葉 剛 楊 銳 楊懷銘 (四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，四川 雅安 62504)

云南紅景天為景天科植物的根及全草〔1〕，主要產(chǎn)于我國云南省，湖北西部、四川、貴州和西藏有分布。紅景天全草都可入藥，氣微香、味苦、澀、寒，清熱解毒、燥濕，用于肺熱、脈熱、四肢腫脹?，F(xiàn)代醫(yī)藥研究表明紅景天具有廣泛的藥理作用，包括抗缺氧、抗寒冷、抗缺氧、抗疲勞、抗輻射、抗腫瘤、強心、興奮中樞神經(jīng)、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、加強新陳代謝、增強免疫力等作用〔2〕。本文探討云南紅景天對亞急性衰老模型大鼠的抗衰老作用。

1 材料與方法

1.1 藥品 維生素E由青島雙鯨藥業(yè)有限公司提供;氯化鈉注射液由山東齊都藥業(yè)有限公司提供;云南紅景天購自成都市新都區(qū)國際商貿(mào)城荷花池中藥材專業(yè)市場。云南紅景天為其干燥根及根莖，粉碎后過120目篩后進行用純化水進行超聲提取。提取時料液為1∶20，在60℃下提取30 min，過濾，濾液備用。重復(fù)提取3次，合并提取液，置水浴濃縮至浸膏，將浸膏凍干，每克干膏相當(dāng)于生藥2.403 g。

1.2 試劑 超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒和丙二醛(MDA)試劑盒，均由南京建成科技有限公司提供;D-半乳糖，由美國amresco公司提供。

1.3 動物 健康SD大鼠50只，雌雄各半，由四川省人民醫(yī)院實驗動物研究所提供，生產(chǎn)許可證為SCXK(川)2013-15。在溫度為(23±2)℃、濕度為(50±10)%、12 h光照交替的環(huán)境中飼養(yǎng)。自由進食顆粒標(biāo)準(zhǔn)飼料、引用自來水，每天添加飼料、換水1次，每2 d換墊料1次。適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后根據(jù)性別編號，隨機分為空白對照組，模型對照組，云南紅景天小劑量(0.3 g/kg)、中劑量(0.6 g/kg)及大劑量(1.2 g/kg)組，維生素E組(100 mg/kg)。每組10只，雌雄各5只。

1.4 造模及給藥 除空白對照組，其余大鼠皮下注射D-半乳糖造模。大鼠頸部每天皮下注射5%D-半乳糖120 mg/kg 42 d造成衰老模型。空白對照組大鼠頸部皮下注射等體積的氯化鈉注射液。各組大鼠在造模第13天起開始灌胃30 d，云南紅景天小劑量組、中劑量組和大劑量組大鼠分別按0.3、0.6、1.2 g/kg給藥，維生素E組100 mg/kg給藥，正常對照組和模型對照組以自來水進行給藥，各組給藥體積均為10 ml/kg。

1.5 測定指標(biāo) 各組大鼠末次給藥后禁食不禁水24 h，眼底取血，室溫下靜置待血液完全凝固后離心，分離血清進行生化指標(biāo)測定。各大鼠脫臼處死，迅速分離肝臟和大腦組織，氯化鈉溶液沖洗后制備10%組織勻漿，離心，分離得組織勻漿上清液進行生化指標(biāo)測定。SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量分別采用黃嘌呤氧化酶法、二硫代二硝基苯甲酸法和硫代巴比妥酸分光法測定。操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS15.0軟件進行方差分析。

2 結(jié)果

2.1 各組血清SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量比較 與正常對照組相比，模型對照組血清SOD活性和GSH-Px活性顯著降低(P＜0.01)，血清MDA含量顯著升高(P＜0.01)。與模型對照組比較，云南紅景天中劑量組和大劑量組血清SOD活性和GSH-Px活性顯著升高(P均＜0.05)，血清MDA含量顯著降低(P均＜0.05)，并且云南紅景天低劑量組、中劑量組和高劑量組血清SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量差異顯著(P均＜0.05)。見表1。

2.2 各組肝臟組織SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量的比較 與正常對照組比較，模型對照組肝臟組織SOD活性和GSH-Px活性顯著降低(P＜0.01)，肝臟組織MDA含量顯著升高(P＜0.01)。與模型對照組比較，云南紅景天中劑量組和大劑量組大鼠肝臟組織SOD活性和GSH-Px活性顯著升高(P均＜0.05)，血清肝臟組織MDA含量顯著降低(P均 ＜0.05)，并且云南紅景天低劑量組、中劑量組和高劑量組肝臟組織SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量差異顯著(P＜0.05)。見表1。

