崔 婷 魏 強(qiáng) (中衛(wèi)市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，寧夏 中衛(wèi) 755000)

結(jié)腸腺癌患者進(jìn)展較快，且病變進(jìn)展與基因和蛋白密切相關(guān)。TBX2基因是T-BOX基因基因家族成員之一，其編碼蛋白TBX2是一個(gè)指導(dǎo)組織器官軸向發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子，TBX2在多種腫瘤中高表達(dá)〔1，2〕。MDM2是從一個(gè)含有雙微體的自發(fā)轉(zhuǎn)化的BALB/3T3細(xì)胞中克隆出來(lái)的一個(gè)高度擴(kuò)增基因，學(xué)者認(rèn)為其高度擴(kuò)增與腫瘤性進(jìn)程有關(guān)〔3，4〕。Pokemon是調(diào)節(jié)腫瘤進(jìn)展的原癌基因，可促進(jìn)多種蛋白異常釋放〔5，6〕。本實(shí)驗(yàn)關(guān)注結(jié)腸腺癌患者癌組織TBX2、MDM2和Pokemon表達(dá)及相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料 我院2010年1月至2013年11月行結(jié)腸癌根治手術(shù)患者119例術(shù)后均留取新鮮組織，置于-80℃冰箱中凍存。均符合世界衛(wèi)生組織(WHO)2008版診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)由病理醫(yī)師再次確診并分型。術(shù)前均未進(jìn)行放療和化療。男60例，女59例，年齡52～76(平均67.7)歲。選取距腫瘤邊緣＞5 cm的正常結(jié)腸黏膜新鮮組織78例為對(duì)照組，樣本保存方法同上。男40例，女38例，年齡54～73(平均65.4)歲。兩組一般臨床特征無(wú)明顯差別(P均＞0.05)。

1.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達(dá) 實(shí)驗(yàn)用兔抗人TBX2、MDM2和Pokemon蛋白均由福建邁新公司代購(gòu)。將凍存的新鮮標(biāo)本取出后置于75%的酒精中存放24～48 h，用眼科剪子剪碎組織后過(guò)濾，制備1×106/ml的單細(xì)胞懸液，取1 ml，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟加入一抗及二抗后上機(jī)檢測(cè)，應(yīng)用美國(guó)BC公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀及系統(tǒng)自帶軟件分析。

1.3 TBX2、MDM2和 Pokemon蛋白結(jié)果判讀 TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達(dá)應(yīng)用熒光指數(shù)(FI)。FI=(TBX2、MDM2或Pokemon蛋白表達(dá)的熒光強(qiáng)度)/對(duì)照樣品的平均熒光強(qiáng)度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達(dá)量比較 兩組TBX2、MDM2和Pokemon表達(dá)量差別顯著(P＜0.000 1)。見表1。

表1 兩組TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達(dá)量比較(s)

表1 兩組TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達(dá)量比較(s)

TBX2 MDM2 Pokemon觀察組分組 n 119 1.43±0.24 1.38±0.38 1.39±0.28對(duì)照組 78 1.00±0.25 1.00±0.29 1.00±0.21 t/P值8.75/＜0.000 1 7.68/＜0.000 1 7.99/＜0.000 1

2.2 觀察組不同臨床特征患者TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達(dá)比較 觀察組TBX2、MDM2和Pokemon表達(dá)與腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、臨床分期和 Ki67表達(dá)密切相關(guān)(P均 ＜ 0.05)。見表2。

表2 觀察組中不同臨床特征患者TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達(dá)的比較(s)

表2 觀察組中不同臨床特征患者TBX2、MDM2和Pokemon蛋白表達(dá)的比較(s)

臨床病理特征 n TBX2 χ2值 P值 MDM2 χ2值 P值 Pokemon t值 P值分化程度 高 55 1.28±0.32 6.43 0.008 2 1.23±0.32 7.64 0.0043 1.32±0.16 7.54 0.006 7中+低 64 1.54±0.25 1.48±0.31 1.46±0.41浸潤(rùn)深度 未及漿膜 70 1.35±0.42 6.92 0.007 6 1.28±0.35 6.75 0.009 2 1.33±0.43 6.42 0.008 5漿膜及以外 49 1.60±0.32 1.49±0.25 1.48±0.26臨床分期 Ⅰ+Ⅱ 69 1.37±0.20 6.12 0.010 2 1.30±0.39 6.57 0.007 2 1.31±0.29 6.11 0.011 0Ⅲ+Ⅳ 50 1.54±0.25 1.50±0.28 1.50±0.34 Ki67表達(dá) ＜25% 67 1.32±0.14 7.21 0.005 7 1.32±0.32 5.65 0.017 2 1.32±0.29 5.23 0.013 1≥25% 52 1.55±0.43 1.45±0.37 1.45±0.36

2.3 觀察組TBX2、MDM2和Pokemon表達(dá)相關(guān)性 觀察組TBX2和MDM2(r=0.49，P=0.014 3)表達(dá)正相關(guān);而TBX2和Pokemon、MDM2和Pokemon表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)。

