黃建新+黃建平+張旸+張黎仙+楊坤榮+陳清泉

[摘要] 目的 了解福建漢族人群肽酰脯氨?；?lè)串悩?gòu)酶1（Pin1）基因rs2233678（-842G/C）和rs2233679（-667T/C）多態(tài)性分布規(guī)律及其與肺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。 方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)，對(duì)80例漢族肺癌患者和135例健康對(duì)照的Pin1基因啟動(dòng)子進(jìn)行擴(kuò)增并對(duì)PCR產(chǎn)物直接測(cè)序，分析Pin1基因啟動(dòng)子多態(tài)性與肺癌易感性及其臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。 結(jié)果 rs2233678位點(diǎn)只檢測(cè)到GG和GC兩種基因型，沒(méi)有檢測(cè)到CC基因型。rs2233678和rs2233679位點(diǎn)的等位基因和基因型分布在肺癌組和健康對(duì)照組中比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；其組成的單體型C-C、G-C和G-T均與肺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)無(wú)相關(guān)性（P>0.05），rs2233678的基因型分布與肺癌的臨床病理學(xué)特征無(wú)相關(guān)性（P>0.05），rs2233679的基因型分布與肺癌病理類型呈弱相關(guān)（r=0.285，P=0.010）。 結(jié)論 rs2233678和rs2233679多態(tài)性可能與福建漢族人群肺癌易感性無(wú)關(guān)，rs2233679的基因型分布與肺癌病理類型有一定的相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞] 肺癌；肽酰脯氨?；?lè)串悩?gòu)酶1；多態(tài)性；易感性

[中圖分類號(hào)] R734.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）10（c）-0004-04

肽酰脯氨?；?lè)串悩?gòu)酶1（peptidyl-prolyl cis-trans isomerase NIMA-interacting 1，Pin1）是一種高度保守、特異的肽脯氨酰基順?lè)串悩?gòu)酶，能特異性地催化磷酸化絲/蘇-脯氨酸基序發(fā)生順?lè)串悩?gòu)，影響許多癌基因信號(hào)通路中β-catenin[1]、NF-кB[2]等關(guān)鍵蛋白的活性和穩(wěn)定性，在細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[3]，被認(rèn)為是一種新的腫瘤預(yù)后因子和抗癌治療的靶標(biāo)[3-6]。Pin1基因多態(tài)性的研究主要集中在啟動(dòng)子區(qū)的-842G/C（rs2233678）和-667T/C（rs2233679）兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)上。流行病學(xué)研究顯示，Pin1基因多態(tài)性與乳腺癌、肝癌、肺癌、食管癌、頭頸部鱗癌及喉部鱗癌等多種腫瘤易感性密切相關(guān)，但研究結(jié)果存在明顯的分歧：有些研究者認(rèn)為，-842G/C的C基因變異是腫瘤發(fā)生的保護(hù)因子，可以降低亞洲人和白種人群頭頸部鱗癌、肺癌和乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)[7-11]；有些研究顯示，-667T基因可以明顯降低亞洲人群的腫瘤易感性[8]；還有研究認(rèn)為-842G/C[12]和-667T/C[7，10-12]與腫瘤的易感性無(wú)關(guān)。至今仍未見Pin1基因多態(tài)性與福建地區(qū)漢族人群肺癌易感性的報(bào)道，因此，為明確Pin1基因多態(tài)性與肺癌易感性和臨床病理特征的關(guān)系，本研究對(duì)福建漢族肺癌患者Pin1基因的rs2233678（-842G/C）和rs2233679（-667T/C）多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行分析。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年7～12月在本院住院并手術(shù)確診的80例肺癌患者作為肺癌組，其中男性52例（65.0%），女性28例（35.0%）；平均年齡為（59.1±11.8）歲；腺癌54例（67.5%），鱗癌17例（21.3%），其他類型肺癌9例（11.2%）。同時(shí)選取同期135例體檢正常者作為健康對(duì)照組，其中男性79例（58.5%），女性56例（41.5%）；平均年齡為（57.6±11.3）歲。兩組的年齡、性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有研究對(duì)象均為出生并長(zhǎng)期生活在福建地區(qū)的漢族人。

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 基因組DNA抽提 知情同意后，取患者及健康對(duì)照外周靜脈血2 ml，EDTA抗凝。所有標(biāo)本置入-20℃保存?zhèn)溆没蛄⒓窗丛噭┖胁僮鞑襟E進(jìn)行DNA提取。全血基因組DNA抽提試劑盒由北京康為世紀(jì)生物科技有限公司提供。