2.3 各組大腦組織SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量的影響 與正常對照組比較，模型對照組大腦組織SOD活性和GSH-Px活性顯著降低(P＜0.01)，大腦組織MDA含量顯著升高(P＜0.01)。與模型對照組比較，云南紅景天中劑量組和大劑量組大腦組織SOD活性和GSH-Px活性顯著升高(P均＜0.05)，大腦組織MDA含量顯著降低(P均＜0.05)，并且云南紅景天低劑量組、中劑量組和高劑量組大腦組織SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量差異顯著(P均＜0.05)。見表1。

表1 各組大鼠血清、肝臟和大腦組織血清SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量的比較(n=10，s)

表1 各組大鼠血清、肝臟和大腦組織血清SOD活性、GSH-Px活性和MDA含量的比較(n=10，s)

與正常對照組比較:1)P＜0.01;與模型對照組比較:2)P＜0.05，3)P＜0.01;與小劑量組比較:4)P＜0.05，5)P＜0.01;與中劑量組比較:6)P＜0.05，7)P＜0.01

血清肝臟組織大腦組織組別SOD活性(U/ml)GSH-Px活性(U/ml)MDA含量(nmol/ml)SOD活性(U/ml)GSH-PX活性(U/ml)MDA含量(nmol/ml)SOD活性(U/ml)GSH-Px活性(U/ml)MDA含量(nmol/ml)±1.85 1.73±0.28模型對照組 127.46±11.561)63.14±5.251)6.97±0.631)114.35±10.471)72.35±6.341)3.64±0.281)54.28±5.211)8.27±0.941)4.26±0.311)小劑量組 130.29±11.27 66.39±5.62 6.89±0.59 118.73±11.47 75.47±6.75 3.48±0.27 55.79±5.25 8.59±0.84 3.99±0.37中劑量組 142.86±12.662)4)75.52±6.762)5)5.56±0.522)5)132.47±11.763)4)86.42±7.523)5)2.74±0.253)5)63.74±5.433)5)10.29±1.573)5)3.17±0.343)5)大劑量組 158.67±12.843)5)6)85.54±6.532)5)7)5.02±0.483)5)6)145.68±12.173)5)6)95.47±7.743)5)6)2.16±0.293)5)7)69.54±5.573)5)6)13.47±1.743)5)7)2.37±0.293)5)7)維生素E組 164.37±13.743)86.15±6.963)4.87±0.503)148.45±12.763)106.37±8.463)1.76±0.43 71.16±6.243)14.56±1.723)2.14±0.303)正常對照組 173.52±14.73 87.69±6.73 4.75±0.55 156.43±12.33 113.47±8.46 1.56±0.25 76.42±6.73 15.48

3 討論

近年研究表明自由基及其代謝產(chǎn)物引起的脂質(zhì)過氧化可導(dǎo)致老化與老年性疾病〔3〕。機體內(nèi)時刻產(chǎn)生著自由基，但同時SOD、GSH-Px共同組成消除自由基的酶系防御體系，兩者維持平衡。隨著年齡的增長，機體的氧化和抗氧化系統(tǒng)之間平衡發(fā)生變化，抗氧化酶活性降低而導(dǎo)致機體清除氧自由基的能力減弱，體內(nèi)積累的氧自由基使類脂質(zhì)中不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化反應(yīng)，細胞膜結(jié)構(gòu)受到破壞而導(dǎo)致細胞死亡，引起衰老、退行性疾病和腫瘤等的發(fā)生〔4～6〕。SOD和GSH-Px活性是與機體氧化還原狀態(tài)密切相關(guān)〔7〕，是評價機體衰老的重要指標(biāo)。SOD是體內(nèi)清除氧自由基的關(guān)鍵酶，可清除H2O2，·OH和O2-·，其含量的高低可以反映出組織的抗氧化能力。GSH-Px是機體內(nèi)催化過氧化分解的酶，廣泛存在機體內(nèi)。GSH-Px可特異性催化GSH對H2O2的還原反應(yīng)，抑制鹽酸胺腺嘌呤二核苷酸形成HO-，可保護細胞膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性〔8〕。MDA作為脂質(zhì)的過氧化產(chǎn)物，與機體內(nèi)自由基的產(chǎn)生情況和機體組織細胞的脂質(zhì)過氧化程度密切相關(guān)，可反映出機體組織的氧化應(yīng)激的損傷狀態(tài)，也作為評價衰老的重要指標(biāo)之一〔9，10〕。

D-半乳糖衰老模型大鼠是研究藥物抗衰老的重要動物模型〔11〕，得到自由基衰老學(xué)說的支持和驗證，常用于衰老機制研究和抗氧化劑、延緩衰老藥物的藥效學(xué)評價。本研究說明衰老大鼠造模成功。云南紅景天為景天科植物的根及全草，故又名云南景天、三臺觀、鐵腳蓮〔1〕。云南紅景天主含紅景天苷，含量約為0.76%。云南紅景天可能通過提高機體抗氧化和清除機體自由基能力而延緩衰老，其抗衰老的物質(zhì)基礎(chǔ)及其分子機制需進一步研究。

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