王 濤，劉躍華，鄭和義，左亞剛，方 凱

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院 皮膚科， 北京 100730)

紫外線光療抑制早期蕈樣肉芽腫皮損組織中BCL-2、STAT3、CCL17和CCL27的表達(dá)

王 濤，劉躍華*，鄭和義，左亞剛，方 凱

(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院 皮膚科， 北京 100730)

BCL-2是研究最早的與細(xì)胞凋亡相關(guān)的一類原癌基因。目前有關(guān)治療前后BCL-2蛋白表達(dá)變化的研究仍較少，探討治療前后BCL-2蛋白表達(dá)的變化是目前需要進(jìn)一步研究的問題。STAT3是信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子家族中與腫瘤關(guān)系最密切的基因之一，STAT3持續(xù)活化與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后相關(guān)。CCL17和CCL27在淋巴細(xì)胞歸巢機(jī)制中起重要作用，與受體結(jié)合可使得T淋巴細(xì)胞向皮膚遷移，在蕈樣肉芽腫(Mycosis Fungoides,MF)發(fā)病機(jī)制起重要作用。本研究檢測(cè)BCL-2，STAT3，CCL17和CCL27早期MF經(jīng)紫外線光療治療前后表達(dá)的變化。

1 材料與方法

1.1 材料：1)主要實(shí)驗(yàn)試劑 BCL-2(工作液BCL-2-100，中杉金橋公司)；STAT3和CCL27(濃度分別為1∶50和1∶100,SANTA CRUZ公司)；CCL17(1∶1200，博奧森公司)。2)對(duì)象：24例早期蕈樣肉芽腫患者經(jīng)PUVA或NB-UVB及PUVA治療緩解后聯(lián)合NB-UVB等3種治療前后48份皮損處石蠟包埋組織標(biāo)本。整形外科整形者眼皮組織為陰性對(duì)照，以預(yù)實(shí)驗(yàn)中陽性標(biāo)本為陽性對(duì)照。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法：采用免疫組化染色法，按照試劑盒說明書操作，檢測(cè)BCL-2、STAT3、CCL17和CCL27的表達(dá)。根據(jù)文獻(xiàn)，結(jié)果采用雙盲判定和評(píng)分。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用Pearson卡方檢驗(yàn)，治療后陽性率與復(fù)發(fā)率之間比較采用Sprearmen相關(guān)性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 BCL-2蛋白在治療前后皮損組織中的表達(dá):治療前BCL-2在真皮浸潤(rùn)的腫瘤性淋巴細(xì)胞中陽性表達(dá)共22例，10例(+)，9例(++)，3例(+++)，無表達(dá)2例；治療后BCL-2表達(dá)顯著降低，陽性僅12例，其中9例(+)，3例(++)，無表達(dá)12例(Plt;0.05)(圖1)。

2.2 CCL-17蛋白在治療前后皮損組織中的表達(dá)：治療前CCL-17在角質(zhì)形成細(xì)胞中陽性表達(dá)共16例，15例(+)，1例(++)，無表達(dá)8例；治療后CCL-17表達(dá)顯著降低，陽性6例均為(+)，無表達(dá)18例(Plt;0.05)。

2.3 CCL-27蛋白在治療前后皮損組織中的表達(dá)：治療前CCL-27在角質(zhì)形成細(xì)胞陽性表達(dá)共18例，16例(+)，1例(++)，1例(+++)，無表達(dá)6例；治療后CCL-27表達(dá)顯著降低，陽性7例均為(+)，無表達(dá)17例(Plt;0.05)。

2.4 STAT3蛋白在治療前后表皮和淋巴細(xì)胞中的表達(dá)：治療前STAT3在角質(zhì)形成細(xì)胞中陽性表達(dá)共19例，15例(+)，3例(++)，1例(+++)，無表達(dá)5例；治療后STAT3表達(dá)顯著降低，陽性11例均為(+)，無表達(dá)13例(Plt;0.05)；治療前STAT3在活化的腫瘤性淋巴細(xì)胞表達(dá)共7例，6例(+)，1例(++)，無表達(dá)17例；治療后無顯著性降低，陽性3例均為(+)，無表達(dá)21例。(圖2)

