尚 濤，田盼麗 (寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院，寧夏 銀川 750002)

國內(nèi)外研究表明，絕經(jīng)后血漿同型半胱氨酸(Hcy)的水平顯著上升，高同型半胱氨酸血癥(HHcy)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一個重要的、獨(dú)立的心血管疾病危險因素，可引起動脈粥樣硬化病變，但其具體的致病機(jī)制尚未完全明了。本研究探討HHcy是否通過誘發(fā)脂代謝紊亂及NO水平的改變發(fā)揮致動脈粥樣硬化作用效應(yīng)?，F(xiàn)報告如下。

1 材料和方法

1.1 材料:同型半胱氨酸ELISA試劑盒:美國CUSABIO生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品。NO試劑盒:南京建成生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)動物及模型建立:健康4個月月齡雌性SD大鼠24只，體重(240±20)g，購自寧夏醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)院。各組實(shí)驗(yàn)大鼠在無菌條件下行戊巴比妥鈉60 mg/kg腹腔注射麻醉后，取下腹正中切口，切除雙側(cè)卵巢，結(jié)扎輸卵管及伴行血管，沖洗閉合傷口。其余8只不切除卵巢，只切除相同大小的卵巢周圍脂肪組織，作為假手術(shù)組。

1.2.2 分組及處理:①假手術(shù)組(SHAM組);②去卵巢組(OVX組);③蛋氨酸組(MET組):去卵巢術(shù)后1周，給予蛋氨酸1 g/(kg·d)灌胃，術(shù)后1周，SHAM、OVX組灌服蒸餾水，MET組開始蛋氨酸灌胃，共持續(xù)9周。實(shí)驗(yàn)期間所有大鼠置同一室內(nèi)，自由飲水，進(jìn)食普通飼料，每周稱重1次，依體重變化調(diào)整給藥劑量。

1.2.3 血清Hcy測定:所有動物術(shù)后10周腹主動脈穿刺取血，分離血清，-20℃保存，采用ELISA法測定，檢測方法按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.2.4 血脂測定:血清標(biāo)本采用全自動生化分析儀測定血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平。

1.2.5 血清NO的測定:使用硝酸還原酶法檢測檢測NO的水平。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血清Hcy水平:與假手術(shù)組相比，去卵巢術(shù)后大鼠血清tHcy濃度明顯升高(P＜0.01);給予蛋氨酸負(fù)荷，去勢大鼠的血清tHcy濃度進(jìn)一步升高(P＜0.01)。詳見表1。

表1 各組大鼠血清Hcy水平

2.2 大鼠血脂水平:與SHAM組相比，OVX組、MET組血清TC、LDL-C濃度明顯升高(P＜0.01)，HDL-C濃度降低(P＜0.05，P＜0.01);各組TG比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05);經(jīng)相關(guān)分析表明，大鼠血清tHcy濃度與血清TC、LDL-C呈正相關(guān)(r=0.295，P=0.023;r=0.367，P=0.006)。詳見表2。

表2 各組大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C的比較(±s，mmol/L)

表2 各組大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C的比較(±s，mmol/L)

注:與SHAM組比較，①P＜0.05;與OVX組比較，②P＜0.05

組別 動物數(shù)TC TG LDL-C HDL-C SHAM組8 1.83±0.15 1.73±0.31 0.42±0.11 1.91±0.21 OVX組 8 2.42±0.20①1.80±0.35 0.78±0.21① 1.53±0.22①M(fèi)ET組 8 2.69±0.18①1.81±0.32 0.95±0.19①1.18±0.21①②

2.3 大鼠NO水平:與假手術(shù)組相比，去卵巢術(shù)后大鼠血清NO濃度明顯降低(P＜0.01);給予蛋氨酸負(fù)荷，去勢大鼠的血清NO濃度進(jìn)一步降低(P＜0.01)。經(jīng)相關(guān)分析表明，大鼠血清Hcy濃度與血清NO呈負(fù)相關(guān)(r=-0.424，P=0.002)。詳見表3。

