劉劍+閆建坤

[摘要] 目的 建立天麻素氯化鈉注射液的質(zhì)量標準。 方法 采用紫外-可見分光光度法測定處方中天麻素的含量。 結(jié)果 由紫外掃描可知天麻素在220 nm波長處有最大吸收，而氯化鈉及其他輔料在220 nm處幾乎無吸收，不干擾本試驗。 結(jié)論 采用紫外-可見分光光度法，方法操作簡單，準確可靠，重復(fù)性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質(zhì)量控制方法。

[關(guān)鍵詞] 天麻素氯化鈉注射液；質(zhì)量標準；紫外-可見分光光度法

[中圖分類號] R927.11 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）10（c）-0008-04

天麻素注射液[1-5]主要成分為名貴藥材天麻[6-9]的有效單體天麻素，具有鎮(zhèn)靜，抗驚厥，抗癲癇，鎮(zhèn)痛，增加腦血流量，改善椎-基底動脈、小腦前下動脈、小腦后下動脈、密路動脈及內(nèi)耳供血不足，保護神經(jīng)細胞，促進心肌細胞能量代謝的功能，臨床上被廣泛應(yīng)用于眩暈[10-15]（梅尼埃病、藥毒性眩暈、前庭神經(jīng)元炎、椎-基底動脈供血不足等）、神經(jīng)痛（三叉神經(jīng)痛、坐骨神經(jīng)痛、枕大神經(jīng)痛等）、頭痛（神經(jīng)衰弱及神經(jīng)衰弱綜合征、血管性頭痛、緊張性頭痛、腦外傷綜合征、偏頭痛等）及癲癇的輔助治療。本試驗采用紫外-可見分光光度法對制劑中所含的天麻素進行含量測定。

1 儀器與試藥

UV-754紫外分光光度計（上海電子光學(xué)技術(shù)研究所）；天麻素氯化鈉注射液供試品由內(nèi)蒙古自治區(qū)紅十字會包頭朝聚眼科醫(yī)院制劑室生產(chǎn)：規(guī)格100 ml，天麻素0.2 g與氯化鈉0.9 g（批號為110106、110107、110108）；對照品天麻素由中國藥品生物制品鑒定所提供：規(guī)格20 mg，批號110807-201104。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀

取本品目檢，結(jié)果3批樣品性狀均為無色澄明液體。

2.2 鑒別

①本品為以氯化鈉為溶劑的注射液，參照氯化鈉注射液項下的鑒別操作如下：取本品適量，加稀硝酸使成酸性后，滴加硝酸銀試液，即生成白色凝乳狀沉淀；分離，沉淀加氨試液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀復(fù)生成。取處方中除氯化鈉外的樣品適量，同法操作，溶液澄清無沉淀。取本品適量，置試管中，加等量的二氧化錳，混勻，加硫酸濕潤，緩緩加熱，即發(fā)生氯氣，能使用水濕潤的碘化鉀淀粉試紙顯藍色。3批樣品均呈正反應(yīng)。取處方中除氯化鈉外的樣品適量，同法操作，無氣體產(chǎn)生。

②參照天麻素的質(zhì)量標準，取本品適量（相當于天麻素10 mg），加熱揮至快干，加硫酸2 ml，溶液呈櫻桃紅色。取氯化鈉溶液及輔料適量，同法操作，結(jié)果可見3批樣品的鑒別1及鑒別2均呈正反應(yīng)（表1）。

③天麻素注射液采用紅外鑒別，考慮到本品為注射劑，紅外鑒別易受輔料的干擾，而天麻素的分子結(jié)構(gòu)中有特殊的紫外發(fā)色團-苯環(huán)，故考慮將其特征紫外吸收作為一項鑒別，具體操作如下：取含量測定項下的溶液，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄ⅣA）測定3批樣品及對照品的最大吸收波長。3批樣品均為λmax1=220 nm，λmax2=269 nm，在220、269 nm波長處有最大吸收（表1）。

2.3 檢查

參照中國藥典2010年版二部的有關(guān)規(guī)定，對本品進行pH值、溶液的澄清度與顏色、可見異物、不溶性微粒、裝量、細菌內(nèi)毒素、無菌等項目的檢查。

2.3.1 pH值

取本品，依法測定pH值（中國藥典2010年版二部附錄Ⅵ H），結(jié)果3批樣品pH值為5.7、5.8、5.7。本品pH值均在5.0～6.0范圍內(nèi)，考慮到人體的耐受性和生產(chǎn)的可控性，將本品的pH值定為：5.0～7.0。

2.3.2 不溶性微粒

取本品，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅸ C），結(jié)果3批樣品不溶性微粒檢查均符合規(guī)定。