3 討論

結(jié)腸腺癌發(fā)病及進(jìn)展中的癌基因促癌進(jìn)展機(jī)制、浸潤(rùn)性生長(zhǎng)的過(guò)程和腫瘤細(xì)胞的異常增殖均是近年研究的熱點(diǎn)〔7〕。由此引發(fā)學(xué)者關(guān)注多種蛋白的結(jié)構(gòu)及其在腫瘤中調(diào)節(jié)的功能〔8〕。TBX2定位于17q23染色體，其編碼的蛋白TBX2主要通過(guò)其C末端的轉(zhuǎn)錄抑制結(jié)構(gòu)域發(fā)揮轉(zhuǎn)錄抑制作用〔9〕，也有學(xué)者認(rèn)為TBX2是一個(gè)具有指導(dǎo)胚胎、組織器官軸向發(fā)育的重要轉(zhuǎn)錄因子〔10〕。TBX2的作用還有:①與 RAS、MYC等相關(guān)基因協(xié)同作用，引起細(xì)胞癌變〔11〕;②TBX2可以抑制細(xì)胞衰老和凋亡進(jìn)程，使細(xì)胞停滯在G/S和Q/M期，此時(shí)當(dāng)TBX2的異常表達(dá)累積后，引起細(xì)胞突破臨界值，進(jìn)而引起細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化〔12〕;③TBX2通過(guò)抑制P21基因的表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡，此種作用主要是與 TBX2參與 p21WAF1/CIP1突變的致瘤作用相關(guān)〔13〕。MDM2是P53的重要負(fù)性調(diào)節(jié)因子，通過(guò)P53途徑、非P53依賴途徑等多種方式調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和凋亡進(jìn)展。有學(xué)者認(rèn)為MDM2在多種腫瘤中高表達(dá)，并認(rèn)為其不僅促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，還可以對(duì)判斷腫瘤的預(yù)后有一定作用〔14，15〕。Pokemon是由ZBTB7編碼的基因，具有2個(gè)外顯子和2個(gè)內(nèi)含子。Pokemon氨基末端的BTB/POZ結(jié)構(gòu)域被廣泛發(fā)現(xiàn)存在于人體細(xì)胞和組織中〔16，17〕，Pokemon家族羧基末端的鋅指結(jié)構(gòu)可以調(diào)節(jié)特定DNA的識(shí)別和結(jié)合，其作用機(jī)制是以染色質(zhì)重構(gòu)實(shí)現(xiàn)的〔18，19〕。

本實(shí)驗(yàn)提示TBX2、MDM2和Pokemon可能對(duì)腫瘤的發(fā)生過(guò)程和癌變過(guò)程起重要促進(jìn)作用，Pokemon是經(jīng)典的原癌基因，而TBX2和MDM2在結(jié)腸腺癌中的作用與癌基因類似，其調(diào)節(jié)過(guò)程中也可能具有相關(guān)級(jí)聯(lián)反應(yīng)的相關(guān)蛋白被激活。TBX2、MDM2和Pokemon參與腺癌的分化過(guò)程，分化是腫瘤惡變和腫瘤形成中內(nèi)在基因變化的鏡下特征，因此三種蛋白對(duì)腫瘤的成熟過(guò)程有重要影響。3種蛋白與腫瘤的侵襲性生長(zhǎng)密切相關(guān)，結(jié)腸癌的浸潤(rùn)生長(zhǎng)過(guò)程中受到多種蛋白的調(diào)節(jié)，尤其是其在向肌層生長(zhǎng)過(guò)程中，當(dāng)TBX2、MDM2和Pokemon高表達(dá)，對(duì)肌層的破壞越強(qiáng)，腫瘤生長(zhǎng)越快，腫瘤危險(xiǎn)性明顯增加，分期越高。TBX2、MDM2和Pokemon的表達(dá)與臨床分期密切相關(guān)，由于臨床分期是判斷腫瘤生物學(xué)行為和預(yù)后的重要指標(biāo)，因此三者蛋白高表達(dá)可能提示腫瘤患者預(yù)后較差。TBX2、MDM2和Pokemon蛋白作用過(guò)程中均對(duì)腫瘤異常增殖起明顯作用，也提示蛋白的異常表達(dá)使腫瘤細(xì)胞的增殖是失控狀態(tài)的。TBX2和MDM2在腫瘤進(jìn)展中起協(xié)同作用。二者的聯(lián)系可能與內(nèi)在結(jié)構(gòu)有相似位點(diǎn)相關(guān)，也可能是通過(guò)對(duì)增殖的影響聯(lián)系在一起的。研究認(rèn)為TBX2和MDM2在增殖活性過(guò)程中可能對(duì)細(xì)胞分裂有明顯增效作用〔20〕。此機(jī)制在結(jié)腸腺癌細(xì)胞增殖和分化過(guò)程中表現(xiàn)明顯。當(dāng)TBX2和MDM2有效的活化后，能有效抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞分化和細(xì)胞增殖進(jìn)程，最終引起結(jié)腸腺癌細(xì)胞的異常增生并形成腫瘤，同時(shí)加速腫瘤侵襲和進(jìn)展〔21〕。本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)Pokemon與其他兩種蛋白的協(xié)同作用，因此Pokemon的促癌機(jī)制是另有通路的〔22〕，其調(diào)節(jié)過(guò)程也有待更多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

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