實驗研究〔J〕.山西中醫(yī)學院學報，2011;12(1):16-8.

7 吳立蓉，吳趨凡，黃兆勝.益壽丸對 D-半乳糖致衰老模型小鼠自由基代謝的影響〔J〕.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2012;26(1):31-3.

8 葉和楊，周 俐，曾 靖，等.金邊瑞香對小鼠SOD活性及MDA含量的影響〔J〕.贛南醫(yī)學院學報，2003;23(3):246-8.

9 莫艷秀，于美娟，莫永亮.林蛙油對D-半乳糖致衰老模型小鼠的保護作用〔J〕.中國老年學雜志，2011;31(9):1603-4.

10 厲曙光，白莉華，王力強，等.人參對果蠅壽命的影響及其抗氧化作用〔J〕.衛(wèi)生研究，2008;38(1):104-6.