1.2.2 PCR引物及PCR反應(yīng) 應(yīng)用Primer 5.0軟件自行設(shè)計(jì)引物，上游引物：5′-AGGGTTCTATGCTAGGTGAACTG-3′；下游引物：5′-TATTGGCTAGACGCGCTCTG-3′（生工生物工程上海股份有限公司合成），該引物擴(kuò)增產(chǎn)物為919 bp，包含Pin1基因啟動(dòng)子區(qū)-842G/C（rs2233678）和-667T/C（rs2233679）區(qū)域。根據(jù)文獻(xiàn)[13]配制PCR反應(yīng)體系，在ABI 2720型PCR儀上95℃預(yù)變性5 min后，進(jìn)行95℃ 30 s→55℃ 30 s→72℃ 1 min，循環(huán)35次，72℃再延伸10 min。1.5%的瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。

1.2.3 PCR產(chǎn)物純化和回收 使用普通瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒（天根生化科技有限公司），按使用說(shuō)明操作，進(jìn)行PCR產(chǎn)物的純化和回收。

1.2.4 測(cè)序 純化后的PCR產(chǎn)物用全自動(dòng)測(cè)序儀（ABI377型，Applied Biosystems公司）進(jìn)行測(cè)序。

1.2.5 臨床病理資料收集 收集所有肺癌患者的病理組織類型及TNM分期等資料，并記錄所有研究對(duì)象的年齡、性別等一般資料。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以x±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性強(qiáng)度采用Spearman相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Pin1基因rs2233678和rs2233679位點(diǎn)的各基因型

對(duì)80例肺癌組和135例健康對(duì)照組的Pin1基因rs2233678和rs2233679位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序分析，rs2233678位點(diǎn)只檢測(cè)到GG和GC兩種基因型，未檢測(cè)到CC基因型；rs2233679位點(diǎn)TT、TC和TT三種基因型均可檢測(cè)到。rs2233678和rs2233679位點(diǎn)的各基因型見圖1。

2.2 Pin1基因rs2233678和rs2233679基因型頻率、單體型頻率及其與肺癌易感性的關(guān)系

肺癌組和健康對(duì)照組中Pin1基因rs2233678和rs2233679位點(diǎn)基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律；rs2233678和rs2233679等位基因、基因型和單體型頻率在肺癌組和健康對(duì)照組中比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。

2.3 Pin1基因rs2233678和rs2233679基因型與肺癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

Pin1基因rs2233678基因型頻率與病理類型、TNM分期無(wú)關(guān)（P>0.05）；rs2233679基因型頻率與病理類型呈弱相關(guān)（r=0.285，P=0.010）（表2、表3）。

3 討論

Pin1基因定位于19p13，編碼含163個(gè)氨基酸殘基的核蛋白Pin1，相對(duì)分子量為18，包含兩個(gè)功能結(jié)構(gòu)域：N端的WW區(qū)和C端的肽基脯氨酰異構(gòu)酶活性區(qū)[3]。Pin1在許多腫瘤中高表達(dá)[14-15]，不僅可以引起多條腫瘤信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白的構(gòu)象變化[2]，而且影響DNA的損傷修復(fù)[16]，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

本研究首次描述了福建漢族人群Pin1基因rs2233678和rs2233679位點(diǎn)的多態(tài)性分布規(guī)律，發(fā)現(xiàn)rs2233678和rs2233679位點(diǎn)的等位基因、基因型分布及其單體型均與肺癌風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，rs2233679基因型分布與肺癌的病理類型僅呈弱相關(guān)，與Naidu等[12]對(duì)乳腺癌的研究基本一致。與本研究結(jié)果不一致的是Lu等[11]發(fā)現(xiàn)rs2233678的C基因變異明顯降低患肺癌的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)一步的功能研究發(fā)現(xiàn)C基因變異可以降低轉(zhuǎn)錄活性；Zhu等[8]發(fā)現(xiàn)rs2233679的T基因型明顯降低亞洲人的患癌易感性。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)rs2233679多態(tài)性與患癌風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)[7，11]。研究結(jié)果不一致，一方面可能是樣本量的大小不同所致，另一方面可能是不同地區(qū)的患者可能有不同的種族或遺傳背景所致[11，17]。這些差異可能會(huì)改變多態(tài)性位點(diǎn)的等位基因和基因型頻率在病例組和對(duì)照組中的分布，進(jìn)而影響多態(tài)性位點(diǎn)與患癌風(fēng)險(xiǎn)的統(tǒng)計(jì)效力，因此，有必要進(jìn)行多地區(qū)、多種族的大樣本量研究來(lái)進(jìn)一步證實(shí)Pin1基因多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系。

