李曉達，郭偉英

(遼寧醫(yī)學院藥學院，遼寧 錦州 121001)

人參歸脾丸是由人參80 g、白術(麩炒)160 g、茯苓160 g、甘草(蜜炙)40 g、黃芪(蜜炙)80 g、當歸160 g、木香40 g、遠志(去甘草炙)160 g、龍眼肉160 g、酸棗仁(炒)80 g 10 味中藥組成［1］，用于益氣補血，健脾養(yǎng)心 用于心脾兩虛，氣血不足所致的心悸，怔忡，失眠健忘，食少體倦，面色萎黃以及脾不統(tǒng)血所致的便血崩漏帶下諸癥。炙黃芪協(xié)助人參有益氣補脾的功效。黃芪甲苷是黃芪中的重要成分，通過測定黃芪甲苷的含量來達到對人參歸脾丸的質量控制。因此本文測定了人參歸脾丸中黃芪甲苷的含量。為人參歸脾丸的質量控制提供更全面有效的方法。

1 儀器與材料

高效液相色譜儀(日本日立公司)，L-2130四元梯度泵，D-2000 Elite 色譜工作站，蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)(美國奧泰公司)。乙腈、甲醇和甲酸均為色譜純，重蒸水為自制。黃芪甲苷對照品 (上海源葉生物科技有限公司，批號:20120501，純度＞98.0%)。3 批市售人參歸脾丸(購自錦州藥店，規(guī)格9 g 丸批號:0010267，2013188，3010441);10 味單味藥材(購自錦州藥店)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱 色譜柱Agilent TC C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)柱溫25 ℃，流動相:甲醇-水 (75∶25)，流速1.0 mL·min-1;ELSD 參數(shù):漂移管溫度90 ℃，載氣流量1.6 L·min-1，載氣為空氣;分離度均＞1.5;理論板數(shù)按黃芪甲苷計算不低于3 000;進樣量10 μL。在上述色譜條件下各成分色譜峰峰型對稱，黃芪甲苷與其他峰能夠基線分離。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的黃芪甲苷對照品0.32 mg，置于1 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液，備用。

2.2.2 樣品溶液的制備 取本品18 g，加入甲醇100 mL 超聲提取2 次，每次30 min，合并提取液，減壓濃縮至干，加水10 mL 超聲溶解，用水飽和的正丁醇萃取3 次，合并正丁醇層，減壓濃縮至干，加10 mL 甲醇溶解，過0.45 μm 濾膜，備用。

2.2.3 陰性樣品制備 按處方比例及工藝，制備不含黃芪的陰性樣品，再按“2.2.2”項下方法制備成陰性樣品溶液，備用。

2.3 方法學驗證

2.3.1 標準曲線的制備 分別精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇配制成濃度分別為600、450、300、150、75、37.5 μg·mL-1的系列溶液，按上述色譜條件分別進樣測定。以溶液濃度的自然對數(shù)(X)為橫坐標，峰面積積分值的自然對數(shù)(Y)為縱坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y=0.942 1X +6.263 4 (r=0.999 8)。結果表明黃芪甲苷的含量在37.5～600 μg·mL-1范圍內與峰面積積分值呈良好線性關系。

2.3.2 精密度考察 精密吸取同一對照品溶液，按上述色譜條件重復進樣6 次，每次10 μL，測定黃芪甲苷峰面積積分值。結果顯示保留時間穩(wěn)定，峰面積的RSD=0.76% (n=6)，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復性考察 取同一批號人參歸脾丸6 份，在上述色譜條件下測定，計算黃芪甲苷含量的RSD 為0.61%，結果表明該方法重復性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性考察 精密吸取同一對照品溶液，室溫下放置，于0，2，4，6，8，12 h 按上述色譜條件進樣分析。測得黃芪甲苷峰面積的RSD 為1.1%。結果表明黃芪甲苷在12 h 內穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率 精密稱取已知含量的人參歸脾丸1 g，分別定量加入黃芪甲苷對照品，按上述色譜條件測定，計算加樣回收率。結果:見表1，平均回收率為98.8%，RSD=3.4%。

