劉元媛，于世海，胡佳，何濤

(1.遼寧醫(yī)學(xué)院，遼寧 錦州 121001;2.遼寧康辰藥業(yè)有限公司，遼寧 丹東 118301;3.錦州市藥品檢驗所，遼寧 錦州 121000)

氣相色譜法是測定藥物揮發(fā)性成分的主要分析手段，在藥物分析方法中占有重要地位。我校已開展了近十年的氣相色譜分析實驗，但方法陳舊，并且實驗用藥已經(jīng)退出市場，需要選擇新的實驗方法及藥物來滿足學(xué)生實驗的教學(xué)需要。本課題組進行了多項研究，先后嘗試了藿香正氣水、復(fù)方丹參片、十滴水中揮發(fā)性成分的測定研究，并摸索了在不同氣相色譜柱上的分離效果［1］，最終確立了采用SE-54 毛細管柱測定十滴水中樟腦和桉油精含量的方法。該方法簡便，精密度、重復(fù)性高，陰性液無干擾，可應(yīng)用于學(xué)生實驗教學(xué)。

1 儀器與試藥

日本島津GC-2010 氣相色譜儀;AR2140 電子分析天平。樟腦對照品(北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術(shù)研究院，批號76-22-2);桉油精(中國藥品生物制品檢定所，批號:110788-201105);十滴水樣品(廣西慧寶源制藥有限公司，批號 130325;北京海德潤制藥有限公司，批號130403);乙純(分析純)，水為重蒸水。

2 實驗條件

2.1 色譜條件的選擇［1-5］

色譜柱:SE-54 石英毛細管柱(30 m ×0.25 mm ×0.25 μm);程序升溫(70 ℃～160 ℃，升溫速率為8 ℃/min);汽化室溫度230 ℃;檢測器:FID，溫度240 ℃;載氣:高純氮氣 (壓力為120 kP);分流進樣 (分流比為40∶1);內(nèi)標(biāo)物為環(huán)己酮，進樣量1 μL。

2.2 內(nèi)標(biāo)溶液制備

精密量取環(huán)己酮適量，加70% 乙醇制成每1 mL 含10.481 mg 的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3 對照品溶液制備

精密稱取樟腦、桉油精對照品適量，加70%乙醇制成每1 mL 含樟腦0.756 mg、含桉油精0.831 mg 的溶液，作為對照品溶液。

2.4 供試品溶液制備

取十滴水樣品10 瓶，混勻，精密量取2.0 mL，置25 mL 量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液2.0 mL，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 陰性液的制備

按照處方工藝，制備缺樟腦和桉油精的樣品，并按照供試品溶液的制備方法處理樣品，得到樟腦和桉油精的陰性液。

2.6 方法學(xué)考察

2.6.1 系統(tǒng)適用性實驗 分別取對照品溶液及供試品溶液各1 μL，按“2.1”項下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄氣相色譜峰。結(jié)果顯示，溶劑峰、環(huán)己酮峰、桉油精峰、樟腦峰均完全分離，理論塔板數(shù)按樟腦計不低于50 000。

2.6.2 線性關(guān)系考察 精密取樟腦、桉油精對照品適量，加70% 乙醇制成每1 mL 含樟腦5.671 1 mg、含桉油精7.479 0 mg 的溶液，分別精密量取該溶液1.0、0.8、0.6、0.4、0.2 mL 置5 mL 量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)液0.4 mL，加70%稀釋至刻度，搖勻。精密吸取各溶液1 μL，按“2.1”項下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜峰。以對照品濃度為橫坐標(biāo)，對照品與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程分別為:Y=2.091X-0.002 9，r=0.999 8，Y=1.201 9X-0.183 1，r=0.999 7。結(jié)果顯示，樟腦在0.226 8～1.134 2 mg·mL-1范圍內(nèi)線性良好，桉油精在0.299 2～1.495 8 mg·mL-1范圍內(nèi)線性良好。

2.6.3 精密度試驗 精密吸取對照品溶液1 μL，按“2.1”項下色譜條件注入氣相色譜儀，重復(fù)進樣5 次，測定樟腦、桉油精峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值，求得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 分別為0.6%、0.5%。