圖1 BCL-2在腫瘤性淋巴細(xì)胞中陽性表達(dá)Fig 1 Expression of BCL-2 protein in the tumor lymphocytes (×200)

圖2 STAT3蛋白在治療前后表皮和淋巴細(xì)胞中的表達(dá)Fig 2 Expressions of STAT3 proteins in the keratinocytes and tumor lymphocytes

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，紫外線光療后BCL-2的表達(dá)下降，說明光療可能通過抑制BCL-2的表達(dá)而減少親表皮的T細(xì)胞出現(xiàn)凋亡障礙的發(fā)生。有作者發(fā)現(xiàn)，UVA和UVB通過不同的機(jī)制引起細(xì)胞凋亡，P53和BCL-2表達(dá)平衡在紫外線誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中起重要作用[1]。本研究中，UVB和PUVA組之間BCL-2表達(dá)陽性率有所下降，但UVB組中有兩例患者在治療后BCL-2表達(dá)反而增加，可能的原因是UVB并不直接降低BCL-2的表達(dá)，可能存在其他方面的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，紫外線光療后CCL17和CCL27表達(dá)下降。有研究認(rèn)為，UVA抑制角質(zhì)形成細(xì)胞中CCL17 mRNA表達(dá)和蛋白分泌存在劑量依賴關(guān)系可能是紫外線光療的作用機(jī)制[2]。有研究發(fā)現(xiàn)治療后CCL27正常或者正常上限以內(nèi)有較低的復(fù)發(fā)率和較長(zhǎng)時(shí)間的平均無病生存期，CCL27 含量在治療后較高者，更易復(fù)發(fā)[3]。

本研究結(jié)果顯示，在早期MF皮損中，表皮角質(zhì)形成細(xì)胞可出現(xiàn)STAT3陽性表達(dá)，而僅部分的腫瘤性淋巴細(xì)胞出現(xiàn)陽性表達(dá)，但二者均隨病情分期加重而陽性率增高。皮膚經(jīng)UVB照射后引起STAT3活化，可降低UVB引起的細(xì)胞凋亡反應(yīng)，并出現(xiàn)隨時(shí)間增加而遞增的白細(xì)胞浸潤(rùn)和增生[4]。

因此，紫外線光療可能通過以下機(jī)制治療早期MF：下調(diào)BCL-2、STAT3等抗凋亡蛋白的表達(dá)來降低早期MF皮損中腫瘤細(xì)胞的活性，來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡；下調(diào)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)活化的STAT3蛋白含量，減少了表皮內(nèi)浸潤(rùn)的T細(xì)胞的數(shù)量；下調(diào)趨化因子CCL17和CCL27的表達(dá)，從而抑制了T細(xì)胞向表皮內(nèi)浸潤(rùn)，較少了惡變的可能性。

[1] Zhou C, Yang Q, Trempe JP. Enhancement of UV-induced cytotoxicity by the adeno-associated virus replication proteins[J]. Biochim Biophys Acta, 1999,1444:371-383.

[2] Zheng X, Nakamura K, Tojo M,etal. Ultraviolet A irradiation inhibits thymus and activation-regulated chemokine (TARC/CCL17) production by a human keratinocyte HaCaT cell line[J]. Eur J Dermatol, 2003,13:348-353.

[3] Goteri G, Rupoli S, Campanati A,etal. Lesional skin chemokine CTACK/CCL27 expression in mycosis fungoides and disease control by IFN-alpha and PUVA therapy[J]. Am J Transl Res, 2009,1:203-210.

[4] Ahsan H, Aziz MH, Ahmad N. Ultraviolet B exposure activates Stat3 signaling via phosphorylation at tyrosine705 in skin of SKH1 hairless mouse: a target for the management of skin cancer?[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2005,333:241-246.

2013-10-26

2013-12-13

*通信作者(correspondingauthor)： yuehualiu@263.net

1001-6325(2014)02-0249-02

R 758.69

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