表3 各組大鼠血清NO濃度的比較(±s)

表3 各組大鼠血清NO濃度的比較(±s)

注:與SHAM組比較，①P＜0.05;與OVX組比較，②P＜0.05

組別 動物數(shù) NO(μmol/ml)SHAM組53.24±7.51 OVX組 8 35.39±2.36①M(fèi)ET組 8 22.14±6.15 8①②

3 討論

絕經(jīng)后，除過人們所熟知的激素水平的改變外，血漿同型半胱氨酸的水平也顯著上升，去卵巢大鼠經(jīng)蛋氨酸負(fù)荷后，蛋氨酸在體內(nèi)可代謝為同型半胱氨酸而進(jìn)一步加重高同型半胱氨酸血癥(HHcy)［1］，HHcy是近年來新發(fā)現(xiàn)的一個重要的、獨(dú)立的心血管疾病危險因素，可引起動脈粥樣硬化病變［2］。本研究結(jié)果表明，大鼠去卵巢后血漿tHcy濃度升高，去勢大鼠給予蛋氨酸負(fù)荷9周，可充分誘導(dǎo)HHcy。

眾所周知，脂代謝異常是動脈粥樣硬化和冠狀動脈粥樣硬化性心臟病的獨(dú)立危險因素。高同型半胱氨酸血癥影響血管內(nèi)皮細(xì)胞膽固醇的代謝，使血管內(nèi)皮細(xì)胞羥甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMGCR)mRNA和蛋白表達(dá)增強(qiáng)，引起脂代謝紊亂，高脂血癥通過脂毒性損傷內(nèi)皮細(xì)胞，受損的內(nèi)皮細(xì)胞分泌趨化因子和黏附分子，如單核細(xì)胞趨化蛋白-1、E-選擇素、細(xì)胞間黏附分子等來調(diào)節(jié)單核細(xì)胞黏附和遷移，單核細(xì)胞黏附于血管EC并進(jìn)一步遷移進(jìn)入血管壁，攝取脂質(zhì)轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞，泡沫細(xì)胞增加是AS形成早期的重要事件，在AS的形成中起關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給予蛋氨酸的去卵巢大鼠血清TC、LDL-C明顯升高，而HDL-C明顯降低，且Hcy濃度與血清TC、LDL-C呈正相關(guān)，進(jìn)一步說明高同型半胱氨酸血癥可引起脂代謝紊亂，促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生。

內(nèi)皮損傷是動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制之一，而內(nèi)皮損傷必然導(dǎo)致內(nèi)皮功能失調(diào)，后者則表現(xiàn)為NO生成減少。NO作為調(diào)節(jié)心血管系統(tǒng)的主要細(xì)胞信使分子和效應(yīng)分子，在體內(nèi)執(zhí)行重要的生理功能，包括擴(kuò)張血管、抗血小板聚集與活化、抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖、抗氧化和抑制炎性反應(yīng)介質(zhì)的表達(dá)等作用。本研究顯示給予蛋氨酸的去卵巢大鼠NO的合成與釋放減少，經(jīng)相關(guān)分析表明，血清Hcy濃度與血清NO水平呈負(fù)相關(guān)。

綜上所述，本研究利用氨酸負(fù)荷去卵巢大鼠模型，觀察了大鼠去卵巢后給予蛋氨酸負(fù)荷血漿tHcy、血脂及NO水平的變化，反映了高同型半胱氨酸血癥通過引起脂代謝紊亂及減少NO的表達(dá)，參與了動脈粥樣硬化的病理過程。

［1］ Meenakshi S，Santosh KR，Manisha T，et al.Effect of hyperhomocysteinemia on cardiovascular risk factors and initiation of atherosclerosis in Wistar rats［J］.European Journal of Pharmacology，2007，574(1):49.

［2］ 李靜梅，高 奮，肖傳實(shí).心肌梗死患者同型半胱氨酸與冠心病傳統(tǒng)危險因素的比較［J］.中國動脈硬化雜志，2001，9(2):137.