2.3.3 可見異物

取本品，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅸ H），結(jié)果3批樣品可見異物檢查均符合規(guī)定。

2.3.4 裝量

取本品，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅹ F），結(jié)果3批樣品裝量檢查均符合規(guī)定。

2.3.5 重金屬

取本品20 ml，加醋酸鹽緩沖液（pH值3.5）2 ml與水使成25 ml，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅷ H第一法），結(jié)果三批樣品重金屬檢查均<10/1000萬。

2.3.6 細菌內(nèi)毒素

2.3.6.1 限值確定 參考中國藥典2010年版二部氯化鈉注射液質(zhì)量標準中對細菌內(nèi)毒素的限值規(guī)定為0.5 EU/ml，因此本品的限值定為0.5 EU/ml。

2.3.6.2 干擾試驗 取供試品，用上述兩個廠家的鱟試劑進行干擾試驗（照中國藥典2010年版二部附錄ⅪE項下方法進行），結(jié)果天麻素氯化鈉注射液對鱟試劑的凝集反應(yīng)無增強或抑制作用，不干擾測定。

2.3.6.3 供試品細菌內(nèi)毒素檢查 供試品溶液的制備：取本品，照細菌內(nèi)毒素檢查法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅺ E）進行測定，3批樣品細菌內(nèi)毒素均<0.5 EU/ml，訂入質(zhì)量標準。

2.3.7 無菌

取本品，照薄膜過濾法，依法檢查（中國藥典2010年版二部附錄Ⅺ H），結(jié)果3批樣品無菌檢查均符合規(guī)定。

2.4 含量測定

參考國家藥品標準天麻素注射液（WS1-XG-023-2001）和中國藥典2010年版二部“氯化鈉注射液”，對本品中的天麻素和氯化鈉進行含量測定。

2.4.1 天麻素含量測定方法

照天麻素注射液（WS1-XG-023-2001），用紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅳ A）測定。

2.4.1.1 檢測波長的選擇 取天麻素原料適量，加0.9%的氯化鈉溶液溶解并稀釋至16 μg/ml，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅳ A）測定。由紫外掃描圖可知，本品在220 nm與269 nm波長處有最大吸收波長。參照天麻素注射液（WS1-XG-023-2001），將本試驗的檢測波長定為220 nm。

2.4.1.2 氯化鈉及其他輔料的干擾 取處方中除天麻素外的等比例的輔料適量，照紫外-可見分光光度法（中國藥典2010年版二部附錄Ⅳ A）測定。由紫外掃描圖可知，氯化鈉及其他輔料在220 nm處幾乎無吸收，不干擾本試驗。

2.4.1.3 線性關(guān)系試驗 取天麻素對照品16.2 mg，精密稱定，置50 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1、2、4、5、8 ml，分置100 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，取上述5種溶液照分光光度法（中國藥典2005年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，以其吸收度（A）為縱坐標，其濃度（C）為橫坐標，進行線性回歸，回歸方程A=1868.2C+1049.9，結(jié)果表明r為0.9998，天麻素在3.24～25.92 μg/ml濃度范圍內(nèi)與吸收度呈良好的線性關(guān)系。

2.4.1.4 穩(wěn)定性試驗 取本品適量（約相當于天麻素200 mg），置250 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。于室溫下放置8 h，分別于0、1、2、4、6、8h測定，取供試品溶液照分光光度法（中國藥典2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，考察樣品含量穩(wěn)定性，結(jié)果表明8 h內(nèi)測定方法穩(wěn)定。

2.4.1.5 精密度試驗 取110106批樣品適量（約相當于天麻素200 mg），置250 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。取供試品溶液照分光光度法（中國藥典2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，連續(xù)測定6次，結(jié)果表明本法精密度良好，天麻素的RSD為0.16%。

2.4.1.6 回收率試驗 精密稱取天麻素約為12、16、19 mg（每組稱取3個平行樣），分置100 ml量瓶中，按處方量加入輔料，加0.9%的氯化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，各精密移取2 ml分置25 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取經(jīng)105℃減壓干燥3 h的天麻素對照品適量，按同法制成每毫升中含16 μg的溶液，作為對照品溶液，取供試品溶液及對照品溶液，照分光光度法（中國藥典2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，結(jié)果表明本品天麻素含量測定回收率良好（表2）。

