王 瑞，劉 濤，馮艷麗，曲哲會(huì)，趙 瑜，酒雅麗

（1.信陽(yáng)農(nóng)林學(xué)院動(dòng)科系，河南 信陽(yáng) 464000；2.駐馬店正大動(dòng)保中心，河南 駐馬店 463000；3.信陽(yáng)市畜產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心，河南 信陽(yáng) 464000）

自2010年以后，豫南地區(qū)養(yǎng)殖場(chǎng)使用的圓環(huán)疫苗既有國(guó)產(chǎn)亦有進(jìn)口產(chǎn)品，為分析掌握豬圓環(huán)疫苗的免疫狀況,我們與駐馬店正大公司合作，自2011年10月-2012年12月利用武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司的豬圓環(huán)病毒抗體酶聯(lián)免疫試驗(yàn)檢測(cè)試劑盒,對(duì)位于河南南部的信陽(yáng)與駐馬店地區(qū)的規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)送檢的血樣進(jìn)行豬圓環(huán)病毒抗體水平的檢測(cè),并按被檢豬場(chǎng)免疫狀況進(jìn)行分類(lèi)和比較。

1 材料與方法

1.1 試劑及設(shè)備 豬圓環(huán)抗體ELISA檢測(cè)試劑盒,購(gòu)自武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司。試劑盒內(nèi)含有預(yù)包被板、酶結(jié)合物、洗滌液、樣本稀釋液、底物、顯色劑、終止液、陰性對(duì)照品、陽(yáng)性對(duì)照品。

DHG-9241A型電熱恒溫干燥箱：成都普龍科學(xué)儀器有限公司。

LDZX-50KBS型不銹鋼全自動(dòng)數(shù)顯立式高壓蒸汽滅菌器：上海申安醫(yī)療器械廠。

DG5031酶標(biāo)儀：南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司。

Eppendorf單道可調(diào)移液器(10μL ，200μL)購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司。

1.2 被檢血清 來(lái)自信陽(yáng)市浉河區(qū)、平橋區(qū)、羅山縣、潢川縣、息縣和駐馬店市驛城區(qū)、確山縣、平輿縣、正陽(yáng)縣、上蔡縣、遂平縣、西平縣、汝南縣、泌陽(yáng)縣、新蔡縣。從2011年10月-2012年12月，其中信陽(yáng)地區(qū)檢測(cè)母豬73份，仔豬91份。駐馬店地區(qū)母豬509份，仔豬229份，共計(jì)902份。

1.3 ELISA檢測(cè)方法

1.3.1 操作步驟 用稀釋好的洗滌液洗板2次（200 μL/孔）每次靜置2 min后倒掉，再在干凈吸水紙上拍干；取稀釋好的待檢樣品100 μL加入到檢測(cè)板中；陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各設(shè)2孔，每孔100 μL；輕輕振勻孔中樣品，置37℃溫育30 min；甩掉板孔中的溶液，用洗滌液洗板3次，200 μL/孔，每次靜置3 min倒掉，再在干凈吸水紙上拍干；每孔加羊抗豬酶標(biāo)二抗100 μL，置37℃溫育30 min；洗滌5次，方法同3。切記每次在干凈吸水紙上拍干;每孔先加底物液A 1滴（50 μL）、再加底物液B 1滴（50 μL），混勻，室溫（18℃～25℃）避光顯色10 min。每孔加終止液1滴（50 μL），10 min內(nèi)測(cè)定結(jié)果。

1.3.2 結(jié)果判定 在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔OD630值。試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630值大于或等于1.0，陰性對(duì)照孔平均OD630值必須小于0.3。樣品OD630值大于0.42，判為陽(yáng)性；樣品OD630值在0.38到0.42之間，判為可疑；樣品OD630值小于0.38，判為陰性。

