朱向東 王 燕 (甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

大瀉腎湯出自敦煌出土卷子《輔行訣臟腑用藥法要》，由茯苓、甘草、大黃、黃芩、芍藥、干姜六味藥物組成，主治“小便赤少，時(shí)溺血，少腹迫滿而痛，腰如折，耳鳴”。慢性前列腺炎的病機(jī)為少陰濕熱夾實(shí)，多系勞倦過度，損傷脾腎;或嗜食肥甘，濕熱內(nèi)生;或外受寒濕，郁而化熱，濕熱內(nèi)蘊(yùn)，下注少陰而成。臨床治療宜采用清熱利濕，補(bǔ)腎化氣之法。大瀉腎湯配伍以《輔行訣臟腑用藥法要》所云:“陶云:腎德在堅(jiān)。故經(jīng)云:以苦補(bǔ)之，咸瀉之;腎苦燥，辛以潤之，至津液生也。”為指導(dǎo)，以茯苓、甘草為君，健脾祛濕，益氣補(bǔ)中，緩急止痛，調(diào)和藥性。方中重用大黃，其性味苦寒，功主沉降，清泄?jié)駸?，并有活血化瘀之用，專治腰痛如折、時(shí)溺血、淋痛之癥。黃芩，清熱燥濕，瀉火解毒?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn):其主要成分黃芩甙、黃芩素具有抗菌、抗炎和利尿作用。大瀉腎湯配伍的獨(dú)特之處是在蕩滌袪實(shí)之中，妙用芍藥酸甘護(hù)陰，配伍干姜溫陽辛開，陰陽并調(diào)，氣化得行，其病可除。本方之瀉腎與補(bǔ)腎不同，實(shí)有以瀉為補(bǔ)之妙?？v觀全方，共奏清熱利濕、活血化瘀、補(bǔ)腎益氣之功效。本文觀察敦煌輔行訣大瀉腎湯治療非細(xì)菌性前列腺炎的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 大瀉腎湯由茯苓、生甘草、制大黃、黃芩、赤芍、干姜六味藥物組成，藥材由甘肅中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院中藥房提供，煎煮后過濾去渣，水浴濃縮濾液，使每毫升藥液含生藥1.72 g。前列泰膠囊(陜西東泰制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):z20050003)。消痔靈注射液(北京第四制藥廠生產(chǎn)，批號(hào):0710312)，實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水配制成25%消痔靈注射液，標(biāo)記備用。白細(xì)胞介素(IL)-2、-8放免試劑盒(蘭州軍區(qū)總醫(yī)院安寧分院核檢驗(yàn)科提供，批號(hào):S20063090、S20063089)。腫瘤壞死因子(TNF)-α及內(nèi)皮素(ET)-1放免試劑盒(中國原子能科學(xué)研究所提供 批號(hào):S10940082、S10940089)。Biofuge Fresco低溫高速離心機(jī)，德國賀力氏(Heraeus)公司產(chǎn)品;BS124s電子分析天平，德國賽多利斯(Sartorius)公司產(chǎn)品;Uv-2401 PC型紫外分光光度計(jì)，日本島津(SHIMADZU)公司產(chǎn)品;BH 2型光學(xué)顯微鏡，日本奧林巴斯(OLYMPUS)公司產(chǎn)品;MDF-71超低溫冰箱，日本三洋(SANYO)公司產(chǎn)品;HH-601數(shù)顯恒溫水浴箱，江蘇省金壇市恒豐儀器廠產(chǎn)品;LBY-N6A自清洗旋轉(zhuǎn)式黏度儀，北京普利生儀器有限公司產(chǎn)品。K-80型全自動(dòng)血液黏度測(cè)定儀，中外合資北京世帝儀器公司。