2.4 樣品含量測定 取不同批號的樣品，按上述色譜條件測定。結果見表2。樣品和標準品的高效液相色譜圖見圖1。

表1 人參歸脾丸回收率實驗

表2 人參歸脾丸中黃芪甲苷測定結果

3 討 論

人參歸脾丸是較為常用的中成藥，在部頒標準中只有顯微鑒別和當歸的薄層鑒別。繆金財［2］利用薄層色譜法對人參歸脾丸中的人參和白術進行了定性鑒別。林德平［3］等對人參歸脾丸中的黃芪、甘草、酸棗仁、木香分別薄層定性分析。尚春英［4］等通過薄層色譜法對人參歸脾丸中的白術、甘草進行了鑒別。在對人參歸脾丸的研究中缺乏對指標成分的定量分析，這對藥品的質量控制帶來了很大的不便。

對于檢測器的選擇，黃芪甲苷為黃芪中的主要成分，但黃芪甲苷在紫外檢測器上只有末端有吸收，噪音大，靈敏度降低，因此對于黃芪甲苷的含量測定多采用蒸發(fā)光散射檢測器［5-7］。蒸發(fā)光散射檢測器為通用型質量檢測器，檢測時流動相在檢測器內揮發(fā)成氣體，樣品組分形成氣溶膠，進入檢測室產(chǎn)生響應，響應大小由被分析物質的顆粒的數(shù)量和大小決定，從而獲得理想的基線和檢測的靈敏度，克服了紫外末端檢測的不足［8］。

由于所研究的中成藥中有10 味中藥，成分復雜，在流動相選擇和提取工藝方面都進行了詳細的考察。對于流動相的選擇，選取乙腈、水和甲醇水比例分別為(10∶90、20∶80、32∶68、50∶50、75∶25)結果以75∶25 分離效果好，黃芪甲苷能與其他成分達到基線分離，由于乙腈價格較貴和毒性較大，確定甲醇水為流動相。對于提取方法的選擇，我們考察了甲醇提取直接檢測和用正丁醇萃取后再檢測，前者無法檢測到黃芪甲苷，后者黃芪甲苷與其他成分分離效果較好。

本實驗研究的方法能夠快速，方便，準確的檢測人參歸脾丸中黃芪甲苷的含量，為人參歸脾丸的質量控制提供參考。

圖1 人參歸脾丸樣品高效液相色譜圖

［1］衛(wèi)生部頒藥品標準.中藥成方制劑［S］.第4 冊.1991:6.

［2］繆金財，劉峰，宋剛.人參歸脾丸主要成分的鑒別［J］.中國藥業(yè)，2008，17 (16):40.

［3］林德平，曲永梅，李亞榮.人參歸脾丸的薄層色譜鑒別［J］.中國中醫(yī)藥雜志，2008，6 (5):24-26.

［4］尚春英，段佳蔽，胡齊莉.人參歸脾丸的質量標準研究［J］.黑龍江醫(yī)藥，2006，19 (4):253-254.

［5］董焱，何英翠，沈文娟，等.盆炎凈顆粒中黃芪甲苷HPLC-ELSD 含量測定方法的建立［J］.中南藥學，2013，11(1):55-57.

［6］景鵬，梁曉，高亞妮，等.益髓顆粒中黃芪甲苷的含量測定研究［J］.陜西中醫(yī)，2014，35 (2):230-231.

［7］劉浩文，劉嘉儀，楊妙榮，等.黃芪藥材中黃芪甲苷含量測定的兩種方法的比較研究［J］.中藥新藥與臨床藥理，2011，22 (6):659-662.

［8］李存金，郭飛宇.HPLC-ELSD 測定復方益母草膠囊中鹽酸水蘇堿的含量［J］.中國現(xiàn)代應用藥學，2013，30 (1):72-74.