2 結(jié)果

見(jiàn)表1～4。

表1 免疫豬場(chǎng)陽(yáng)性率

表2 未免疫豬場(chǎng)感染率

表3 免疫豬場(chǎng)抗體檢測(cè)值分布

表4 未免疫豬場(chǎng)抗體檢測(cè)值分布

3 分析與討論

3.1 應(yīng)用ELISA檢測(cè)方法對(duì)河南省南部地區(qū)部分規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，檢測(cè)結(jié)果表明,在免疫過(guò)PCVⅡ疫苗的豬場(chǎng)：母豬陽(yáng)性率為82.01%，保育仔豬陽(yáng)性率為71.08%，總陽(yáng)性率為78.74%。

3.2 未免疫過(guò)PCVⅡ疫苗的豬場(chǎng)：母豬感染率為83.65%，保育仔豬陽(yáng)性率為81.90%，總感染率為82.73%。

3.3 從抗體檢測(cè)值看，免疫過(guò)PCVⅡ疫苗的豬場(chǎng)內(nèi)：后備母豬在中等抗體水平（0.42＜OD值＜1）占40%，在較高保護(hù)水平（OD值＞1）占27.5%；經(jīng)產(chǎn)母豬在中等抗體水平者（0.42＜OD值＜1）占14.61%，在較高保護(hù)水平者（OD值＞1）占74.54%。保育仔豬在中等抗體水平者（0.42＜OD值＜1）占22.06%，在較高保護(hù)水平者（OD值＞1）占29.41%。

3.4 從抗體檢測(cè)值看，未免疫過(guò)PCVⅡ疫苗的豬場(chǎng)內(nèi)：后備母豬中等程度感染（0.42＜OD值＜1）占46.15%，嚴(yán)重感染者（OD值＞1）占23.07%；經(jīng)產(chǎn)母豬中等程度感染（0.42＜OD值＜1）占27.47%，嚴(yán)重感染者（OD值＞1）占58.24%；保育仔豬中等程度感染（0.42＜OD值＜1）占24.14%，嚴(yán)重感染者（OD值＞1）占57.76%.

從檢測(cè)結(jié)果可知，當(dāng)前在豫南地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)如接種過(guò)PCVⅡ疫苗，經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體水平及保護(hù)率要明顯高于后備母豬，這可能是市場(chǎng)上該疫苗品種主要是亞單位和滅活苗的原因，需要多次免疫，才能誘導(dǎo)產(chǎn)生高抗體水平。由于后備母豬的圓環(huán)病毒疫苗抗體水平較低，一胎仔豬圓環(huán)病毒感染風(fēng)險(xiǎn)較高。保育仔豬從此次調(diào)查結(jié)果看，免疫合格率較低，只有51.47%。

在未免疫圓環(huán)疫苗的豬場(chǎng)內(nèi)，后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬的感染率均較高，尤其是經(jīng)產(chǎn)母豬達(dá)到58.24%，說(shuō)明在豬場(chǎng)內(nèi)多胎母豬隨著飼養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，感染的機(jī)率也隨之升高，應(yīng)適時(shí)淘汰。保育仔豬的感染率高達(dá)81.9%。

總體來(lái)看，作為河南省重要的生豬養(yǎng)殖地區(qū)，駐馬店和信陽(yáng)兩地規(guī)模化豬場(chǎng)圓環(huán)疫苗免疫場(chǎng)經(jīng)產(chǎn)母豬抗體合格率較高，但在后備母豬和保育豬階段豬群抗體合格率偏低。而不免疫圓環(huán)疫苗的豬場(chǎng)各階段圓環(huán)病毒感染率較高。

現(xiàn)在市面上的所有PCVⅡ疫苗都能有效的降低PCVⅡ感染豬場(chǎng)中臨床疾病的發(fā)生，提高豬群生產(chǎn)指數(shù)。雖然疫苗免疫接種并不能夠完全防PCVⅡ的感染和傳播，但是能夠極大的降低毒血癥、系統(tǒng)水平的病毒含量和病毒的外排，從而降低環(huán)境中的病毒含量。

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