1.2 分組與動(dòng)物造模 采用雄性Wistar大鼠(SPF級(jí))60只，體重(180±20)g，均由甘肅中醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供，SPF級(jí)動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(甘)2004-0006-0000202，動(dòng)物購置后適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w，全部實(shí)驗(yàn)操作均于SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，設(shè)施使用合格證為SYXK(甘)2004-0006。大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，將60只大鼠稱重，依體質(zhì)量編號(hào)，按隨機(jī)數(shù)字表法選取10只為空白對(duì)照組;其余動(dòng)物造模后選取50只稱重后按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組:模型組10只，前列泰膠囊對(duì)照組10只，大瀉腎湯高、中低劑量組各10只。①除空白組10只大鼠正常飼養(yǎng)不予造模外，其余大鼠無菌性前列腺炎模型制備方法參照文獻(xiàn)方法〔1〕:將實(shí)驗(yàn)大鼠用10%水合氯醛(250～300 mg/kg)麻醉，無菌操作下取下腹部正中切口約1 cm，直達(dá)腹腔，提出膀胱及兩側(cè)精囊，暴露附屬于精囊內(nèi)側(cè)的前列腺背葉，注入前列腺雙側(cè)背葉25%消痔靈注射液共0.2 ml，縫合肌肉、皮膚。創(chuàng)口處噴慶大霉素注射液以防感染。造模期7 d。②灌胃給藥治療共30 d。模型組、空白組給予同體積的蒸餾水灌胃;大瀉腎湯高、中、低劑量組分別給予 17.2、8.6、7.3 g·kg-1·d-1大瀉腎湯藥劑灌胃(相當(dāng)于60 kg成人用量的2、1和0.5倍);陽性藥對(duì)照組予0.66 g·kg-1·d-1(相當(dāng)于60 kg成人用量的1倍)前列泰膠囊水溶劑灌胃，連續(xù)30 d。等效劑量按人與動(dòng)物體型系數(shù)折算〔2〕，受試動(dòng)物給藥容積均為1 ml/100 g體重。

1.3 標(biāo)本采集 于末次給藥后24 h，稱大鼠體重，腹主動(dòng)脈取血、將大鼠以50 mg/kg的戊巴比妥鈉腹腔麻醉腹主動(dòng)脈取血，肝素抗凝，測(cè)血液流變學(xué)各參數(shù)。頸椎脫臼法處死大鼠，取出前列腺組織，剝離被膜及周圍脂肪組織，生理鹽水涮洗，濾紙吸干，電子天平稱重，計(jì)算各組大鼠前列腺指數(shù)，公式為:前列腺指數(shù)=〔前列腺濕質(zhì)量(g)/大鼠體質(zhì)量(g)〕×100%。將各組大鼠前列腺以中軸均分2份，右側(cè)部分保存于4%多聚甲醛0.1 mol/L PBS(pH7.2)固定液中，室溫下經(jīng)水洗、梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋等處理后，切片備用。HE染色制作病理切片，鏡下觀察前列腺局部病理變化。余留的左側(cè)組織用冰凍生理鹽水沖洗，用濾紙將水吸干后勻漿，將勻漿液以3 000 r/min離心15 min，將上清液分裝4個(gè)試管，TNF-α、IL-2、IL-8、血漿ET-1含量按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，采用放免法檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠前列腺濕質(zhì)量、體質(zhì)量及腺體指數(shù)水平的比較各組之間大鼠體重相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明各組之間前列腺重量有可比性。與空白組比較，模型組前列腺指數(shù)及濕質(zhì)量顯著增高(P＜0.05);經(jīng)大瀉腎湯治療后并與模型組比較，陽性對(duì)照組及大瀉腎湯高、中、低劑量組大鼠前列腺指數(shù)和濕質(zhì)量較模型組均明顯降低(P＜0.05)。見表1。

2.2 各組大鼠血液流變學(xué)的比較 與空白組比較，模型組全血黏度、血漿黏度、血細(xì)胞比容顯著升高(P＜0.01)，經(jīng)大瀉腎湯治療治療后并與模型組比較，大瀉腎湯高、中、低劑量組血流變指標(biāo)均降低(P＜0.05，P＜0.01)。大瀉腎湯高、中、低劑量組與陽性對(duì)照組比較，血流變各項(xiàng)指標(biāo)降低更為顯著。見表1。

表1 各組大鼠前列腺濕質(zhì)量、體質(zhì)量、腺體指數(shù)水平及血液流變學(xué)對(duì)比(s，n=8)

表1 各組大鼠前列腺濕質(zhì)量、體質(zhì)量、腺體指數(shù)水平及血液流變學(xué)對(duì)比(s，n=8)