綜上所述，Pin1基因rs2233678和rs2233679位點(diǎn)多態(tài)性可能與福建漢族肺癌風(fēng)險(xiǎn)無(wú)關(guān)，rs2233679的基因型分布與肺癌病理類型有一定的相關(guān)性，這為Pin1多態(tài)性與腫瘤易感性的研究豐富了數(shù)據(jù)，也為無(wú)法手術(shù)的肺癌患者的病理類型推測(cè)提供了思路。當(dāng)然，由于本研究的樣本量有限，也沒(méi)有進(jìn)行rs2233678和rs2233679基因型與Pin1表達(dá)量及活性的研究，因此，有關(guān)Pin1基因多態(tài)性與肺癌易感性仍有待于進(jìn)一步深入研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Ryo A，Nakamura M，Wulf G，et al.Pin1 regulates turnover and subcellular localization of beta-catenin by inhibiting its interaction with APC[J].Nat Cell Biol，2001，3（9）：793-801.

[2] Ryo A，Liou YC，Lu KP，et al.Prolyl isomerase Pin1：a catalyst for oncogenesis and a potential therapeutic target in cancer[J].J Cell Sci，2003，116（Pt 5）：773-783.

[3] Lu KP，Zhou XZ.The prolyl isomerase PIN1：a pivotal new twist in phosphorylation signalling and disease[J].Nat Rev Mol Cell Biol，2007，8（11）：904-916.

[4] Lee TH，Pastorino L，Lu KP.Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase Pin1 in ageing，cancer and Alzheimer disease[J].Expert Rev Mol Med，2011，13：e21.

[5] Finn G，Lu KP.Phosphorylation-specific prolyl isomerase Pin1 as a new diagnostic and therapeutic target for cancer[J].Curr Cancer Drug Targets，2008，8（3）：223-229.

[6] Yoon HE，Kim SA，Choi HS，et al.Inhibition of Plk1 and Pin1 by 5′-nitro-indirubinoxime suppresses human lung cancer cells[J].Cancer Lett，2012，316（1）：97-104.

[7] Zhenzhen L，Ning S，Xianghua L.Association of rs2233678 and rs2233679 polymorphisms in the PIN1 gene with cancer risk：a meta-analysis[J].Tumour Biol，2014，35（1）：433-440.

[8] Zhu YM，Liu JW，Xu Q，et al.Pin1 promoter rs2233678 and rs2233679 polymorphisms in cancer：a meta-analysis[J].Asian Pac J Cancer Prev，2013，14（10）：5965-5972.

[9] Xu HR，Xu ZF，Sun YL，et al.The -842G/C polymorphisms of PIN1 contributes to cancer risk：a meta-analysis of 10 case-control studies[J].PLoS One，2013，8（8）：e71516.

[10] Peng JJ，Wei D，Li D，et al.Single nucleotide polymorphisms of PIN1 promoter region and cancer risk：evidence from a meta-analysis[J].PLoS One，2013，8（8）：e70990.

[11] Lu J，Yang L，Zhao H，et al.The polymorphism and haplotypes of PIN1 gene are associated with the risk of lung cancer in Southern and Eastern Chinese populations[J].Hum Mutat，2011，32（11）：1299-1308.

[12] Naidu R，Har YC，Taib NA.Analysis of peptidyl-propyl-cis/trans isomerase 1（PIN1）gene -842（G>C）and -667（T>C）polymorphic variants in relation to breast cancer risk and clinico-pathological parameters[J].Scand J Clin Lab Invest，2011，71（6）：500-506.

[13] Chen Q，Xue H，Chen M，et al.High serum trypsin levels and the -409 T/T genotype of PRSS1 gene are susceptible to neonatal sepsis[J].Inflammation，2014，37（5）：1751-1756.

[14] Bao L，Kimzey A，Sauter G，et al.Prevalent overexpression of prolyl isomerase Pin1 in human cancers[J].Am J Pathol，2004，164（5）：1727-1737.

[15] Ibanez K，Boullosa C，Tabares-Seisdedos R，et al.Molecular evidence for the inverse comorbidity between central nervous system disorders and cancers detected by transcriptomic meta-analyses[J].PLoS Genet，2014，10（2）：e1004173.

[16] Brenkman AB，de Keizer PL，van den Broek NJ，et al.The peptidyl-isomerase Pin1 regulates p27kip1 expression through inhibition of forkhead box O tumor suppressors[J].Cancer Res，2008，68（18）：7597-7605.

[17] Li Q，Dong Z，Lin Y，et al.The rs2233678 polymorphism in PIN1 promoter region reduced cancer risk：a meta-analysis[J].PLoS One，2013，8（7）：e68148.