2.6.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一供試品溶液1 μL，分別于0，2，4，6，8 h 按“2.1”項下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，求得樟腦、桉油精峰面積與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值的標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 分別為0.7%、0.8%，結(jié)果表明樟腦、桉油精在8 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6.5 重復(fù)性試驗 取同一批樣品5 份，按照“供試品溶液制備”項下方法制備供試品溶液，分別吸取各供試品溶液1 μL，按“2.1”項下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，求得樟腦、桉油精峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值的標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 分別為1.8%、2.1%。

2.6.6 加樣回收率試驗 精密量取5 份含量已知的同一批號樣品(樟腦的含量為22.97 mg·mL-1、桉油精含量為7.86 mg·mL-1)溶液各0.2 mL，置于10 mL 量瓶中，分別精密加入樟腦對照品溶液 (濃度為1.374 mg·mL-1)3.0 mL、加入桉油精對照品溶液 (濃度為2.493 mg·mL-1)0.3 mL、加入內(nèi)標(biāo)液0.2 mL，加70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取各溶液1 μL，按“2.1”項下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)求得樟腦的平均加樣回收率為98.3%，RSD 為1.9%，桉油精的平均加樣回收率為97.6%，RSD 為2.1%。

2.7 樣品測定 取各批號樣品，按照“供試品溶液制備”項下方法制備供試品溶液，分別吸取各供試品溶液1 μL，按“2.1”項下色譜條件注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，求得樟腦、桉油精的含量結(jié)果見表1。

表1 十滴水中樟腦、桉油精含量測定結(jié)果

3 討 論

結(jié)合目前氣相色譜應(yīng)用的實踐情況，本文選用了程序升溫法同時測定兩種物質(zhì)的含量，使教學(xué)與實踐緊密結(jié)合，若考慮實驗成本也可以采用程序升溫法測定其中一個成分的含量。實驗用藥選用十滴水，價格便宜，配制樣品采用70%乙醇為溶劑，操作方便、無污染。

本實驗分別考察了DB-WAX 毛細管色譜柱及SE-54毛細管氣相色譜柱，結(jié)果顯示在DB-WAX 毛細管色譜柱上分離效果不佳，而在SE-54 毛細管氣相色譜柱上獲得了良好的分離效果，因此選用SE-54 為測定用柱。

本實驗分別考察了以環(huán)己酮、水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物，結(jié)果顯示樣品陰性液在水楊酸甲酯出峰處有干擾，因此選用環(huán)己酮為內(nèi)標(biāo)物。本方法采用的色譜條件與中國藥典中十滴水的測定條件不同，但對樣品的含量檢測結(jié)果準(zhǔn)確度較高，結(jié)果符合藥典的相關(guān)要求，對科研教學(xué)具有一定的參考意義。

圖1 溶劑乙醇氣相色譜圖

圖2 環(huán)己酮氣相色譜圖

圖3 樟腦、桉油精對照品氣相色譜圖

圖4 十滴水樣品氣相色譜圖

圖5 樟腦桉油精陰性液氣相色譜圖

［1］盧華，張國宏，蔣受軍，等.氣相色譜法測定十滴水中樟腦和桉油精含量的研究［J］.中成藥，2008，30 (7):997-999.

［2］中國藥典2010 年版一部［S］.2010:301.

［3］王術(shù)玲，曾元兒，張迪，等.《中藥制劑分析》氣相色譜法含量測定的實驗教學(xué)改進［J］.中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2010，8 (23):43-44.

［4］王燕，張雅慧，格桑索朗，等.毛細管氣相色譜內(nèi)標(biāo)法同時測定藏木香中土木香內(nèi)酯、異土木香內(nèi)酯的含量［J］.藥物分析雜志，2009，29 (12):2058-2060.

［5］靳然，于密密，趙百孝，等.氣相色譜法測定艾葉4 個揮發(fā)性成分的含量［J］.藥物分析雜志，2013，33 (6):1033-1036.