與空白組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與模型組比較:3)P＜0.05，4)P＜0.01

空白組 0.453 7±0.090 3 379.714 3±39.373 1 0.001 1±0.000 3 40.10±2.20 1.45±0.12 5.80±1.18)模型組 0.946 6±0.139 11) 366.375 0±37.332 2 0.002 7±0.000 21) 45.50±1.972) 1.84±0.102) 10.80±1.792)陽性對(duì)照組 0.765 6±0.154 93) 299.875 0±37.146 2 0.001 9±0.000 23) 42.00±2.103) 1.75±0.093) 9.17±1.313)大瀉腎湯高劑量組 0.647 5±0.070 23) 279.857 1±67.966 7 0.001 8±0.001 23) 41.80±1.324) 1.74±0.123) 8.99±1.463)大瀉腎湯中劑量組 0.754 5±0.152 43) 310.000 0±45.785 2 0.002 3±0.000 43) 43.10±1.213) 1.74±0.113) 8.86±1.454)大瀉腎湯低劑量組 0.682 8±0.189 93) 293.125 0±17.707 4 0.002 2±0.000 33) 43.70±2.113) 1.74±0.313) 8.93±1.303)

2.3 各組大鼠前列腺組織ET-1含量的比較 與空白組比較，模型組大鼠前列腺組織中ET-1高表達(dá)(P＜0.05)。經(jīng)大瀉腎湯治療后并與模型組比較，大瀉腎湯高、中、低劑量組前列腺組織ET-1表達(dá)顯著減輕(P＜0.05，P＜0.01)。大瀉腎湯高、中、低劑量組與陽性對(duì)照組比較，ET-1表達(dá)降低更為明顯，尤其以大劑量組降低更為顯著。見表2。

2.4 各組大鼠前列腺組織細(xì)胞因子含量的比較 與空白組比較，模型組大鼠前列腺組織中細(xì)胞因子IL-2、IL-8和TNF-α含量顯著增加(P＜0.05、P＜0.01)。經(jīng)大瀉腎湯治療后并與模型組比較，大瀉腎湯高、中、低劑量組前列腺組織細(xì)胞因子IL-2、IL-8和 TNF-α 含量均明顯下降，差異顯著(P＜0.05、P＜0.01)。大瀉腎湯高、中、低劑量組與陽性對(duì)照組比較，IL-2、IL-8和TNF-α的含量下降更明顯，說明中藥治療各組療效優(yōu)于陽性對(duì)照組。見表2。

表2 各組大鼠前列腺組織IL-2、IL-8、TNF-α、ET-1含量的比較(s，n=8)

表2 各組大鼠前列腺組織IL-2、IL-8、TNF-α、ET-1含量的比較(s，n=8)

與空白組比較:1)P＜0.05;與模型組比較:2)P＜0.05，3)P＜0.01

組別 IL-2(pg/ml)IL-8(pg/ml)TNF-α(pg/ml)ET-1(pg/ml)空白組 15.802 5±1.356 3 0.300 00±0.012 0 18.128 6±3.636 3 0.300 0±0.012 0模型組 25.678 8±1.119 21) 0.505 0±0.010 21) 54..585 7±28.433 71) 0.505 0±0.010 21)陽性對(duì)照組 16.925 0±1.101 42) 0.471 3±0.174 8 37.157 1±11.915 12) 0.471 3±0.174 82)大瀉腎湯高劑量組 15.732 5±1.051 72) 0.435 0±0.018 2 24.328 6±10.129 82) 0.253 8±0.152 33)大瀉腎湯中劑量組 19.912 5±0.152 4 0.365 0±0.108 2 38.057 1±16.612 4 0.351 2±0.142 32)大瀉腎湯低劑量組 16.878 8±0.189 9 0.253 8±0.152 33) 38.414 3±13.022 3 0.372 0±0.161 12)