（收稿日期：2014-08-11 本文編輯：李亞聰）

[9] Xu HR，Xu ZF，Sun YL，et al.The -842G/C polymorphisms of PIN1 contributes to cancer risk：a meta-analysis of 10 case-control studies[J].PLoS One，2013，8（8）：e71516.

[10] Peng JJ，Wei D，Li D，et al.Single nucleotide polymorphisms of PIN1 promoter region and cancer risk：evidence from a meta-analysis[J].PLoS One，2013，8（8）：e70990.

[11] Lu J，Yang L，Zhao H，et al.The polymorphism and haplotypes of PIN1 gene are associated with the risk of lung cancer in Southern and Eastern Chinese populations[J].Hum Mutat，2011，32（11）：1299-1308.

[12] Naidu R，Har YC，Taib NA.Analysis of peptidyl-propyl-cis/trans isomerase 1（PIN1）gene -842（G>C）and -667（T>C）polymorphic variants in relation to breast cancer risk and clinico-pathological parameters[J].Scand J Clin Lab Invest，2011，71（6）：500-506.

[13] Chen Q，Xue H，Chen M，et al.High serum trypsin levels and the -409 T/T genotype of PRSS1 gene are susceptible to neonatal sepsis[J].Inflammation，2014，37（5）：1751-1756.

[14] Bao L，Kimzey A，Sauter G，et al.Prevalent overexpression of prolyl isomerase Pin1 in human cancers[J].Am J Pathol，2004，164（5）：1727-1737.

[15] Ibanez K，Boullosa C，Tabares-Seisdedos R，et al.Molecular evidence for the inverse comorbidity between central nervous system disorders and cancers detected by transcriptomic meta-analyses[J].PLoS Genet，2014，10（2）：e1004173.

[16] Brenkman AB，de Keizer PL，van den Broek NJ，et al.The peptidyl-isomerase Pin1 regulates p27kip1 expression through inhibition of forkhead box O tumor suppressors[J].Cancer Res，2008，68（18）：7597-7605.

[17] Li Q，Dong Z，Lin Y，et al.The rs2233678 polymorphism in PIN1 promoter region reduced cancer risk：a meta-analysis[J].PLoS One，2013，8（7）：e68148.

（收稿日期：2014-08-11 本文編輯：李亞聰）

[9] Xu HR，Xu ZF，Sun YL，et al.The -842G/C polymorphisms of PIN1 contributes to cancer risk：a meta-analysis of 10 case-control studies[J].PLoS One，2013，8（8）：e71516.

[10] Peng JJ，Wei D，Li D，et al.Single nucleotide polymorphisms of PIN1 promoter region and cancer risk：evidence from a meta-analysis[J].PLoS One，2013，8（8）：e70990.

[11] Lu J，Yang L，Zhao H，et al.The polymorphism and haplotypes of PIN1 gene are associated with the risk of lung cancer in Southern and Eastern Chinese populations[J].Hum Mutat，2011，32（11）：1299-1308.

[12] Naidu R，Har YC，Taib NA.Analysis of peptidyl-propyl-cis/trans isomerase 1（PIN1）gene -842（G>C）and -667（T>C）polymorphic variants in relation to breast cancer risk and clinico-pathological parameters[J].Scand J Clin Lab Invest，2011，71（6）：500-506.

[13] Chen Q，Xue H，Chen M，et al.High serum trypsin levels and the -409 T/T genotype of PRSS1 gene are susceptible to neonatal sepsis[J].Inflammation，2014，37（5）：1751-1756.

[14] Bao L，Kimzey A，Sauter G，et al.Prevalent overexpression of prolyl isomerase Pin1 in human cancers[J].Am J Pathol，2004，164（5）：1727-1737.

[15] Ibanez K，Boullosa C，Tabares-Seisdedos R，et al.Molecular evidence for the inverse comorbidity between central nervous system disorders and cancers detected by transcriptomic meta-analyses[J].PLoS Genet，2014，10（2）：e1004173.

[16] Brenkman AB，de Keizer PL，van den Broek NJ，et al.The peptidyl-isomerase Pin1 regulates p27kip1 expression through inhibition of forkhead box O tumor suppressors[J].Cancer Res，2008，68（18）：7597-7605.

[17] Li Q，Dong Z，Lin Y，et al.The rs2233678 polymorphism in PIN1 promoter region reduced cancer risk：a meta-analysis[J].PLoS One，2013，8（7）：e68148.

（收稿日期：2014-08-11 本文編輯：李亞聰）