2.4.1.7 含量測定 精密量取本品20 ml，置250 ml量瓶中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，即制得供試品溶液。另精密稱取經(jīng)105℃減壓干燥3 h的天麻素對照品適量，加0.9%的氯化鈉溶液制得每毫升中含16 μg的溶液，作為對照品溶液，取上述兩種溶液照分光光度法（中國藥典2010年版藥典二部附錄Ⅳ A），以0.9%的氯化鈉溶液為空白，在220 nm波長處測定吸收度，計算本品中天麻素的含量，結(jié)果3批樣品天麻素含量為101.47%、100.26%、102.01%。以上數(shù)據(jù)表明，3批樣品天麻素含量均在90.0%～110.0%范圍內(nèi)，訂入質(zhì)量標準。

2.4.2 氯化鈉

取本品，照中國藥典2010年版“氯化鈉注射液”含量測定方法對本品的氯化鈉進行含量測定。

2.4.2.1 測定方法 精密量取本品10 ml，置100 ml錐形瓶中，加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。每毫升的硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）相當于5.844 mg的氯化鈉。

2.4.2.2 天麻素及輔料的干擾試驗 取處方中除氯化鈉外的其他組分10 ml，加水40 ml溶解并稀釋至刻度，2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。所耗硝酸銀滴定液的量為0.01 ml，表明天麻素及輔料在此試驗中幾乎無干擾。

2.4.2.3 線性關(guān)系試驗 取氯化鈉約1.4023 g，置100 ml的潔凈量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1、2、4、5、8 ml，置不同的100 ml量瓶中，加水稀釋至刻度，精密量取上述溶液10 ml，置不同的100 ml錐形瓶中，加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定?？鄢瞻?，以滴定體積為縱坐標，氯化鈉濃度為橫坐標，進行線性回歸，結(jié)果r為0.9999，表明氯化鈉在70.4～105.6 mg范圍內(nèi)與滴定體積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2.4 重復(fù)性試驗 取本品（批號：110106），照上述方法重復(fù)測定6次含量，結(jié)果表明，本法重復(fù)性較好，氯化鈉的RSD=0.10%。

2.4.2.5 回收率試驗 取氯化鈉為72、90、108 mg（每組稱取3個平行樣），分置100 ml錐形瓶中，按處方量加入天麻素及輔料，加水20 ml溶解，再加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。扣除空白，計算回收率。結(jié)果可見氯化鈉回收率良好（表3）。

2.4.2.6 樣品測定 精密量取本品10 ml，置100 ml錐形瓶中，加水40 ml、2%糊精溶液5 ml與熒光黃指示劑5～8滴，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定，計算氯化鈉的含量。每毫升硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）相當于5.844 mg的氯化鈉。結(jié)果3批樣品氯化鈉含量為101.25%、102.00%、100.41%，表明3批樣品氯化鈉含量均在90.0%～110.0%范圍內(nèi)，訂入質(zhì)量標準。

3 討論

參照“天麻素注射液”國家標準（WS1-XG-023-2001）中含量測定項，對天麻素的含量測定方法進行設(shè)計并經(jīng)方法學(xué)驗證可行；參照中國藥典2010年版氯化鈉注射液標準，對本品的氯化鈉進行含量測定方法設(shè)計，并經(jīng)方法學(xué)驗證可行，方法操作簡單，準確可靠，重復(fù)性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質(zhì)量控制方法。

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[15] 韓增燦，曹秀蘭.天麻素注射液治療眩暈癥76例療效觀察[J].右江醫(yī)學(xué)，2001，29（5）：444.

（收稿日期：2014-08-11 本文編輯：李亞聰）

3 討論

參照“天麻素注射液”國家標準（WS1-XG-023-2001）中含量測定項，對天麻素的含量測定方法進行設(shè)計并經(jīng)方法學(xué)驗證可行；參照中國藥典2010年版氯化鈉注射液標準，對本品的氯化鈉進行含量測定方法設(shè)計，并經(jīng)方法學(xué)驗證可行，方法操作簡單，準確可靠，重復(fù)性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質(zhì)量控制方法。

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（收稿日期：2014-08-11 本文編輯：李亞聰）

3 討論

參照“天麻素注射液”國家標準（WS1-XG-023-2001）中含量測定項，對天麻素的含量測定方法進行設(shè)計并經(jīng)方法學(xué)驗證可行；參照中國藥典2010年版氯化鈉注射液標準，對本品的氯化鈉進行含量測定方法設(shè)計，并經(jīng)方法學(xué)驗證可行，方法操作簡單，準確可靠，重復(fù)性好，可作為天麻素氯化鈉注射液的質(zhì)量控制方法。

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[15] 韓增燦，曹秀蘭.天麻素注射液治療眩暈癥76例療效觀察[J].右江醫(yī)學(xué)，2001，29（5）：444.

（收稿日期：2014-08-11 本文編輯：李亞聰）