3 討論

本研究觀察到，與空白組比較，模型組全血黏度、血漿黏度、血細(xì)胞比容顯著升高，經(jīng)大瀉腎湯治療治療后并與模型組比較，大瀉腎湯高、中、低劑量組血流變指標(biāo)均降低，說明大瀉腎湯具有良好的活血化瘀作用。ET是很強(qiáng)的血管肽，具有強(qiáng)烈的收縮血管效應(yīng)。近年來研究表明〔3〕，中醫(yī)瘀血證與ET的表達(dá)關(guān)系密切，其中內(nèi)皮細(xì)胞功能異?？赡軈⑴c了瘀血的形成，血漿ET的測(cè)定可作為血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的指標(biāo)之一。本研究觀察到，與空白組比較，模型組大鼠ET-1水平顯著升高，說明前列腺炎大鼠體內(nèi)存在血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，從而導(dǎo)致了血瘀證的形成。經(jīng)大瀉腎湯治療后大鼠ET-1水平皆有明顯下降，說明大瀉腎湯可能通過活血化瘀作用改善大鼠的血瘀狀況，促進(jìn)前列腺炎康復(fù)。

慢性前列腺炎的發(fā)病與免疫紊亂密切相關(guān)，慢性前列腺炎患者的前列腺組織、血清中都存在著免疫球蛋白。目前各種活性介質(zhì)在炎癥反應(yīng)中的調(diào)節(jié)作用是研究的熱點(diǎn)，其中最重要的就是細(xì)胞因子。其中前炎癥細(xì)胞因子是啟動(dòng)抗菌炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子，包括 IL-2、-8、TNF-α 等〔4〕。

TNF-α不僅可作為宿主防御、免疫以及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等生理過程的介質(zhì)，是感染、炎癥及損傷的病理因子;TNF-α在前列腺慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用，它參與炎癥反應(yīng)主要通過作用于內(nèi)皮細(xì)胞、增加某些黏附分子的表達(dá)而促進(jìn)炎癥細(xì)胞黏附、游走、浸潤及中性粒細(xì)胞脫顆粒，同時(shí)也通過自分泌方式作用于巨噬細(xì)胞本身而釋放炎癥介質(zhì)(如白三烯、前列腺素等)促進(jìn)炎癥反應(yīng)。

IL-2主要介導(dǎo)和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)，是一種重要的免疫因子，它既可激活T細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生細(xì)胞免疫，又可激活B細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生體液免疫。IL-8是一種前炎癥性細(xì)胞因子，由多種體細(xì)胞合成分泌。IL-8具有趨化中性粒細(xì)胞及T細(xì)胞的作用，該作用主要在感染局部發(fā)揮。有研究提示，在前列腺液中測(cè)到IL-8即可考慮為前列腺的感染〔5，6〕。促炎癥細(xì)胞因子IL-2，IL-8，TNF-α組成復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，相互協(xié)同，在介導(dǎo)炎癥的時(shí)候發(fā)揮重要作用。它們與特異性受體結(jié)合后，通過不同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，上調(diào)黏附分子和趨化因子的分泌和表達(dá)，促進(jìn)白細(xì)胞的附著、游走、浸潤，加重炎癥反應(yīng)。

本實(shí)驗(yàn)觀察到，大瀉腎湯可以減少TNF-α、IL-2、-8含量，降低局部細(xì)胞因子的表達(dá)水平，調(diào)節(jié)其與受體結(jié)合和受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，下調(diào)黏附分子和趨化因子的表達(dá)和分泌，減弱白細(xì)胞的黏附、游出和聚集，從而發(fā)揮抗炎作用。

1 雷 瑩，竇建衛(wèi).七味前列寧片對(duì)大鼠慢性非細(xì)菌性前列腺炎模型的影響及抗炎鎮(zhèn)痛作用〔J〕.中成藥，2007;29(5):675-8.

2 陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社，1994:71-2.

3 洪振豐，戴春福.前列寧合劑對(duì)菌性前列腺炎大鼠ET-1、TXB2、6-KPGEla的影響〔J〕.中醫(yī)藥學(xué)刊，2004;22(5):870-1.

4 龔夢(mèng)鵑，謝媛媛，鄒忠杰.石蓮對(duì)大鼠非細(xì)菌性前列腺炎的影響〔J〕.世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011;6(11):938-9.

5 侯巧燕，楊成芳.茅莓對(duì)大鼠前列腺炎模型病理改變的影響〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2009;29(24):3217-8.

6 張景云，張何候.癃閉消顆粒對(duì)非細(xì)菌性前列腺炎模型大鼠的治療作用〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2008;28(1):9-10.