孫亞東，馬 彥，姜艷靜，趙巧丹，關 紅，韓 艷 (吉林省人民醫(yī)院，吉林 長春 130021)

糖尿病視網膜病變(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病(diabetes mellitus，DM)的重要并發(fā)癥，是導致患者視力嚴重下降甚至失明的主要原因。因此探索DR發(fā)病機理的研究及治療方法已成為當務之急。本研究觀察DM大鼠早期視覺電生理改變及生長抑素(somatostatin，SS)水平的動態(tài)變化并進行初步探討。

1 資料與方法

1.1 實驗材料:鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)購自美國Sigma公司;血糖儀購自德國拜耳公司;Wistar雄性大鼠購自吉林大學實驗動物中心;SS放射免疫試劑盒購自北京?？其J生物技術公司。

1.2 分組及糖尿病動物模型制備［1］:選用Wistar雄性大鼠30只，體重(200±25)g，約8周齡，檢眼鏡檢查眼底無改變。實驗過程中自由飲水、攝食，自然光照適應性喂養(yǎng)l周后，隨機等分為正常對照組與糖尿病實驗組，各15只。制模:將糖尿病大鼠禁食水12 h后腹腔注射STZ 55 mg/kg(用0.1 mol/L的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液稀釋，pH值4.5)。給藥后48 h取尾靜脈血用血糖儀測血糖，將空腹血糖≥16.7 mmol/L的大鼠定為糖尿病模型。造模成功后不予降糖藥物控制血糖。分別于建模前0周、建模后1周、2周、4周、6周、8周監(jiān)測大鼠的體質量、進食量、飲水量、ERG及SS水平。

1.3 視網膜電圖(electroretinogram，ERG)檢查［2］:暗適應3 h以上的大鼠，ip速眠新注射液(又名846合劑，長春解放軍農牧大學獸醫(yī)研究所制)麻醉，劑量0.8 ml/kg，將麻醉狀態(tài)的大鼠固定于有機玻璃實驗臺上，左眼滴5 g/L的托品酰胺散瞳，尾部、左側頰部和左眼角膜表面分別安放接地電極、參考電極和記錄電極，并在角膜表面滴10 g/L的甲基纖維素。參考電極和接地電極為不銹鋼針制成，記錄電極為0.2 mm銀-氯化銀制成的環(huán)形電極，采用RETI-port系統(tǒng)(Roland Consult，德國)，進行桿細胞反應(rod-response)和最大反應(max-response)記錄，桿細胞反應光強為0.011 cd·S/m2。觀察ERG a波及b波潛伏期和幅值的變化。

1.4 SS水平測定:眼眶取血，置肝素抗凝管中，立即加入抑肽酶混勻，離心取上清低溫保存待測。分別于建模前0周、建模后1周、2周、4周、6周、8周監(jiān)測大鼠的SS水平。

1.5 統(tǒng)計學方法:應用RETI-port系統(tǒng)進行波形潛伏期和幅值的測量，采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數±標準差(±s)表示，進行組間及組內自身前后t檢驗，計數資料以率或百分比表示，采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組血糖比較:DM模型組造模均成功，無動物被剔除。對照組大鼠血糖值波動于正常值范圍內;實驗組大鼠血糖值符合模型要求，與試驗前比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，1周、2周、4周、6周、8周兩組大鼠血糖對比均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組大鼠的血糖比較(±s，mmol/L)

表1 兩組大鼠的血糖比較(±s，mmol/L)

注:與0周比較，①P＜0.05;與對照組比較，②P＜0.05

組別 例數 0周 1周 2周 4周 6周 8周對照組 15 3.1±0.5 3.3±0.4 3.5±0.3 4.1±0.5 3.7±0.3 3.9±0.4實驗組 15 3.3±0.3 17.7±0.3①② 19.1±0.4①② 21.3±0.3①② 19.5±0.3①② 18.9±0.4①②

表2 桿細胞反應a波及b波的潛伏期和幅值(n=15，±s)

表2 桿細胞反應a波及b波的潛伏期和幅值(n=15，±s)

注:與對照組比較，①P＜0.05

時間(周) latent period of a-wave(ms)對照組 實驗組latent period of b-wave(ms)對照組 實驗組amplitude of a-wave(μv)對照組 實驗組amplitude of b-wave(μv)對照組 實驗組0 39.7±5.4 39.6±5.6 62.3±5.4 62.1±5.5 17.5±3.7 17.4±3.9 30.4±5.5 30.5±5.1 1 38.3±5.9 42.5±5.7① 61.9±5.5 69.1±4.9① 17.3±3.9 17.5±3.7 30.5±5.0 31.4±5.2 2 37.7±5.4 45.1±5.4① 61.7±5.1 72.3±5.1① 16.9±4.5 17.5±4.5 31.2±4.5 30.4±5.0 4 39.5±5.1 46.7±5.1① 62.5±4.7 76.8±5.4① 17.6±3.5 17.5±4.7 30.3±5.1 29.9±5.3 6 39.3±5.5 47.9±5.0① 62.3±5.5 76.9±5.1① 17.4±3.7 14.1±4.1① 30.3±5.4 20.5±4.9①8 38.9±5.3 49.1±5.2① 62.1±4.9 79.7±4.9① 17.5±4.1 10.5±3.9① 30.7±5.2 19.1±5.0①

