吳 翔，黃忠乾，苗人云，鄭林用，甘炳成，周 潔，謝麗源，彭衛(wèi)紅，譚 偉，唐利民

(四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院土壤肥料研究所，四川 成都 610066)

接種箱是目前大多數(shù)食用菌栽培接種過程中必需的設(shè)備，接種箱內(nèi)空氣中雜菌孢子或微生物菌體數(shù)量直接影響到接種后培養(yǎng)物的純菌率[1]。通過對接種箱的消毒，讓箱內(nèi)達(dá)到無菌或低菌狀態(tài)，從而減少菌袋的污染機(jī)率。因此，接種箱的消毒過程是食用菌生產(chǎn)的重要環(huán)節(jié)，選擇較好的消毒劑關(guān)系到整個(gè)食用菌生產(chǎn)的成敗。

毛木耳 (Auricularia polytricha)是黃背木耳和白背木耳等的總稱，是我國主要栽培和重要出口的食用菌種類。毛木耳屬于擔(dān)子菌亞門、層菌綱、木耳科、木耳屬，其營養(yǎng)成分與黑木耳相似，具有清肺益氣、止痛活血的功效。毛木耳粗纖維含量較高，這些纖維素對人體內(nèi)許多營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收和代謝有很好的促進(jìn)作用[2，3]。本實(shí)驗(yàn)就不同消毒劑對接種箱的滅菌效果，以及對毛木耳菌袋的污染情況作了相關(guān)研究，將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 不同消毒方式

處理1:甲醛16 mL和高錳酸鉀10 g;處理2:氣霧消毒劑16 g;CK:不消毒。各處理重復(fù)2次。

1.2 布點(diǎn)方法

布點(diǎn)的設(shè)置參考《室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》 (GB/T18883－2002)的要求進(jìn)行[4]。接種箱內(nèi)徑為長1.5 m、寬0.9 m，共1.35 m2，面積≤30 m2，采取1條對角線上取3點(diǎn)的方法布點(diǎn)。

1.3 培養(yǎng)基

細(xì)菌培養(yǎng)基[4]:蛋白胨 10 g、牛肉浸膏 3 g、NaCl 5 g、瓊脂18 g，蒸餾水1 000 mL，pH7.2～7.4，121℃滅菌30 min。

真菌培養(yǎng)基:KH2PO41.0 g、MgSO4·7H2O 0.5 g、葡萄糖10.0 g、蛋白胨5.0 g、1%孟加拉紅水溶液3.3 mL、氯霉素0.1 g、瓊脂18.0 g，蒸餾水1 000 mL，121℃滅菌30 min。

1.4 采樣方法

采用自然沉降法采集樣品。各點(diǎn)設(shè)3次重復(fù)，同時(shí)設(shè)置空白對照 (同采樣皿一起放入采樣點(diǎn)，不開皿蓋)。用直徑9 cm的普通營養(yǎng)瓊脂平板在采樣點(diǎn)打開，準(zhǔn)確暴露空氣中5 min，加蓋后立即送實(shí)驗(yàn)室，培養(yǎng)箱28℃培養(yǎng)，細(xì)菌培養(yǎng)24 h～36 h，真菌培養(yǎng)3 d～5 d。

1.5 菌落數(shù)計(jì)數(shù)方法

奧梅梁斯基公式進(jìn)行計(jì)算每立方米空氣中細(xì)菌總數(shù) (C，cfu·m－3)[4，6]，公式為:

式中:A為平皿面積 (cm2);T為平板暴露時(shí)間 (min);N為平均菌落數(shù) (cfu)。殺菌率 (P)公式為:

式中:N1為CK菌落數(shù);N2為處理菌落數(shù)。

1.6 菌袋污染情況記錄

分別在不同消毒劑后接種450袋菌袋，在第50天、第60天記錄菌袋的污染數(shù)量，計(jì)算污染率。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒劑對接種箱內(nèi)微生物數(shù)量的影響

細(xì)菌和真菌空白對照均無菌體檢出，計(jì)算2次重復(fù)各數(shù)據(jù)平均值，結(jié)果見圖1。

從圖1可以看出，接種箱內(nèi)不進(jìn)行消毒的對照CK，其細(xì)菌和真菌數(shù)量都明顯多于消毒后各處理的數(shù)量，證明實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的消毒劑對減少接種箱內(nèi)細(xì)菌和真菌具有一定的效果。而在2種消毒劑中，甲醛和高錳酸鉀配制的消毒劑殺滅接種箱內(nèi)細(xì)菌和真菌效果好于氣霧消毒劑，其中處理1可使接種箱中細(xì)菌數(shù)量降到26.5 cfu·m－3，真菌數(shù)量降到1.0 cfu·m－3，對細(xì)菌和真菌的殺菌率分別為96.5%和95.6%;而處理2能使接種箱中的細(xì)菌含量數(shù)量降為170 cfu·m－3，真菌的數(shù)量降到2.6 cfu·m－3，對細(xì)菌和真菌的殺菌率分別為77.5%和88.7%。

2.2 不同消毒劑對接種菌袋污染情況的影響

接種箱每次經(jīng)過不同消毒處理后，接種毛木耳菌袋450袋，在發(fā)菌第50天和第60天記錄菌袋的污染數(shù)量，由于第60天后菌袋即上架出耳，因此，所計(jì)算污染率針對的是發(fā)菌過程中毛木耳菌袋，結(jié)果見表1。

表1 不同消毒劑對接種毛木耳菌袋的污染情況的影響

由表1可知，在接種箱中經(jīng)過甲醛和高錳酸鉀配制的消毒劑消毒過后，接種的毛木耳菌袋污染率最低，僅有1.22%的菌袋被污染，而氣霧消毒劑消毒過后接種的毛木耳菌袋污染率是9.22%，沒經(jīng)過消毒的對照處理接種的毛木耳菌袋污染率是37.44%，在3個(gè)處理中污染率最高。

3 小結(jié)

甲醛和高錳酸鉀配制的消毒劑以及氣霧消毒劑是食用菌接種過程中常用的2種消毒劑，盡管如此，較少見關(guān)于此兩種消毒劑在接種箱中殺菌效果及其對毛木耳菌袋污染情況的報(bào)道。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，經(jīng)過不同消毒劑消毒后對接種箱內(nèi)的殺菌效果明顯好于不進(jìn)行消毒的對照。甲醛和高錳酸鉀配制的消毒劑對殺滅接種箱中的細(xì)菌和真菌有較好的效果，使用此種消毒劑殺菌后接種的毛木耳菌袋污染率也最低，說明該消毒劑殺菌效果良好，具有較好的應(yīng)用價(jià)值。而利用氣霧消毒劑殺菌的處理殺滅接種箱中細(xì)菌和真菌的效果以及降低該處理后毛木耳菌袋污染率方面的效果均次之。

[1]胡四新.接種箱污染及其防治 [J].中國食用菌，2007，26(2):59.

[2]卯曉嵐.中國大型真菌 [M].鄭州:河南科學(xué)技術(shù)出版社，2000.

[3]袁明生，孫培瓊.四川蕈菌[M].成都:四川科學(xué)技術(shù)出版社，1995.

[4]GB/T18883－2002.《室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》[S].

[5]趙斌，何紹江.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京:科學(xué)出版社，2002.

[6]戴景林.評空氣微生物平板采樣的奧梅梁斯基換算式 [J].環(huán)境與健康雜志，1994，11(1):173－176.