2.2 ERG檢查:與對照組比較，建模后1周實驗組大鼠桿細胞反應、最大反應的a波和b波的潛伏期即出現(xiàn)延長(P＜0.05)，但振幅于第6周時才開始出現(xiàn)下降(P＜0.05)。見表2、3。

2.3 兩組SS水平比較:1周、2周、4周、6周、8周兩組大鼠生長抑素對比均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表4。

表3 最大反應a波及b波的潛伏期和幅值(n=15，±s)

表3 最大反應a波及b波的潛伏期和幅值(n=15，±s)

注:與對照組比較，①P＜0.05

時間(周) latent period of a-wave(ms)對照組 實驗組latent period of b-wave(ms)對照組 實驗組amplitude of a-wave(μv)對照組 實驗組amplitude of b-wave(μv)對照組 實驗組0 25.1±5.4 25.3±5.1 55.4±5.5 55.2±5.7 13.1±3.7 13.1±3.7 26.4±4.5 26.1±4.4 1 25.5±5.1 30.2±5.4① 57.4±4.9 63.7±4.9① 13.5±3.9 13.5±3.2 25.9±4.9 26.4±5.0 2 24.9±5.3 34.3±5.7① 56.5±5.1 64.5±5.1① 13.3±4.1 13.4±3.9 26.3±4.7 25.9±5.5 4 25.2±5.1 37.5±4.7① 57.5±4.7 67.1±5.3① 13.7±4.0 13.5±4.2 26.7±4.5 26.0±5.1 6 26.1±4.7 39.1±5.3① 55.3±5.5 67.7±5.3① 14.1±3.5 10.5±3.7① 26.1±4.6 17.4±5.5①8 25.5±5.0 40.4±4.7① 54.8±4.9 69.5±4.7① 13.9±3.8 7.1±4.2① 26.0±4.3 15.5±4.3①

表4 兩組大鼠的SS水平比較(±s，pg/ml)

表4 兩組大鼠的SS水平比較(±s，pg/ml)

注:與對照組比較，①P＜0.05

組別 例數 0周 1周 2周 4周 6周 8周對照組 15 27.5±6.3 28.3±6.1 27.9±6.1 28.0±6.5 28.1±5.9 28.3±5.8實驗組 15 27.6±6.2 17.7±5.7① 15.6±5.5① 14.9±6.1① 13.2±5.9① 11.7±5.7①

3 討論

DM是威脅人類健康的四大疾病之一。DR的形成是多步驟、多因素的復雜生物學過程，而糖代謝紊亂是產生DR的根本原因。研究發(fā)現(xiàn)［3］視網膜神經元功能異常出現(xiàn)最早，而一些可視性的病理變化一般在建模成功后幾個月方可觀察到［4］。本研究觀察糖尿病大鼠早期ERG改變及SS水平的動態(tài)變化，以了解其在早期DR的作用。

SS是一類能抑制生長激素釋放的肽類物質，自從1968年發(fā)現(xiàn)機體內有SS的存在后，隨著免疫放射及免疫細胞化學等檢測技術的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)除了下丘腦、中樞神經外，體內其它一些部位也能產生SS，其中在胰腺及胃腸道能分泌SS的細胞密度最大，下丘腦、中樞神經次之，周圍神經系統(tǒng)、甲狀腺、腎上腺等腺體以及眼部組織也有這種細胞的分布［5］?，F(xiàn)已證明，SS不僅具有激素的作用，同時還具有神經遞質的生物活性作用，參與機體的認知、記憶、運動和行為等諸多生理活動的調節(jié)。許多研究表明DM患者及由四氧嘧啶或STZ誘導形成的DM模型鼠胰島D細胞有形態(tài)學改變和SS分泌異常［6-8］，提示SS及其類似物與DM有密切關系。視覺電生理檢查是反映視網膜各個層次細胞功能狀態(tài)的檢查。a波反映光感受器細胞的生物電活動，是否存在及其幅值高低由光刺激強度及光感覺器完整性決定;而b波通常被認為起源于視網膜雙極細胞，是一個靈敏而可靠的診斷視網膜功能的客觀指標。本實驗研究發(fā)現(xiàn)1周、2周、4周、6周、8周兩組大鼠血糖對比均有統(tǒng)計學意義，造模后第1wk實驗組大鼠桿細胞反應、最大反應的a波和b波的潛伏期即有顯著延長，SS水平下降，但振幅沒有變化。至第6周時a、b波振幅開始出現(xiàn)減低，第8周時減低尤為明顯，這為DR的早期發(fā)現(xiàn)提供了有利線索。

我國DM患者日漸增多，DR是DM發(fā)展的一個嚴重階段，其發(fā)生與某些生長因子的水平異常有關，SS類藥物已引起內分泌及眼科各臨床學科的極大關注。目前對于早期DR的研究尚處于探索階段，ERG潛伏期延長、振幅降低及SS水平下降有可能成為監(jiān)測DR早期發(fā)展的指標之一，為DR早期發(fā)現(xiàn)早期治療提供線索，有廣泛的臨床應用前景及積極的社會意義。

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